分解纤维素的微生物的分离.pptx

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1、 植物果实在收获以后，大量的秸秆剩余下来，焚烧秸秆不仅污染环境，而且造成了大量的浪费。导入新课一、基础知识一、基础知识棉花棉花是自然界中纤维素是自然界中纤维素含量最高的天然产物；含量最高的天然产物；木材，秸秆木材，秸秆等也富含纤维素等也富含纤维素纤维素酶，纤维素酶，对这些微生物的研究和应用：1、利用秸秆等产生酒精；2、用纤维素酶处理服装面料。纤维二糖纤维二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素一、基础知识一、基础知识问题：草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？肠胃中的共生微生物可合成纤维素酶。在一支试管中添加纤维素酶，在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不

2、添加纤维素酶；另一支试管不添加纤维素酶；思考思考1实验分析：实验分析：P27的小的小实验是实验是如何构成对照如何构成对照的？的？滤滤纸纸崩崩溃溃法法肠胃中的共生微生物可合成纤维素酶。思考思考1对照组没有加入纤维对照组没有加入纤维素酶，而加入的是素酶，而加入的是1ml缓冲液，缓冲液，可以加入可以加入1ml无菌水吗？无菌水吗？思考思考2在培养过程中，摇床在培养过程中，摇床的作用是什么？的作用是什么？二、纤维素二、纤维素分解菌的分解菌的筛选筛选1、筛选纤维素分解菌的方法、筛选纤维素分解菌的方法_。该方法可以通过该方法可以通过_反应直接筛选。反应直接筛选。刚果红染色法刚果红染色法颜色颜色2、其原理是：

3、、其原理是：刚果红（刚果红（CR）可以）可以与纤维素形成与纤维素形成_，当纤维素被，当纤维素被_分解后，分解后，红色复合物无法形成，出现以红色复合物无法形成，出现以_为中心的为中心的_，可以通过，可以通过_ 来筛选纤维素分解菌。来筛选纤维素分解菌。红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维素分解菌纤维素分解菌 透明圈透明圈是否产生透明圈是否产生透明圈可根据是否可根据是否产生产生透明圈透明圈来筛选纤维来筛选纤维素分解菌素分解菌练一练：练一练：1.1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是下列关于纤维素酶的说法，错误的是A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素

4、酶可把纤维素分解成葡萄糖纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是菌，下列说法错误的是A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌

5、选出了纤维素分解菌三、三、实验设计实验设计土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂将样品涂布到布到鉴别鉴别培养基培养基挑选挑选菌落菌落什么样什么样的环境的环境取样取样? 培养的目的培养的目的? ? 挑选什挑选什么样的么样的菌落菌落? ?如何如何鉴别鉴别? ?环境环境：富含纤：富含纤维素的环境中；维素的环境中；根据：生物与根据：生物与环境相互依存。环境相互依存。目的：目的：增加纤维素增加纤维素分解菌的浓度分解菌的浓度，刚果红染色法刚果红染色法土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落( (三三) )、实验设计、实验设计可以省略土壤取样环境：

6、选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。 理由：生物与环境的互相依存关系，旁栏思考1 取样的环境是怎样的，作出这种选择的理由是什么？作用：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。 将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。旁栏思考2将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？1、纤维素分解菌选择培养基、纤维素分解菌选择培养基属于属于_（固体、液体）培（固体、液体）培养基，原因是养基，原因是_液体液体没琼脂没琼脂2、该培养基对微生物该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是如果具有，其选择机制是_ 具有具

7、有 以纤维素粉以纤维素粉为主要碳为主要碳源，能源，能分解分解纤维素纤维素的微生物可以大量繁殖；的微生物可以大量繁殖；选择培养若设置一个对照实验说明选择培养的作若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将用，应控制的变量是将_改为改为_。3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？的作用？葡萄糖葡萄糖纤维素粉纤维素粉4、选择培养的目的：、选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度 5、操作方法：操作方法：将土样加入装有将土样加入装有30ml选择选择培养基（液体）的培养基（液体）的锥形瓶锥形瓶中，将锥形瓶固定在中，将锥形瓶固

8、定在摇床摇床上，在一定温度下震荡培上，在一定温度下震荡培养养12天，直至培养液变天，直至培养液变浑浊浑浊。也可重复选择培养。也可重复选择培养思考：思考：为什么选择培养能够为什么选择培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到制，因此可以起到“浓缩浓缩”的作用的作用方法一：方法一：先培养微生物，再加先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应入刚果红进行颜色

9、反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚在倒平板时就加入刚果红果红刚果红染色法刚果红染色法培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子KH2PO4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100mL碳源、生长因子碳源、生长因子琼脂琼脂 15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸上述物质溶解后，加蒸馏水定容至馏水定容至1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别鉴别纤维素分解菌的培养基纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠)染色法染色法优点优点缺点缺点方法一方法一 方法二方法二 颜色

10、反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用 操作繁琐，刚操作繁琐，刚果红会使菌落之间果红会使菌落之间发生混杂发生混杂操作简便，操作简便，不存在菌落不存在菌落混杂问题混杂问题 产生淀粉酶的产生淀粉酶的微生物也产生模糊微生物也产生模糊透明圈，有些微生透明圈，有些微生物能降解色素，形物能降解色素，形成明显的透明圈。成明显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足思考：这两种方法各有哪些优点与不足挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落 挑取产生挑取产生明显的透明圈的菌落，明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。一般即为分解纤维素的菌落。 接种到接种到纤维素分解菌的纤维素

11、分解菌的选择选择培养培养基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培养，可获得纯培养，可获得纯培养。培养。旁栏思考1本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上；本课题通过选择培养使细菌增殖后，再涂布在鉴别培养基上。其它操作基本基本相同。四、结果分析与评价四、结果分析与评价 1.1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。培养基制作合格。 如果观察到产生

12、透明圈的菌落，则说明可能获得如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。了分解纤维素的微生物。 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行还需要进行_实验，纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有发酵方法有_ _ 发酵和发酵和_ _ 发酵。纤发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的维素所产生的_ _ 含量进行定量测定。含量进行定量测定。发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶 液体液体 固体固体 五、课题延伸五、课题延伸分解分解纤维纤维素的素的微生微生物的物的分离分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化

13、种类、作用、催化刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌课堂总结课堂总结1 1、请回答下列与检验饮用水有关的问题：、请回答下列与检验饮用水有关的问题：（1 1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量记录菌落数量, ,这种方为这种方为 。下。下面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的是是 。 A B C DA B C D稀释稀释涂布涂布平板法平板法D