最新(瘦肉精)盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害.doc

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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date(瘦肉精)盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害本科生毕业设计论文内芯格式第1章 盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害1.1 盐酸克伦特罗的理化性质盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素 分子式为 C12 H19 C13 N20，相对分子质量为3135，熔点为174 175.5 ，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺 氨

2、双氯醇胺 呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。不溶于乙醚，加热到 172 才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受 100 高温，126 油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。1.2盐酸克伦特罗的主要危害对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒 通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿

3、病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病

4、、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。对动物的危害: 虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤体重27.6mg和12.6mg，但是由于它的半衰期长，在体内代谢慢，极易蓄积残留于动物体内。在动物肝脏中盐酸克伦特罗平均浓度可达45mg/kg，因而极有可能通过食物链使人体中毒而对健康构成威胁。盐酸克伦特罗的短期毒性以心肌损伤为主要特征，染毒的小鼠心肌纤维排列紊乱，部分肌纤维断裂，心血管扩张和血管周隙增大。心肌细胞横纹模糊，颗粒变性等盐酸克伦特罗可使大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著降低

5、，丙二醛含量明显升高，破坏机体氧化与抗氧化的动态平衡，并对胸腺和脾脏等免疫器官产生不同程度的病理损伤。第2章 盐酸克伦特罗主要检测方法的研究进展2.1高效液相色谱法（HPLC）-肾上腺素能激动剂分子可与C18或C8固定相分子相互作用，所以反相柱常应用于HPLC技术中检测-激动剂类物质。HPLC适合测定热不稳定和强极性的-激动剂及其代谢产物，而且可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱（MS）等系统联用，容易实现分析过程的自动化。运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243nm的检测波长下，用waters-alliance高效液相色谱系统进行检测1，流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶

6、液（35+65），最后再根据保留时间 RT 值初步定性，扫描光谱进一步确证，根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积比较进行定量。当试样取样量为2.0 g时，该法的最低检出浓度为0.25 mg/kg 。将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取，再用异丙醇、乙酸乙醋（4060）萃取，有机相浓缩后，用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨（982）溶液洗脱，洗脱液以流动相（甲醇和0.01mol/LKCl溶液以45：55的比例配合）定容后，用美国Agilent1100 高效液相色谱仪系列进行检测，检测限达0.5g/kg 。运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量2，采用了Dianon sil C18 20

7、04.6mm 的色谱柱，流 动 相 为 0.01 mol/L NaH2PO4 ：甲醇（6733），二极管阵列检测器，检测波长为243nm采用外标法，以保留时间定性，并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认，然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量 。还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化，用HPLC分离，再结合HPLC/ELISA检测、确证。目前，中国已将HPLC法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法，最低检测限范围为115ng/g，其优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程繁琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、费用昂贵。近年来，液质联用技术也被用来检测瘦肉精，这种

8、方法的准确度较高，检测灵敏度也高。2.2 气相色谱-质谱法（GC-MS）GC-MS法能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具有较高的灵敏度。用GC-MS法检测牛毛中盐酸克伦特罗的残留3，最低检测限为5ng/g。GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。GC-MS法的缺点同HPLC相似。2.3免疫分析法（IA）免疫分析法都有固定的试剂盒，因此检测结果便于把握。检测灵敏度高。检测限可达到0.5ng/ml甚至更低。而且样品前处理简单或不需要前处理，成本低，一次可以检测数百份饲料样品或十余份肝脏、肉品及尿样等。有放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附

9、测定法（ELISA）。但此类方法的缺点是仍不能实现现场检测，假阳性率高。2.3.1 酶联免疫分析目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）4。该方法检测下限一般为1.0 g/L（尿样）、0.5 g/kg（ 组织）。使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.31.0 ng/mL，组织为0.21.0 ng/mg。国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析 ；缺点是仍不能实现现场检测且该法检测结果假阳性率较高，尤其

10、当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高 。2.3.2 放射免疫分析技术用于-2 肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他 -2 肾上腺素能激动剂的交叉反应小于 10%，最低检测限可达到0.5ng/g。目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4 ng/g。放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存

