低分子量灰树花多糖的分离 纯化和抗肿瘤活性.docx

《低分子量灰树花多糖的分离 纯化和抗肿瘤活性.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《低分子量灰树花多糖的分离 纯化和抗肿瘤活性.docx（10页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、本文档下载自文库下载网，内容可能不完整，您可以点击以下网址继续阅读或下载：低分子量灰树花多糖的分离、纯化和抗肿瘤活性低分子量灰树花多糖的分离、纯化和抗肿瘤活性陈向东，刘晓雯，吴梧桐!中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京!$【摘要】目的：从灰树花菌丝体中分离纯化低分子量多糖并进行结构鉴定和抗肿瘤活性检测。方法：采用大孔吸附树脂和离子交换纤维素进行分离，紫外光谱、红外光()* 柱层析纯化，测定分子量，谱、薄层色谱和高效液相色谱和气相色谱等进行纯度和结构鉴定。用荷瘤小鼠检测抗肿瘤活性。结果：得到大、小两种多糖组分，其中低分子量多糖为白色粉末状，分子量约为，单糖组成为葡萄糖，含，!对肉瘤、分离得到

2、一种灰树花菌丝体，糖苷键，腹水瘤、实体瘤都有明显抑制作用。结论：!多糖，为低分子量的!初步药效试验表明其具有抗肿瘤作用。葡聚糖，【关键词】灰树花菌丝体；多糖；分离纯化；理化性质；分子量；抗肿瘤【中图分类号】;【文献标识码】【文章编号】灰树花（$()* (）是一种药、食兼用的、珍稀食用菌，具有广泛的药理活性，如抗肿瘤!抗糖尿病、抗氧化、以与抗辐射、调节免疫功能，抗菌等，灰树花多糖是其中最重要的示差折光检测器和!工作站。实验动物雌雄兼用，中国药科大学小鼠，实验动物中心提供。方法与结果灰树花多糖的分离大孔树脂分离称取一定量灰树花菌丝体粗提物中分离纯化得到一种无色的低分子量多糖，并对其理化性质与抗肿瘤

3、活性进行了初步研究。!仪器与材料试剂粗提物，加倍水室温搅拌下浸提!次，离心取上清。上清液上大孔吸附树脂柱，以水洗脱，洗脱液浓缩，加倍量$乙醇，离心，沉淀用无水乙醇与丙酮洗涤，减压干燥得浅黄色多糖。!离子交换纤维素分离上述多糖溶于水，用离子交换纤维素柱层析，水洗脱，洗脱液浓缩、醇沉、洗涤、干燥得无色多糖。硫酸苯酚法测定糖含量为，收率为菌丝体粗提物的。()* 柱层析分离多糖水溶液用()* 柱层析（集合并主多糖峰，浓缩、醇沉、洗涤、干燥，得纯化多糖。无色多糖水溶液经()* 柱层析，从洗脱曲线（图）可见两个对称峰，第一个多糖峰峰形较矮，出现在外水体积，说明其分子量可能大于万；第二个多糖峰峰形较高，与第

4、一峰完全分开，出峰时间在分子量一万的标准葡聚糖之后，说明分子量小于一万。收集合并第二峰得到纯化灰树花菌丝体粗提物，由山东京博生物科技公司提供；三菱公司出品；)大孔树脂，单糖标()* ，纤维素，)出品；准品，天地欣（香菇多糖注射液），南京)出品；振中生物工程有限公司；其余试剂均为国产分析纯。!仪器自动部分收集器；$气相色谱仪；$紫外可见分光光度计；()*红外光谱仪；)*)!紫外可见分光光度计；配)高效液相色谱仪，【收稿日期】【基金项目】教育部高等学校科技创新工程重大项目（?;资助课题）【!通讯作者】吴梧桐：教授，博导，：的低分子量多糖!$。纯化灰树花多糖!$为白色粉末，易溶于水，不溶于高浓度的乙

5、醇、丙酮等有机溶剂中；与苯酚硫酸显色后，特征吸收峰在说明该多糖不是(。碘试剂反应不显蓝色，直链淀粉。伸缩振动，$?$(*的峰是伸缩振动，*(*的吸收峰说明是糖的水化物，*$(*不太尖的吸收峰是变角振动，*$*(*间比较大的个峰是:伸缩振动，且说明其糖环构型为吡喃型（呋喃型糖环在此区间上只有两个强吸收峰），$(*的吸收峰是型吡喃葡萄糖的非对称环伸缩振动的特征吸收峰，而(*的吸收峰表明糖苷键可能为说型（型糖苷键的吸收峰在(左右处），明灰树花多糖!$可能为:葡聚糖。$)?)$)$*:中，*的$个强吸收峰分别为*.$)和*.)，都处在$*.?以下，这说明!$的糖苷键类型主要是型（型*信号在$*.?以下

