高中生物选修3(人教版)动物细胞工程课件.ppt

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1、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术胚胎移植技术胚胎移植技术动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量的蛋白质，将有一定量的蛋白质，将细胞网络起来形成具有细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织一定弹性和韧性的组织和器官。和器官。传代培养传代培养动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传

2、物质改变改变一、动物细胞培养一、动物细胞培养讨论讨论:细胞株与细胞系的特点细胞株与细胞系的特点有何不同有何不同?1、动物细胞的培养过程、动物细胞的培养过程 幼龄动物幼龄动物取动物器官取动物器官和组织和组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理细胞培细胞培养养单个细胞单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础(1)请据图简述动物细胞的培养过程(2)思考:动物细胞培养有哪些方面 的应用?2、有关概念、有关概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第为原代细胞。培养的第1代细胞与传代细胞与传

3、10代以代以内的细胞称为原代细胞培养。内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。2、有关概念、有关概念细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至10代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到4050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长

4、停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。3、动物细胞培养、动物细胞培养 的条件的条件(1)无菌无毒的环境无菌无毒的环境(2)营养营养(3)温度和温度和pH(4)气体环境气体环境 比较：植物的组织培养的条件比较：植物的组织培养的条件4. 动物细胞培养的应用动物细

5、胞培养的应用()大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。()解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。（利用贴壁生长和接触抑制原理）（利用贴壁生长和接触抑制原理）()检测有关物质毒性。检测有关物质毒性。()培养正常或病变细胞，用于科研。培养正常或病变细胞，用于科研。如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培

6、养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白思考：思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要

7、将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的不能，动物细胞

8、培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体动物个体1、谁是“多莉”的母亲？2、“多莉羊”是雄还是雌？3、是否符合孟德尔遗传？问问题题卵细胞C母绵羊子宫母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病新城鸡瘟病毒毒 一、动物细胞融合一、动物细胞融合 2、过程：、过程：1、概念：、概念：“2个或多个动物细胞个或多个动物细胞”“1”、“杂交单核细胞杂交单核细胞”用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过

9、程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核二、单克隆抗体二、单克隆抗体1、什么是抗体？其本质是什么？、什么是抗体？其本质是什么？ 2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来的？抗体是从何来的？ B淋巴细胞产生抗体。淋巴细胞产生抗体。3、B淋巴细胞有什么特点？淋巴细胞有什么特点？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞与抗体淋巴细胞与抗体B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。动物体内的动物体

10、内的B淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。原具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。体。单克隆抗体单克隆抗体 由单个由单个B淋巴细胞经过无性繁殖淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞

11、产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小

12、鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体（1 1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴淋巴细

13、胞融合细胞融合? ?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，增殖，B B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）（2 2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）能等于癌细胞。）（3 3）整

14、个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的

15、含义，只不过克隆的克隆的含义，只不过克隆的不是不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。） 单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显优越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1、临床诊断、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿治疗肿瘤瘤资料资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、体。许多缺乏良好诊断手段的传

16、染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内位体内“病灶病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。踪及心肌梗塞的诊断。生物导弹生物导弹：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体部位，杀死癌细胞，这种抗体药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭

17、药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭癌细胞，避免或减少对正常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。癌细胞，避免或减少对正常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植教学目标巩固教学目标巩固在动物细胞融合和植物体细胞杂交的在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）比较中，正确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手

18、段相同教学目标巩固教学目标巩固. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C教学目标巩固教学目标巩固小结一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法-灭活的病毒灭活的病毒一种新细胞一种新细胞-杂交瘤细胞杂交瘤细胞一种优势一种优势-单克隆抗体特异性强、灵敏度高单克隆抗体特异性强、灵敏度高动物细胞工程动物细胞工程 一、动物细胞融合一、动物细胞融合 1、过程：、过程：细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞物理法、物理法、化学法化学法灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病新城鸡瘟病毒毒2、用途：、用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体小鼠骨髓瘤小鼠骨髓瘤细胞细胞B淋巴细胞淋巴细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞筛选筛选（特定的选择（特定的选择性培养基）性培养基）增殖增殖单克隆抗体单克隆抗体体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