糖类抗原125(CA 125II)作业指导书.doc

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1、糖1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。第1步：20l标本、生物素化的抗CA 125II特异性的单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗CA 125II特异性的单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、锂、铵,柠檬酸钠和EDTA-K3抗凝。使用柠檬酸钠抗凝

2、结果要增加10。标本在28度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml。含防腐剂。R1：生物素化的抗CA 125II单克隆抗体（灰盖），1瓶，9ml，1mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，Ph7.4；含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗CA 125II单克隆抗体（黑盖），1瓶，9ml。浓度1mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，pH 7.4,含防

3、腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1ml/瓶Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1ml/瓶两个定标品的CA 125II的浓度范围约为35U/ml和500U/ml，以人血清为基质，含防腐剂。质控品：Elecsys 肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）货号11776452其他所需材料：Elecsys E170/E411分析仪Elecsys通用稀释液货号Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号Elecsys E411分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号 E

4、lecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号Elecsys加样头（TIP），货号Elecsys E170分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号Elecsys 试剂针清洗液（ProbeWash）货号ElecsysPC/CC杯,货号Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号Elecsys系统清洗适配器（SysCleanAdapterM），货号4. 仪器和校准使用仪器：

5、瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批CA 125II试剂盒必须用新鲜试剂和CA 125II Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys E170分析仪：一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可

6、。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、全点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Se

7、quence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor

8、 Marker）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法仪器会自动计算标本的浓度（U/ml,U/L或者kU/l）。8. 参考范围593例健康女性（绝经前后）95%的范围35U/ml.9. 分析性能9.1精密度10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素66mg/dl）、溶血（血红蛋白3.2g/dl）、脂血（脂质2000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1200U/ml）。28种常 用药物经试

9、验对本测定无干扰。CA125浓度高达50000U/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳 性反应。ElecsysCA125II测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义CA125属肿瘤标志物，其测定值由使用单克隆抗体OC125来命名。在Elecsys测定法中，OC 125 单克隆抗体被用作检测抗体。 另一种单克隆抗体M 11用作捕获抗体。正常人的卵巢上皮表面不表达CA125，但在上皮来源的非粘液性卵巢肿瘤中CA125表达率很 高，并可在血清中检测到。CA125升高可见于卵巢癌患者外，还可见于子宫内膜癌、乳房癌、胃肠道癌和其它恶性肿瘤。

10、各种恶性 肿瘤引起的腹水也可见CA125升高。CA125升高也可见于多种妇科良性疾病，如卵巢囊肿、子宫内膜病、宫颈炎及子宫肌瘤等。轻 度升高可见于妊娠早期和其它良性疾病，如急、慢性胰腺炎、胃肠道疾病、肾功能衰竭、自身免疫病等。明显升高也可见于肝硬化、 肝炎。尽管CA125是非特异的指标，却是迄今为止用于监测卵巢癌病人治疗效果、观察疾病发展的最重要指标。以65U/ml为cut-off 值,Elecsys CA125 II的敏感性是79%，特异性是 82%，如cut-off值设为 150U/ml，即敏感性是 69%，特异性是 93%。12参考文献1. Davis HM, Zurawski VR J

11、r, Bast RC Jr, Klug TL. Characterizationof the CA 125 antigen associated with human epithelial Ovariancarcinomas. Cancer Research 1986;46:6143-6148.2. Bast RC, Feeney M, Lazarus H, Nadler LM, Colvin RB, Knapp RC.Reactivity of a monoclonal antibody with human ovariancarcinoma. J Clin Invest 1981;68:1

12、331.3. Kabawat, SE, Bast RC Jr, Knapp RC, Colvin RB. Immunopathologiccharacterization of a monoclonal antibody that recognizes Commonsurface antigens of human ovarian tumors of serous, endometroidand clear cell types. Am J Clin Pathol1983;79:98-104.4. Bast RC, Klug TL, St. John E, Jenmison E, Niloff

13、 JM, Lazarus H, et al. Aradioimmunoassay using a monoclonal antibody to monitor the courseof epithelial ovarian cancer. N Engl J Med 1983;309:883-887.5. Klug TL, Bast RC Jr, Niloff JM, Knapp RC, Zurawski VR Jr.Monoclonal antibody immunoradiometric assay for an antigenicdeterminant (CA 125) associate

14、d with human epithelial ovariancarcinomas. Cancer Res 1984;44:1048-1053.6. Hasholzner U, Baumgartner L, Stieber P, Meier W, Hofmann K,Fateh-Moghadam A. Significance of the tumor markers CA 125 II,CA 72-4, CASA and CYFRA 21-1 in ovarian carcinoma.Anticancer Res 1994;14(6B):2743-2746.7. Kabawat SE, Ba

15、st RC Jr, Bhan AK, Welch WR, Knapp RC, Colvin RB.Tissue distribution of a coelomic epithelium related antigen recognized bythe monoclonal antibody OC 125. Int J Gyn Path 1983;2:275-285.8. Daoud E, Bodor G, Weaver Ch, Ladenson JH, Scott MG. (WashingtonUniversity Case Conference) CA-125 Concentrations

16、 in Malignant andNonmalignant Disease. Clin Chem 1991;37(11):1968-1974.9. Kenemans P, Bon GG, Kessler A, Verstraeten AA, van Kamp GJ.Multicenter Technical and Clinical Evaluation of a Fully AutomatedEnzyme Immunoassay for CA 125. Clin Chem 1992;38/8:1466-1471.10. Hasholzner U, Stieber P, Baumgartner

17、 L, Pahl H, Meier W,Fateh-Moghadam A. Methodological and Clinical Evaluation OfThree Automatized CA 125 Assays Compared with CA 125 II RIA(Fujirebio). Tumordiagn Ther 1994;15:114-117.11. Ruibal A, Encabo G, Martinez-Miralles E, et al. CA 125 seric levels innonmalignant pathologies. Bull Cancer (Pari

18、s) 1984;71(2):145-146.12. Zahner J, Schmitz FJ, Schmitz G, Reinauer H. CA 125 - ein Tumormarkerin der Inneren Medizin? Lab med 1995;19:185-188.13. Stieber P, Fateh-Moghadam A. Sensible Use of Tumormarkers. p.58 Dtsch:Tumormaker und ihr sinnvoller Einsatz. S. 56 Boehringer Mannheim,Best.-Nr. 1536869

19、(engl), 1320947 (dtsch). ISBN 3-926725-07-9dtsch/engl. Juergen Hartmann Verlag Marloffstein-Rathsberg (1993).14. Van Dalen A. Quality Control and Standardization of Tumor MarkerTests. Letter to the Editor: Tumor Biol 1993;14:131-135.15. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes;Preanalytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to theLaboratory. GIT-Verlag, Darmstadt 1996:8. ISBN 3-928865-22-6.16. Bablok W, et al. A General Regression Procedure for MethodTransformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-790.编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日