加校正因子的主成分自身对照法(4页).doc

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1、-加校正因子的主成分自身对照法一、定义及适用范围加校正因子的主成分自身对照法，即以主成分作为对照的内标法，校正因子可以在检测时测定，但需提供杂质对照品，也可在建立方法时将测得的校正因子载入质量标准，供以后常规检验使用，无需长期提供杂质对照品，但也仅适用于已知杂质的控制。建议：校正因子在0.8-1.2时可不予校正。校正因子计算公式：f= 式中：f校正因子； As杂质对照品峰面积或峰高； Cs杂质对照品浓度； Ar待测成分对照品峰面积或峰高； Cr待测成分对照品浓度。二、校正因子的测定在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均是重要的影响因素，研究中需要予以关注。 2.1校正

2、因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。 2.2一般情况下，校正因子可视具体情况通过如下几种方法确定：（1）单浓度点测定：制备适当浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶

3、液，分别进样测定，照上式计算，得到校正因子。（2）多浓度点测定：制备适当的高、中、低三水平浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样测定，照上式计算各校正因子，计算RSD，求平均值，得到校正因子。（3）标准曲线法测定：精密称取杂质对照品和主成分对照品，分别制备系列溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样后，按最小二乘法以进样量对响应值（峰面积等）进行线性回归，求得两条标准曲线，两曲线斜率之比即为校正因子。（4）吸收系数比值法：对于UV检测器来讲，两物质的相对校正因子实际上也是两物质以流动相为溶剂，在检测波长处的紫外吸收系数E1%1cm之比，故可按吸收系数法测定法

4、的相关技术要求测定各自吸收系数，如对照品级别的标准物质、高中低三水平浓度测定、吸收度介于0.30.8之间、至少5台不同型号的UV分光光度计、2份供试液同时平行制备测定、同台仪器2份供试液的平行测定结果不超过0.5%等。测定两物质的吸收系数后，经统计分析确定两物质吸收系数，计算比值，求得校正因子。 上述各方法中，（1）和（2）法较为简捷，可以快捷地量化特定杂质与主成分紫外吸收特征的差异，多用于评估采用主成分自身对照法定量杂质时是否需要校正。但如采用加校正因子的主成分自身对照法定量杂质，需将标准物质赋值信息转化为校正因子固化在质量标准中，那么校正因子的准确性非常关键，校正因子的准确计算应符合更为严

5、格的要求，需要考虑并控制求算校正因子过程中的各种误差因素，以及仪器通用性和色谱系统的耐用性等因素，以便使求得的常数更为准确并具代表性，此时采用（3）、（4）法更为适宜，如能考虑到测定人员、不同试验室因素的影响，会更加符合常数求算的基本要求。三、方法验证校正因子的测定属于有关物质方法验证中的一个项目，一般采用有关物质的测定方法，杂质对照品和主成分对照品线性浓度从定量限至限度的120%或150%，一般取5-6个点，使用3台不同的仪器测定，按照上述方法（3），计算平均校正因子。有关物质方法学验证主要包括：系统适用性、方法专属性、精密度（仪器精密度、方法精密度和中间精密度）、线性、准确度（已知杂质的回

6、收试验）、检测限和定量限、溶液稳定性和耐用性。试验内容概念溶液配制份数进样针数评定标准系统适用性系统适用性是对分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等整个系统进行评估的指标空白溶液1份供试液1份进1针进6针杂质峰峰面积RSD2.0%，保留时间RSD1.0%；杂质峰的拖尾因子2.0%，理论塔板数应符合质量标准的规定方法专属性1专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定检出被分析物质的特性空白对照1份辅料溶液（或起始原料、中间体）1份供试液1份每份各1针空白对照无干扰；主峰与相邻杂质峰的分离度2.0方法专属性2未破坏样品、光湿热10天破坏样品和酸碱氧化破坏

7、样品各1份每份供试液进1针；空白溶液、酸碱空白及氧化空白各1针降解杂质峰与主峰的分离度2.0精密度在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）仪器精密度在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度1%对照液仪器精密度进6针峰面积RSD2.0%供试液仪器精密度进6针（同系统适用性）峰面积RSD2.0%，保留时间RSD1.0%方法精密度供试液6份每份1针杂质含量RSD15%中间精密度同一实验室，由于实验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度换仪器，换人6份供试液每份1针12份供试液响应因子RSD20

8、%线性在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度1%对照线性溶液5份每份1针相关系数（R）0.990，Y轴截距应在100%响应值的25%以内，响应因子RSD10%已知杂质的线性溶液5份准确度用该方法测定的结果与真实或认可的参考值之间的接近程度对照液1份；本底供试液1份；供试液3份每份2针；每份2针；每份3针平均回收率均应在80%-120%之间，9个回收率RSD10%检测限与定量限均指试样中的被分析物能够被检测到的最低量；检测限不一定要准确定量；定量限测定结果应具有一定的准确度和精密度1%对照检测限、定量限基线1针；检测限2针；定量限6针应不小于3应不小于10杂质峰保留时间2.0%，峰面积5.0%已知杂质对照液检测限、定量限溶液稳定性供试液经X小时放置，含量的变化供试液1份0，1，2，4，6X小时各进1针主成分的含量变化的绝对值2.0%，杂质含量的绝对值在0.1%以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质耐用性测定条件发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度调流动相pH变化0.21份供试液，各条件下进2针主峰的拖尾因子2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的峰面积RSD2.0%；杂质含量的绝对值在0.1%以内调流动相配比变化5%柱温变化5检测波长变化5nm流速相对值变化20%换色谱柱-第 4 页-