11、在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。2.3.3滴金免疫技术原理通过盐酸克伦特罗 CL（或莱克多巴胺 RAC）与 CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中C或RAC）的含量。当检样中CL（或RAC）浓度低于最低检测水平时，胶体金中的抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与T线上的CL-BSA偶联物（或RAC-BSA）结合，T 线呈色与C线相近：当检样中CL（或RAC）浓度大于5 ng/mL 时，

12、抗 CL（或 RAC）单抗 -胶体金复合物与CL（或 RAC）结合T线显色比C线浅或完全看不到线，且CL（或RAC）浓度越高T线显色越浅从而作出判定。滴金免疫技术具有简便易行、快速、试剂安全、特异性高、可单份测定、不需要特殊仪器和设备等优点，且金标试剂比酶试剂更稳定，冷冻干燥后可长期保存，便于常规应用。2.3.4时间分辨荧光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是一种新型的超微量的非放射性标记免疫分析技术，它以镧系元素为标记物。时间分辨荧光免疫分析技术集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身，且克服了酶标记物的不稳定性、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰和电化学发光的非直接标记等

13、缺点，降低了非特异性信号，达到了极高的信噪比，大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、应用范围广泛等优点。因此，越来越受到人们的关注。目前，国内外应用于盐酸克伦特罗检测的时间分辨荧光免疫分析技术的报道还较少，随着技术的越来越成熟，其应用将更广泛。如果研制成检测盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将可对盐酸克伦特罗的残留进行现场检测。2.4 生物传感技术（Biosensor，BS）将生物技术与微电子技术相结合，利用生物体内抗原、抗体专一性结合而导致电化学变化设计成免疫生物

14、传感器。将 CL（或 RAC）抗体微型化膜固定于换能器（工作电极）表面，测定时在待测样品溶液中加入已知浓度的酶标激素,CL（或 RAC）与标记抗原竞争性地结合电极上的抗体，使经洗涤后的电极与底物溶液接触，标记酶催化底物发生相应的化学变化，转变为电信号输出，输出显示和数据处理系统将信息进行数据处理和输出，直接显示测得 CL（或RAC）的含量。国外已有用生物传感器技术检测CLB 残留的资料报道 , 如 Pizzariello Andrea 应用分子印迹聚合膜（MIP）作为分子识别系统，选择固相基质复合电极（SBMCE）作为换能器，微分脉冲电压电流表（DPV）作为输出显示装置检测牛肝脏中 CLB 残

15、留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高 。目前酶免疫传感器的灵敏度达 0.01g/kg，而且可在几分钟之内完成检测全过程。目前研制成功的检测盐酸克伦特罗的酶免疫传感器，检测限为 0.3g/kg， 可在10min内完成检测全过程，且传感器体积小（15cm7cm2cm），便于携带和实现现场检测 。生物传感器具有选择性好、响应速度快、样品用量少、操作简易、价格低廉、定量准确，且其结构简单、体积小、携带和使用方便、可以实现连续的在线检测和反复使用等优点。2.5毛细管电泳免疫分析-激光诱导荧光检测（CEIA-LIF）CEIA-LIF是我国学者最近研究的一

16、种快速、灵敏、特异性很强的检测盐酸克伦特罗的新方法。该法采用CLB与牛血清蛋白（BSA）偶联并用荧光素标记5，离线毛细管电泳分离和在线毛细管电泳法来检测。在最佳条件下，离线和在线毛细管免疫电泳法的检测限分别为0.7ng/ml和0.2ng/ml，相对标准差（RSD）分别为0.881.2%和0.562.8%，回收率分别为8893.7%和90102%。建立的CEIA-LIF新方法对CLB的检测准确可靠、快速（从选择直到检测的完成仅需8分钟左右）自动化水平高，提高了选择的准确性，避免了人为操作的误差和检测的灵敏度，试剂消耗量小，检测成本低。2.6 相对比较综上所述，酶联免疫吸附测定法、放射免疫分析技术

