溶液配制.doc
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1、如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流溶液配制【精品文档】第 10 页实验室常用缓冲液配置方案 1TE Buffer组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0配制量:500ml配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.1)1 M Tris-HCl (pH 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L 配制方法: 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯
2、中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 加入42ml浓盐酸调节所需要的pH值。4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后,室温保存。 15)0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度:0.5 M EDTA配制量:1 L 配制方法:称取186.1 g Na2EDTA2H2O,置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。 注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1 L。 5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。 6. 室温保存。实验室常用缓冲液配置方案1
3、)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L 配制方法: 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值 浓HCl 7.4 约70ml 7.6 约60ml 8.0 约42ml 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2)10TE Buffer (pH7.4, 7.
4、6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L 配制方法: 1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。1M TrisHCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0) 100ml 500mM EDTA(PH8.0) 20ml 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。 4. 室温保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L 配制方法: 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解
5、。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M 醋酸钠 配制量:100ml配制方法: 1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。 5)PBS Buffer组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KC
6、l, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量:1 L 配制方法: 1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵 组份浓度:10 M 醋酸铵配制量:100 ml配制方法: 1. 称量77.1
7、g醋酸铵置于100200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。 注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。 7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法: 1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4保存。8)1
8、0 (W/V) SDS组份浓度:10 (W/V)SDS配制量:100ml配制方法: 1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后,室温保存。 9)2 N NaOH组份浓度:2 N NaOH配制量:100 ml配制方法: 1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。 4. 将溶液转移
9、至塑料容器中后,室温保存。10)2.5 N HCl组份浓度:2.5 N HCl配制量:100 ml配制方法: 1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 N),均匀混合。 2. 室温保存。 11)5 M NaCl组份浓度:5 M NaCl配制量:1 L 配制方法: 1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后,4保存。 11)20 (W/V) Glucose组份浓度:20 (W/V) Glucose配制量:100 ml配制方法: 1. 称取20
10、 g Glucose置于100200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 高温高压灭菌后,4保存。12)Solution I(质粒提取用)组份浓度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量:1 L 配制方法: 1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl(PH8.0) 25ml 0.5M EDTA(PH8.0) 20ml 20Glucose(1.11M) 45ml dH2O 910ml 2. 高温高压灭菌后,4保存。 3. 使用前每50 ml的Sol
11、ution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。13)Solution II(质粒提取用)组份浓度:200mM NaOH,1(W/V)SDS配制量:500ml配制方法: 1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中 10 SDS 50ml2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀 3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌14)Solution III(质粒提取用)组份浓度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量:500 ml配制方法: 1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。KOAc 147g CH3C
12、OOH 57.5ml 2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。 4. 高温高压灭菌后,4保存。15)0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度:0.5 M EDTA配制量:1 L 配制方法:称取186.1 g Na2EDTA2H2O,置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。 注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1 L。 5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。 6. 室温保存。16)1 M DTT组份浓度:1 M DTT配制量
13、:20 ml配制方法: 1. 称取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后,-20保存。17)10 mM ATP 组份浓度:10 mM ATP配制量:20 ml配制方法: 1. 称取121 mg Na2ATP3H2O,加入到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。 3. 适量分成小份后,-20保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积
14、为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇(DT
15、T):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol
16、/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中,定容到100ml。100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量
17、的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase(无DNase)(DNasefree RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5,于-20贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2
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