糖类抗原15-3(CA 15-3)作业指导书.doc

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1、糖1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。第1步：20l仪器自动使用通用稀释液预稀释1：10的标本、生物素化的抗CA 15-3特异性的单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗 CA 15-3特异性的单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、锂、铵和EDTA-

2、K3抗凝。使用柠檬酸钠结果会比使用以上抗凝剂低24。标本在28度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml。含防腐剂。R1：生物素化的抗CA 15-3单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，1.75mg/l，磷酸缓冲液20mmol/l，Ph 6.0；含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗CA 15-3单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度10mg/l，磷酸

3、缓冲液100mmol/l，pH 7.0含防腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1ml/瓶Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1ml/瓶两个定标品的CA 15-3的浓度范围约为15U/ml和100U/ml，以人血清为基质。质控品：Elecsys 肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）货号11776452其他所需材料：Elecsys E170/E411分析仪Elecsys通用稀释液货号Elecsys E411分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号 Elecsys 添加剂

4、液（SysWash）货号Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号Elecsys适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号Elecsys加样头（TIP），货号Elecsys E170分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号Elecsys 试剂针清洗液（ProbeWash）货号Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号ElecsysPC/CC杯,货号Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号Elecsys系统清洗适配器（Sy

5、sCleanAdapterM），货号4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批 CA 15-3试剂盒必须用新鲜试剂和CA 15-3 Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys E170分析仪：一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项

6、目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、全点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单

7、下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys肿

8、瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法仪器会自动计算标本的浓度（U/ml或者kU/l）。8. 参考范围在美国、西班牙和德国多个临床中心的检测结果如下：健康人群：272例健康人群中95的范围25U/ml。9. 分析性能9.1精密度10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素65mg/dl）、溶血（血红蛋白3.0g/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要

9、等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。28种常用药物经试验对本测定无干扰。CA15-3浓度高达20000U/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。Elecsys CA15-3II测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义CA15-3测定值由夹心法中所用的二种单克隆抗体（MAb）115D8和DF3决定。115D8特异性针对人乳脂球膜，而DF3特异性针对人转移性乳腺癌的膜提取成份。能与115D8和DF3反应的决定簇存在于一种称为MAM-6的糖蛋白分子上，该种抗原属于唾液酸化的糖蛋白亚类，

10、又称多态性上皮粘蛋白(PEM)。正常情况下，PEM只存在于腺体细胞腔的分泌物中，不出现在血循环中。当细胞恶变时，基底细胞膜渗透性增强，PEM可在血清中由CA15-3方法检测出来。12参考文献1. Hilkens J, et al. Monoclonal antibodies against human milkfat globulemembranes detecting differentiationantigens of the mammarygland. Prot Biol Fluids 1982;29:813-816.2. Hilkens J, et al. Monoclonal ant

11、ibodies against human milkfat globulemembranes detecting differentiation antigens of the mammary glandand its tumors. Int J Cancer 1984;34:197-206.3. Kufe D, et al. Differential reactivity of a novel monoclonalantibody (DF3) with human malignant versus benign Breasttumor. Hybridoma 3 1984;(3):223-23

12、2.4. Sekine H, et al. Purification and characterization of a high molecularweight glycoprotein detectable in human milk and breast carcinomas.J Immunology 1985;135(5):3610-3615.5. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes;Preanalytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to theLaboratory. GIT-Verlag, Darmstadt 1996;8. ISBN 3-928865-22-6:8-9.6. Bablok W, et al. A General Regression Procedure for MethodTransformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-790.编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日