实验室菌种管理规程.doc
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1、实验室菌种管理规程目的:保证菌种合理、有效地使用和保存,最大限度降低变异率,确保菌种的溯源性与稳定性,保证实验室和社会的生物安全。职责:主管负责菌种的出入库保管、保存、分发,组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。范围:本规程适用于实验室菌种的管理,包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。1 菌种的保存1.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用平板低温保存法。将菌种接种在适宜的固体培养基上,待菌生长充分以后,转移至28冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,经应灭活处理后销毁。保存时间为1周,超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化,若菌落活力下
2、降则从-80冰箱中取用甘油冷冻管。1.2 传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法。1.2.1 甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内,置于适宜的培养条件下培养,菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内,再加入等体积的无菌甘油(浓度40%),即为20%甘油菌悬液,轻轻振摇,使内容物充分混合,在-80冷冻条件下保存,保存期限为3年。每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。使用时,取出一支放至室温,接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏,挑取纯菌落传代或工作用。2 菌种的传代2.1 工作用菌种的传代当工作用菌种代数小于5时,在规定保存期限内,可直接用上一代工作用菌种转接下一
3、代工作用菌种。取在冰箱28保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代,并将新传代的培养物替代原有的菌种,作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种,进行复苏,直接作为工作用菌种。菌种每1周传代一次,当超过5代,须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。2.2 传代用菌种的传代首先划线接种确认,根据日常检验工作的需要量,挑取纯菌落转接平板,作为工作用菌种;同时,结合菌种的代数和最长保存期限,挑取纯菌落制成菌悬液,按“1.2”的方法制备甘油冷冻管数支,作为传代用菌种。2.3 传代时注意事项无菌操作,使菌株不死亡,不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护,如工作时必须穿工
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