17、、毛细管区带电泳法、色谱法都不能实现现场快速检测，而且检测设备和检测费用昂贵，生物传感器技术、滴金免疫技术和时间分辨荧光免疫分析技术灵敏，检测快速和方便，是今后研究和开发检测盐酸克伦特罗等残留物的重要方向。第3章 瘦肉中瘦肉精风险管理3.1 健全法律体系畜牧兽医部门负责畜产品质量安全监管始于 2006 年11 月 1 日起执行的农产品质量安全法。通过几年的执法实践，深切地感受到有些条款规定的还比较原则，具体落实尚需进一步的细化规定，例如：根据农产品质量安全法第四十九条规定，对检出“瘦肉精”阳性的家畜，应当进行“无害化处理”，在动物防疫领域，“无害化处理”的内涵就是扑杀、焚烧、深埋，但在畜产品安

18、全监管领域，还可以再解释为“监视饲养”，“监视饲养”会大幅度增加监管部门的人力、物力和财力，而且动物随时有被转移甚至流入市场的风险。实践证明，“监视饲养”这种相对人违法，行政部门付出高额监管成本的“无害化处理”方式是不可取的。笔者认为，畜牧兽医部门在日常的畜产品质量安全监督抽检中，只要一头（只）被确认“瘦肉精”阳性，就应当对同群动物实施扑杀、焚烧、深埋的无害化处理措施。从抽样规则角度看，畜产品安全监管部门的抽样属于第三方抽样，所抽样本代表整个群体，样本被确认“瘦肉精”阳性，就代表被抽的群体是阳性，对同群动物扑杀销毁是合法的；从饲养实践看，畜主既然使用“瘦肉精”，就不太可能只对其中的一头动物饲喂

19、，恰恰这头动物又被抽到!从惩戒角度看，实施同群畜扑杀销毁政策，会大幅度提高使用“瘦肉精”的违法成本，让违法者付出沉重而高昂的代价有利于遏制使用“瘦肉精”的违法动机。同群畜扑杀的结果将是少杀和不杀。根据农产品质量安全法第二十四条和第二十六条规定，屠宰企业要对屠宰的动物和动物产品进行“瘦肉精”自检或委托检测机构检测，但屠宰企业不履行“瘦肉精”检测义务6，农产品质量安全法没规定任何法律责任。任何没有法律责任的义务性规定，形同虚设。2010 年 10 月 20 日，中编办印发了关于进一步加强“瘦肉精”监管工作的意见（中央编办发2010105号），该意见明确提出：“可根据工作需要按照有关规定对生猪购贩运

20、企业（合作社、经纪人）设立资质许可”，根据中华人民共和国行政许可法，文件中的“有关规定”只能是法律和行政法规，因为此类资质许可只能由法律和行政法规设定。2011年3月15日，农业部关于进一步加强生猪“瘦肉精” 7监管工作的紧急通知明确要求实行“瘦肉精”“检验和检疫同步制度，对此“同步”至少有三种理解：一是屠宰企业先行检验，然后由检疫员实施检疫，二是检疫员先行检疫，屠宰企业再进行检验；三是屠宰企业检验与检疫员检疫同时进行。3.2 增加财政投入，确保充足的资金保证目前，我国畜产品安全监管基础还比较薄弱，影响和制约畜产品安全的因素还很多，畜产品安全正处于风险隐患凸显期和事故易发期。原有的一些老问题还

21、没有彻底根治，新情况、新问题又不断出现。畜产品安全监管是一项事关人民群众身体健康的公益事业，必须建立稳定的财政投入保障机制，这既是食品安全法、农产品质量安全法等法律的要求，也是政府取信于民、建设和谐社会的要求。政府要确保畜产品质量安全监管经费的需求。一要按照保证畜产品质量安全的原则，科学制定畜产品安全监测计划，提高检测频次和数量，保证一定的覆盖率，稳定所需检测经费。二要保证畜产品安全执法监督工作所需经费。“瘦肉精”监管点多面广，生猪、肉牛养殖场多数分布在农村，而且牲畜养殖量大的地区往往也是经济欠发达地区，监督办案困难大、成本高，稳定的政府财政投入是畜产品质量安全的保障。三要加大畜产品质量安全监

