经典实验室常用缓冲液配置方案.doc

《经典实验室常用缓冲液配置方案.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《经典实验室常用缓冲液配置方案.doc（12页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10TE Buffer(pH7.4, 7.6,

2、 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M TrisHCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节pH值

3、至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM

4、 KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6)10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2

5、. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8）10 (W/V) SDS组份浓度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量1

6、0g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。9）2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10）2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法

7、：1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。2. 室温保存。11）5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。11）20 (W/V) Glucose组份浓度：20 (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100

8、 ml。3. 高温高压灭菌后，4保存。12）SolutionI(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl（PH8.0）25ml0.5M EDTA（PH8.0）20ml20Glucose（1.11M）45mldH2O910ml2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。13）SolutionII(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1(W/V)S

9、DS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10 SDS 50ml2N NaOH 50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14）SolutionIII(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc 147g CH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。15）0.5 M EDTA(pH8.

10、0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16）1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适

11、量分成小份后，-20保存。17）10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate

12、）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium

13、acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH

14、（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋

15、混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100g

16、SDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2聚蔗糖（Ficoll，400型

17、）2聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2BSA（组分V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol

18、/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mm

19、ol/L dTTP 贮液12ul20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加10

20、0ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双

21、碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值8778508157757356856255655104503903302801231501852252653153754354905506106707206.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用

22、量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8mlTris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶

23、液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L5Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cy

24、anole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF水300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml6聚蔗糖凝胶上

25、样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型）水1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青FF1.5g补足到10ml6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘

26、油水1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml3.9ml6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g补足到10ml10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0

27、)100ul 10 SDS5ml补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每1

28、00ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要

29、用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基

30、。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯

31、霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。