昆虫sf细胞培养.docx

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1、Sf9培养要点：温度：27-28摄氏度pH：，sf9最适的，随培养时间的延长，Ph值会增加传代时间：72h三天左右细胞来源：Sf9货号B825-01和Sf21货号B821-01细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫草地夜蛾蛹的卵巢组织。以上来自invitrogen细胞特点：规那么的带有颗粒球形。贴壁紧。标准条件的定义：培养最低密度：106/ml安康对数生长期细胞活率至少应不低于90。活率低于90细胞不是在最正确条件下培养不能用于实验1106/mL将出现对数生长状态

2、传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层如下定义然后1：5细胞体积：最后培养基体积稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养悬浮培养：在细胞密度到达106106细胞/mL后将密度调整至106106细胞/mL进展悬浮传代。确保传代细胞密度不高于4106个/mL或保持密度高于1106个/mL以到达对数生长状态。Sf9悬浮培养所需要的细胞数培养基：sf-900 SFM添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量培养瓶与培养体积：冻存：一旦细胞系建立且倍增规律那么可以进展冻存。细胞需到达90活率和80-90融合的要求如：低代次推荐冻存几管。当融解细

3、胞，它将会到达最正确使用状态。1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。细胞可是悬浮或贴壁培养；2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记；3. 室温400-600g离心10min。移除上清。4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞；5. 移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中；6. 置于-201h，然后移至-8024-48h；7. 储存于液氮中。转染的细胞：需要的是对数期的细胞95%发育能力，可以完成成功的转染。载氧：对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50%Sf900II和sf900的区别：一般推荐Sf900II来大量表达蛋白Sf900II含有外表活性剂剪切力保护剂保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的方案时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。细胞培养的一般顺序：复苏传代传代稳定冻存应当遵循的一般过程：复苏贴壁培养悬浮悬浮扩大培养产生目标蛋白也可不经过贴壁培养，直接悬浮培养贴壁时间：45min悬浮的转速：80rpm附：离心机rcf与g的换算：无血清培养基可以选择性参加一定的抑菌剂防止细菌或者真菌污染：培养基：GIBCO-SFM900 加青霉素链霉素抑制细菌生长两性霉素B抑制真菌生长