ACE的作用机理(3页).doc

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1、-ACE的作用机理-第 3 页ACE的作用机理： 在人的生理过程中，血压的调节主要受到肾素血管紧张素系统和激肽激肽生成酶系统相互作用控制的。肾素进入血液，将血浆中的血管紧张素原水解为血管紧张素，然后再血管紧张素转化酶（ACE）的作用下，将末端二太切下来，转换成血管紧张素可加强心肌的收缩，造成血压的升高。另一方面，激肽激肽生成酶系统也受到ACE控制，它可使具有血管舒张作用的舒缓激肽转化为没有活力的缓释肽，两个系统在ACE的协同作用下造成了人体内血压的升高。目前大量研究表明，如果可以抑制ACE的活性作用，就能起到降血压作用。 ACE酶ACEACE（能使促使血管平滑肌收缩，导致血压升高）我们需要分离

2、出酸奶上清液中ACE抑制剂。首先:发酵乳清的制备10%的脱脂乳分装在试管中，在90下灭菌15min。杀菌后冷却到37，无菌条件下，以4%的量接种乳酸菌菌种，37恒温培养24h。如此在10%的脱脂乳上将乳酸菌菌种活化3代。活化后的乳酸菌以4%接种量接种到10%的脱脂乳中，37恒温发酵培养。分别取发酵5h，7h，9h，11h，13h，15h后样品2mL,8000r/min,4，离心15min。收集上清液，再用5mol/L的NaOH溶液将pH值调节到8.3，8000r/min,4，离心15min。收集上清液，测定ACE抑制率。发酵乳中ACE抑制率的测定：ACE抑制率的测定是利用Cushman和Che

3、ung的方法。根据实验要求，实验方法稍作改动。具体方法如下：10mL试管中加入250L的5mmolHHL（ 用0.3mol/L NaOH的0.1mol/L硼酸盐缓冲液pH8.3，将HHL固体配成5mmol马尿酸溶液）和80L的发酵乳上清液，在37下放置5min。再加入20L的ACE溶液（0.1U/mL），在37反应30min。之后加入250L的1mol/L的HCl溶液终止反应。再加入1.7mL的乙酸乙酯，15s充分振荡混匀，静置10min。用移液管吸取1mL的乙酸乙酯，在真空干燥箱中90-100干燥30min左右。加入一定量的蒸馏水，混匀。用紫外分光光度计在228nm处测其吸光度（实验重复3次

4、）。ACE抑制率的计算：ACE抑制率（%）=100%A：含发酵乳乳清和ACE溶液的吸光度B：不含发酵乳乳清样品，但含有ACE溶液的吸光度C：蒸馏水，不含ACE溶液的吸光度(空白对照)用膜粗分不同肽段：ACEI的分离纯化：高效液相色谱法 以超纯水和乙腈为洗脱液(各含0.1% 三氟乙酸)，进 样量0.5ml，洗脱流速1.0ml/min，检测波长215nm，乙腈浓度梯度变化：0 60min，乙腈：0%80%；608 0 m i n，乙腈：8 0 %0 % 。对洗脱所得各峰分别收集浓缩，测定活性。改变洗脱条件，对活性最高的组分再次分离纯化，收集活性最高的组分。如此反复，直至得到经反相-高效液相色谱分析柱分析为单一成分的高活性A C E I 。反相高效液相色谱：进样5l，洗脱流速0.5ml/min，检测波长215nm，乙腈浓度梯度变化：060min，乙腈 0%80%；6080min，乙腈 80%0 % 。