常见Western-Blot封闭液的优缺点.docx

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1、封闭是Western Blot至关重要的一局部，所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和 抗原结合，为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单，但是封闭液的选择确是很多 科研人员的难题。为了让大家更方便的选择适合自己实验的封闭液，这里给大家介绍6种 不同的封闭液，以及它们的优缺点。L脱脂奶粉廉价而且最好买的封闭剂就属脱脂奶粉了。无论是从化学制品公司还是从超市购买，都可以 直接拿来使用。通常封闭液的浓度为2.5-5% ( w/v ) 0但值得注意的是，脱脂奶粉是许 多种蛋白质的混合物，其中含有酪蛋白，是一种磷蛋白。如果你的目标蛋白是磷蛋白的话, 千万不要选择脱脂奶粉，否那么会有很多背景信号。即使

2、你的目标蛋白不是磷蛋白，因为是蛋 白质的混合物，所以也容易产生较高的背景信号。2、牛血清白蛋白(BSA)牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白，是除了脱脂奶粉之外，非常常用的封闭 剂。通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5% ( w/v ) o但大家也可以根据自己实验的需要 来改变浓度，因为价格比拟高，所以很多研究人员都是用尽可能低而有效的浓度。虽然BSA 不是磷蛋白而且是单一蛋白，但是提纯过程中有可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物, 这些蛋白都可以和哺乳动物抗体产生交叉反响，会增加非特异性背景信号。3、全血清全血清是许多蛋白质的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同样可以被用来当

3、做 封闭剂。大家对它的使用率很低，因为跟脱脂奶粉和BSA相比，并没有什么突出的好处， 但价格却更贵。通常使用的浓度为5-10%(w/v).像BSA一样，它含有免疫球蛋白和血 清蛋白，会和哺乳动物抗体产生交叉反响。4、鱼胶用鱼胶当封闭液是从猪皮胶演变而来的。鱼胶是从冷水鱼的皮肤中提取出来的，即使在温度 较低的情况下也会不会凝固。通常使用的浓度为0.1-5% ( w/v ) 0不像脱脂奶粉和BSA , 它不含有任何的血清蛋白，所以就不会和哺乳动物抗体产生交叉反响，大大降低了背景信号。 但是鱼胶不能用来封闭生物素-抗生物素抗体蛋白系统，因为它含有内源性生物素。5、聚乙烯叱咯烷酮PVP是传统封闭液的非

4、蛋白质性质的替代品。虽然早在1993年就有文献发表，在封闭技 术上却是很新的产品。PVP是一种水溶性多聚物，可以很快和硝酸纤维素和PVDF膜结合。通常使用的浓度在0.5-2% (w/v),而且通常会和其他封闭剂一起使用。PVP在用于检测 较小目标蛋白的时候非常有效。6、商品化封闭液商品化封闭液通常含有提纯过的蛋白，用这个封闭液的好处就是你可以确定里面不含有磷蛋 白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素等其他封闭液中难以防止的成分。当然，价格也就更贵。每个商品化封闭液都有自己的Protocol ,基本照做就没问题，而且封闭时间很快。相信大家现在对各种封闭液都有了更全面的了解。总的来说，封闭液的选择基于三样事情: 抗体、目标蛋白和检测系统。但是要想找到适合自己目标蛋白的封闭液，并不简单。除了排 出一些很明显不合适的，剩下的就需要多花点时间尝试不同种类、不同浓度的封闭液，才能 找到适合的。