壬基酚对赤子爱胜蚓的生态毒理学研究.docx
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1、壬基酚对赤子爱胜蚓的生态毒理学研究赵晓祥,陈 琪,庄惠生*东华大学环境科学与工程学院,上海 摘要:环境激素对生态的影响越来越受到人们的重视。通过赤子爱胜蚓对壬基酚的滤纸接触法毒性试验,从分子水平揭示环境污染物对蚯蚓组织的毒性影响。在壬基酚对赤子爱胜蚓( ) 的急性毒性试验中,测得 为 。在系列浓度的壬基酚暴露中,过氧化氢酶(,),超氧化物歧化酶( ,)和谷胱甘肽硫转移酶( ,)的敏感性依次为。实验结果表明,这三种酶均可作为早期污染预警指标。关键词:壬基酚;赤子爱胜蚓;过氧化氢酶;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽硫转移酶中图分类号: 文献标识码: 文章编号:()壬基酚(, )是一种非离子表面活性剂,广泛
2、应用于造纸、纺织、橡胶塑料、洗衣粉和洗涤剂等中,与人们的日常生活关系十分密切。然而,研究表明,是一种环境内分泌干扰物,它具有与动物雌激素相似的结构,因而会对受污染生物的内分泌生理功能等产生负面作用。因此,正确了解壬基酚的负面生态效应对生态保护和维护人类自身的健康等均具有重要的现实意义。从研究报导来看,研究主要集中于污染物对蚯蚓的体重、生长和繁殖以与污染物在组织内的富集情况,缺少生化或细胞层次上的研究。该试验以为污染源,赤子爱胜蚓( )为材料,过氧化氢酶(,)、超氧化物歧化酶( ,)、谷胱甘肽硫转移酶( ,)为生物标志物进行毒理试验。 材料与方法 材料蚯蚓:赤子爱胜蚓,购于上海松江蚯蚓养殖场,体
3、质量约 ,对污染物具有中等的敏感性。试验前在土壤中预培养一段时间后,选择大小差不多,体质量约 左右,环带明显的成蚓进行试验。试剂:壬基酚(, )(公司),化学分子式为,化学结构式如下: 试验方法1.2.1 实验预处理将挑选的蚯蚓洗净表面泥土后放入 的已润湿的烧杯中,用塑料薄膜(已用尖嘴镊子在塑料薄膜上扎孔)封口,置于黑暗处清肠一昼夜(以除去肠道内的杂物等)。试验时,在直径为 的玻璃时间培养皿内垫入双层直径为 的滤纸。将用丙酮稀释成一定尝试梯度的试验液进行蚯蚓滤纸法的预试验,以确定对蚯蚓致死的剂量范围。1.2.2 高浓度急性毒性试验实验时将清肠后的蚯蚓表面冲洗干净后,用滤纸吸干蚯蚓表面的水分,每
4、条蚯蚓放入一个培养皿中。在培养皿的盖子内侧垫上一层已用 水湿润的直径为 的滤纸,然后盖上培养皿盖以保证蚯蚓生活在温度相对稳定的环境中。将培养皿放在无光照的条件下培养 。1.2.3 低浓度慢性毒性试验在确定蚯蚓的 后,进行蚯蚓慢性毒性实验。设置空白对照组,空白对照组只添加溶剂丙酮;在蚯蚓的致死范围内设置个浓度梯度( 、 、 )进行蚯蚓慢性毒性试验。实验期间每天取各浓度蚯蚓条做平行试验,洗净剪取其环带前部分,用磷酸缓冲液洗掉表面血液,用滤纸吸干水分,放入研钵加 磷酸缓冲液进行研磨,再进行离心( ) ,上清液即为粗酶液。1.2.4 酶活力测定过氧化氢酶()的测定方法:用贝尔斯西策尔斯( )法(改进型
5、)测定过氧化氢酶,反应系统包括 底物溶液(磷酸盐缓冲液把 过氧化氢稀释至 )、 蒸馏水和 粗酶溶液,调温至 。在 处以蒸馏水为参比在连续 内测定吸光度,每隔 读取次结果,直至每分钟吸光度的降低值达到稳定为止。按以下公式计算活性:式中: 处每分钟内吸光度的降低值每 所用酶液中含酶的质量() 处 过氧化氢的吸光度反应混合液的总体积超氧化物歧化酶()的测定方法:本实验选用改进邻苯三酚自氧化法测定活性,具体步骤如下:首先测定邻苯三酚自氧化速率:取 ( )缓冲液, 蒸馏水,混匀后在水浴保温 ,取出后立即加入25 预热过的 邻苯三酚 (以 配制,空白管用 代替邻苯三酚的溶液),迅速摇匀倒入比色杯(光径 )
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