抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-Tg)作业指导书.doc

《抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-Tg)作业指导书.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-Tg)作业指导书.doc（3页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。第1步：10l标本、生物素化的TG和抗TG抗体混匀，一起进行孵育。第2步：加入钌（Ru）标记的抗TG抗体和链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光， 用光电倍增管进行测定。通过检测仪的定标曲线得到最后检测结果（定标曲线通过2 定标点和试剂条形码提供的主曲线生成）。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、EDTA-K3或EDTA-K2抗凝，不要使用肝素锂抗凝血浆。标本在28度可稳定

2、3天，-20oC可稳定1个月，标本可冻融1次。有沉淀的标本使用前需离心，加热灭活的标本不可使用，标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，12ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗TG抗体（灰盖），1瓶，10ml，浓度高于0.2mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.0,含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗TG抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度高于0.52mg/l，磷酸缓冲

3、液0.1mol/l，pH 7.0含防腐剂。校准品：Cal 1 抗-Tg 定标液1（白盖），2瓶，1.5ml/瓶，以人血清为基质；经过防腐处理。Cal 2抗-Tg 定标液2（黑盖），2瓶，1.5ml/瓶，以人血清为基质；经过防腐处理。质控品：PC A-TG1 抗-Tg 质控液1（浅褐色瓶盖）:1 瓶1.5ml；抗-Tg 抗体，约80IU/mL，以人血清为基质；经过防腐处理。PC A-TG2 抗-Tg 质控液2（褐色瓶盖），1 瓶1.5ml；抗-Tg 抗体，约200IU/mL，以人血清为基质；经过防腐处理。其他所需材料：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（

4、SysClean）,货号Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys系统缓冲液 （ProCell M）,货号Elecsys检测池洗液（CleanCell M）,货号ElecsysPC/CC杯,货号Elecsys清洗液（ProbeWash M），货号03005712Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号Elecsys系统清洗适配器（SysCleanAdapterM），货号Elecsys E 411分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号Elecsys测量池清洗液（CleanCell），货号Elecsys 系统清洗液（SysWash），货

5、号Elecsys适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号Elecsys加样头（TIP），货号4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批Anti-Tg试剂盒必须用新鲜试剂和Anti-Tg Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准

6、操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibrat

7、ion Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排

8、好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys Anti-Tg质控品1和2 。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为IU/ml 或kIU/L。8. 参考范围5 个临床中心对392 例健康个体进行了Elecsys Anti-Tg 研究（MCE Elecsys Anti-Tg，2001 年10 月），确认目前界限值为115IU/ml

9、，此值对应94 百分位数。每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性，必要时根据具体情况制订自己的参考范围。9. 分析性能10. 干扰因素测定结果不受黄疸 (胆红素1129umol/L 或66 mg/dl), 溶血 (血红蛋白1.05mmol/L 或 1.69 g/dl), 高脂血症 (脂肪乳剂 2000mg/dl) 和生物素（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集标本。类风湿病患者（类风湿因子高达300 IU/ml）的血液标本可正常测定。对24种常用药物进行体外检测，未发现干扰。可用合适的附加剂将检测成份和特异血清之间的免疫交互作用的干扰危险降到最低程度。11. 结果解释12.

10、 临床意义甲状腺免疫球蛋白（Tg）由甲状腺腺体生成，是甲状腺滤泡腔内的主要成分。在抗甲状腺过氧化物酶（TPO）联合作用下，Tg 在L-酪氨酸碘化过程和甲状腺激素四碘甲腺原氨酸（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）合成过程中起关键作用。Tg 和TPO 都是潜在的自身抗原。在自身免疫性甲状腺炎个体中可发现血清Tg自身抗体浓度升高（Tg-自身抗体）。高浓度的抗Tg 和抗-TPO 是慢性淋巴性甲状腺炎（桥本病）的指征。自身免疫甲状腺炎（包括桥本病）个体中甲状腺免疫球蛋白抗体出现频率大约是70-80%，而甲状腺机能亢进（葛瑞夫兹氏病）个体约为30%1。抗-Tg 测定在桥本甲状腺炎监测2 和鉴别诊断中非常重要（不明原因的抗-TPO 测定阴性的疑似自身免疫甲状腺炎个体3，非淋巴浸润性葛瑞夫兹氏病2，以及Tg 检测中用Tg-自身抗体排除干扰2,4,5）。尽管同时测定其他甲状腺抗体（抗-TPO，TSH-受体-抗体）可增加检测敏感性，但阴性结果也不能排除自身免疫疾病的存在。抗体测定浓度与疾病的临床疾病活动状态无关。如果疾病持续了很长时间或疾病治愈，则原先测定浓度升高的抗体会转阴。如果治愈后抗体又重新出现，则可能是复发。13参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日