lipo2000转染操作步骤(3页).doc

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1、-lipo2000转染操作步骤-第 3 页Stealth RNAi or siRNA Transfection以24孔板为例，其余规格的转染见表11 中板，细胞密度为30-50%适宜。注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2 第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下：A 将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。B 将1ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C 将A B两管混合，放置20min。3 转染期间，将24

2、孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。Plasmid DNA TransfectionDNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1 中板。5 cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。 2 转染。 DNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。B 将2ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C 将A B两管混合，

3、放置20min。转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection中板密度*Culture vesselSurf.area perwellVol. ofplatingmediumVol. ofdilutionmediumDNALipofectamine2000RNALipofectamine20001000-10000cell/well96-well2100ul2X25ul5pmol5 c

4、ell/well24-well2cm2500ul2X50ul20pmol1-3X105 cell/well12-well4cm2K1ml2X100ul40pmol2-3X105 cell/well6-well(35mm)10cm 22ml2X250ul4.0ug*10ul100pmol5ul8-10X105 cell/dish60mm20cm24ml8.0ug*20ul200pmol10ul2-3X106 cell/dish10cm60cm215ml24ug60ul600pmol30ul*：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考*：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。*：6cm dish细胞质粒转染量4-6ug足以。