6、，*.?以型*信号在$。上）$)?)?$)?)?)*单糖连接方式分析高碘酸氧化取!$多糖$.( ，加多糖的纯度鉴定和含量测定紫外光谱!$多糖配制成*( ?(*溶液，在$.(、$.(进行紫外扫描，$.说明不含蛋白质、核(附近无明显特征吸收峰，酸组分，也不含酚类成分。$)$)$进行层!$多糖溶于水，析，柱为，*?洗脱，示.)*(;差检测器检测。图谱为单一对称峰，峰面积比为)*，表明该多糖为均一组分。$)$)?$)?$)?)*$)?)*)*含量测定测!$多糖以硫酸苯酚法*高碘酸钠溶液$(,，暗处进行.).*(;氧化反应，用分光光度计在$?(处测定光密度，至光密度不再下降即反应完全，加乙二醇终止反应还

7、原剩余的高碘酸，用.).*(*溶液滴定甲酸释放量。!$多糖平均每摩尔糖基消耗高碘酸.)$.(;，生成甲酸.)*$(;，推测含*也可能含有*!$或*糖!?和*糖苷键，。苷键$)?)?)$(降解高碘酸氧化反应液经完全酸水解、乙酰化后，进行分析。发和*糖苷键。$)?)多糖分子量测定采用高效凝胶过滤色谱法（!）。色谱柱为 （?.()(），流动相为.)*(*硝酸钠，流速.)(,?(*，柱温用微孔过滤膜过滤。样品溶解于流动相中，后进样。分子量校正曲线所用标准品为系列，测定结果!$多糖的分子量为$.。$)多糖的抗肿瘤活性研究接种取小鼠*.只，按移植性肿瘤研究法定糖含量为)。多糖的结构测定单糖组成分析薄层色谱

8、*!$多糖( 以$(;三氟乙酸封管水解，减压抽干三氟乙酸，得水解物，溶于水进行硅胶薄层色谱分析，展开系统为乙酸乙酯醋酸甲醇水（*$），苯胺邻苯二甲酸显色。薄层色谱结果仅显示一个斑点，!值与:葡萄糖相同，说明由葡萄糖构成。$)?)*)$气相色谱多糖水解物制成糖醇乙酸酯衍生物，进行气相色谱分析，色谱柱为苯甲基硅烷毛细管柱（?.(.)(.)$!，(）糖苷键构型分析多糖的红外光谱!$多糖$( 与接种后$称鼠重，并随*.、实体型，组机分为*组，空白对照组与天地欣（( *）分别为阴、阳性对照组，中、低?!$多糖组设高、结果于(*进行红外扫描，压片，显示多糖的特征吸收峰，(*的宽峰是个剂量组（!，）。接种(

9、)*后 ,给药，$每天一次，共给药次，于停药后第(天颈椎脱臼处死荷瘤小鼠，称重，并分离瘤块，称重，按下式计算肿瘤生长抑制率：肿瘤抑制率（.）（）其中为对照组平均瘤重（），.，为实验组平均瘤重（）。所得数据进行统计学处理（!检验）。实验结果见表，与生理盐水对照组相比，（!，）组、天地欣组皆有一定的抑制($所选瘤株的肿瘤生长作用（:），(组与天地欣组对小鼠体重增长无明显影响，即不抑制小鼠体重增长。讨论裂褶多糖都是!，一般是以葡聚糖，主链为结构，带有，侧链的梳状分子。一般认为多糖的生物活性很大程度上取决于其分子量大小，通常分子量在(之间的多糖片段有较高的生物活性，而相同来源的分子量在。文献报之间的多

10、糖片段无生物活性道的活性灰树花多糖均为!分子量葡聚糖，灰树花菌丝体粗提物呈黄褐色，要获得纯化的多糖，首先要进行脱色。发酵来源的色素大多为酚类物质，干扰多糖的分离纯化与含量测定，常用脱色方法有：活性炭吸附、纤维素柱层析与双氧水氧化等。活性炭吸附量大、分离效率高，常用于水溶性成分的分离，但酚型化合物多呈负性离子不被活性炭吸附，而且活性炭有可能吸附多糖而损失。双氧水氧化脱色耗时长，脱色不完全，有可能影响多糖的生物活性。离子交换纤维素和离子交换树脂能取得较好的脱色效果，但色素洗脱困难，其原因可能是层析介质被毒化，逆转困难，难以重新获得交换能力从几万到几百万不等。我们分离得到的灰树花多糖(为分子量仅为(

11、，但荷瘤小葡聚糖，鼠肿瘤生长抑制实验表明仍具有良好的抗肿瘤活性，如此小分子量同时又具有活性的型灰树花多糖尚未见报道。除牛膝多糖（分子量约）等少数几种外在其他多糖研究中也未见报道过低分子量的活性多糖。推测(虽然分子量较低，但可能具备与受体结合所必须的特异性寡糖片段，所以具有抗肿瘤活性。小分子的灰树花多糖具有很好的水溶性，注射方便，不产生局部刺激性，具有较好的开发前景。(是苯乙烯类大孔吸附树脂，对灰树花原料中的色素吸附量大，操作条件温和，解吸容易，树脂用乙醇洗涤即可再生，解吸液浓缩可得到色素固体，利于对色素的进一步研究。(脱色后的多糖液再用离子交换纤维素脱色，减少色素对介质的毒化，介质可再生。两种