22、管基础设施建设。例如包括“瘦肉精”在内的许多有害物质大都要检测到ppb级，需要高精度的仪器设备，价格昂贵，各级政府应当加大投入力度。3.3 增加机构编制，提供安全监管组织保证多年的监管实践告诉我们，健全的畜产品安全监管组织体系是做好畜产品安全监管工作基础，没有完善的组织体系，再好的政策、想法也难以实施。根据国务院关于推进兽医管理体制改革的若干意见（国发200515号）精神，在县以上建立健全行政管理、监督执法、技术支持三大体系8。一要在畜牧兽医行政部门内部科学设置机构，合理调配人员，强化畜产品安全行政管理职能。二要加强畜产品安全监督执法体系建设。县以上要健全畜产品安全监督执法机构，明确职责，充实

23、力量，提高监督执法能力。四、落实检验制度，实行“瘦肉精”检验与检疫同步屠宰企业是其屠宰的动物及其产品质量安全的第一责任人，也是从饲养环节到消费环节整个畜产品质量安全检管链条中最重要节点，更是畜产品进入市场与消费者见面的最后一道关口。落实屠宰企业“瘦肉精”检验制度，可以从根本上解决生猪“瘦肉精”问题。首先，在整个生猪产业链中，饲养环节点多面广，数量庞大，按照现在畜牧兽医系统的机构和编制情况，实施饲养环节的“瘦肉精”监管全覆盖，几乎是个不可能事件，即使增加足够的编制和人员，在饲养环节彻底解决生猪“瘦肉精”问题，也要比在屠宰环节难度更大，监管成本更高。分散养殖的动物最终都将在屠宰厂集中，将政府监管重

24、点放在屠宰环节，事半功倍。其次，落实屠宰企业“瘦肉精”检验制度，可以优化屠宰行业的产业结构。一把刀一口锅就可以杀猪的时代应当立即终止。屠宰业应当是一个诚实守信、技术密集、对公共卫生有高度责任感的产业。那些不具备检验条件的屠宰场（点），必须立即停止生产经营，直至退出屠宰行业。谢辞经过这一段时间的努力，我的毕业论文终于完成了。 非常感谢XX老师在毕业设计阶段给我的指导，从最初的定题，到收集资料、方法确定、写作、修改，再到最后的定稿，给了我悉心的指导和贴心的帮助。他们渊博的知识、扎实的理论功底、高深的学术造诣、严谨的治学态度和胸怀宽宏的高尚品质，让我受益匪浅，终身难忘。在此我向他们表示诚挚的谢意！谢

25、谢你们！毕业论文的完成，这也意味着我的大学生活即将结束。在此，我要感谢我的每一位老师，是他们提升了我的思想，丰富了我的知识，培养了我的能力；我也要感谢陪我度过三年时光的同学和朋友，他们的支持和帮助，给了我前进的信心和动力。谢谢你们！参考文献1 张清安,范学辉.动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进展J.食品与发酵工业,2004,30,9;108-111.2 吴琼，景亮 酪氨酸硝基化引起细胞功能损伤的机制及防治措施J 国外医学麻醉学与复苏分册，2005，26(1)3;0323 杨兴武，刘振国，周蓉等.应用 ELISA 检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究J.黑龙江畜牧兽医，

26、2003（5）;9-10.4 曾文芳，陈永欣，吴龙等.离子色谱电化学修饰法测定盐酸克仑特罗J.中国卫生检验杂志，2007,17（8）;1350-1352.5 顾国平，王森，周亚莲等.固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留J.浙江农业科学，2008（5）;624-626.6 赵榕, 吴国华, 涂晓明. 反相高效液相色谱法测定猪肝中盐酸克伦特罗 J. 中国食品卫生杂志,2000,12(2);22-24.7 刘国艳, 柴春彦. 动物性产品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）检测方法研究进展 J.动物科学与动物医学,2002,19(4).32-34.8 蔡玉枝,罗晓燕,苏文周.高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量J.中国卫生检测杂志,2002,12(2)；193-194.-