12、介质联用获得无色的灰树花多糖。报道具有抗肿瘤作用的葡聚糖如香菇多糖和参考文献金国虔（），叶波平（$)），奚涛（.(）灰树花胞内多糖抗辐射作用初步研究（药物生物技术，：，$（!）:)*)$）边杉（$），叶波平（$)），奚涛（.(）灰树花多糖的研究进展（:)*)$），$药物生物技术（!）：张惟杰（）浙江糖复合物生化研究技术杭州：大学出版社，?!，徐叔云（），卞如濂（$），陈修（）药理实验方法人民卫生出版社，?，第版北京：!?吴梧桐（:(）中国医药科技生物制药工艺学北京：出版社，!王健（），龚兴国（ ）多糖抗肿瘤与免疫调节研究进展（*:)），中国生化药物杂志：?!，（!）低分子量灰树花多糖的分离、纯

13、化和抗肿瘤活性作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：陈向东， 刘晓雯， 吴梧桐， ， ， 中国药科大学生命科学与技术学院,江苏,南京中国天然药物 ()次参考文献(条) 外文期刊 () 外文期刊 () 外文期刊 ().金国虔;叶波平;奚涛 灰树花胞内多糖抗辐射作用初步研究期刊论文药物生物技术 () ( ) 外文期刊 () ().边杉;叶波平;奚涛 灰树花多糖的研究进展期刊论文药物生物技术 ().张惟杰 糖复合物生化研究技术 .徐叔云;卞如濂;陈修 药理实验方法 .吴梧桐 生物制药工艺学 .王健;龚兴国 多糖抗肿瘤与免疫调节研究进展期刊论文中国生化药物杂志 ()本文读者也读过(

14、条). 辛晓林.黄清荣.史亚丽 榆黄菇菌丝体多糖提取与抗肿瘤活性研究期刊论文安徽农业科学(). 马亚丽.姚秋萍.马玉芳.黄一帆 油菜花粉多糖不同级分体外抗氧化作用比较期刊论文中兽医医药杂志(). 陈向东.吴梧桐.高向东.吕树军.张奉国.吕正兵 卡介菌多糖的分离纯化与药效研究期刊论文中国天然药物(). 李小定.吴谋成.曾晓波.荣建华 灰树花多糖粗品与纯品的抗肿瘤作用和对免疫功能的影响期刊论文营养学报(). 李汾.袁秉祥.弥曼.任利君.李新华.王多宁.王颖 纯化百合多糖抗肿瘤作用和对荷瘤小鼠免疫功能的影响期刊论文现代肿瘤医学(). 刘晓雯.陈向东.吴梧桐 灰树花菌丝体多糖的分离纯化和理化性质研究期

15、刊论文药物生物技术(). 肖建辉.方宁.刘祖林.陈代雄 药用真菌江西青霉多糖抗肿瘤机制的研究期刊论文中药材(). 江蔚新.江培.张晓燕.闫丽丽 龙胆多糖的体内抗肿瘤作用研究期刊论文中成药(). 杨阳.刘承初.贾薇.刘艳芳.杨炎.张劲松.周昌艳 灰树花多糖的超滤分离与免疫活性研究期刊论文食品科学(). 张春.赵学梅.周丽.牛英才.刘吉成 法测定低分子姬松茸多糖体外抗肿瘤活性期刊论文齐齐哈尔医学院学报()引证文献(条).胡晓静.谢英利.叶群.吴天祥.杨海龙 响应面法优化以中药为基质的灰树花菌丝体发酵培养基期刊论文食品科学 ().雷红.王毅.蔡亮亮.吴梧桐 灰树花子实体多糖的降血糖活性和对葡萄糖苷酶

16、活性的影响期刊论文食品科学 ().沈晶晶.郭顺星.王春兰.陈晓梅 液体深层培养猪苓多糖脱色技术的研究期刊论文中国药学杂志 ().周静华.万顺康.张翠香 大理百合多糖的提取、纯化与性质研究期刊论文现代预防医学 ().丁海龙.何开泽.张磊.付田 黄芪多糖的提取与按相对分子质量分段分离期刊论文应用与环境生物学报().朱燕.陈运喜.吴俊华.谭仁祥 中华芦荟酸性多糖的分离纯化与抗炎活性期刊论文中国天然药物 ().赵鹏 天麻多糖的研究概况期刊论文甘肃中医学院学报 ().梁燕茹.李文权.刘四光 自养小球藻硫酸多糖的红外光谱分析期刊论文海洋科学 ().黄小平 天然抑瘤物的分离纯化期刊论文现代医药卫生 ().刘玉潭.梁华.蔡永萍.林毅.詹少华 天麻多糖提取纯化方法与性质的初步研究期刊论文激光生物学报()本文链接：文库下载网是专业的免费文档搜索与下载网站，提供行业资料，考试资料，教学课件，学术论文，技术资料，研究报告，工作范文，资格考试，文档，专业文献，应用文书，行业论文等文档搜索与文档下载，是您文档写作和查找参考资料的必备网站。文库下载 上亿文档资料，等你来发现