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1、关于分子生物学实验现在学习的是第1页,共18页基因多态性多态性是指在一个生物群体中,同时和经常存在两种或多种不连续的变异型或基因型(genotype)或等位基因(allele),亦称遗传多态性(genetic polymorphism)或基因多态性。DNA片段长度多态性基因多态性DNA重复序列多态性单核苷酸多态性 现在学习的是第2页,共18页DNA片段长度多态性(FLP):即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性内切酶位点的变化,而导致DNA片段长度的变化,又称限制性片段长度多态性。DNA重复序列的多态性(RSP) :主要表现于重复序列拷贝数的变异 ,如小卫星DNA和微卫星DNA。单核苷酸
2、多态性(SNP) :即散在的单个碱基的不同,基因组中单核苷酸的缺失,插入与重复序列不属於SNP,但更多的是单个碱基的置换。 现在学习的是第3页,共18页CLEC 是是C type lectin(C型凝集素)家族基因型凝集素)家族基因 CLEC4M基因是基因是19号染色体上号染色体上C型凝集素家族中的一员,它被型凝集素家族中的一员,它被证明是多种传染性疾病病毒的受体,如证明是多种传染性疾病病毒的受体,如HIV-1, SARS-Cov, HCV等。该等。该基因的第基因的第4外显子的外显子的VNTR (Variable Number of Tandem Repeats,VNTR )在全球人类群体中存
3、在在全球人类群体中存在3-9次重复的多态现象,并被认为这种不次重复的多态现象,并被认为这种不同长度的多态可能和宿主对病毒的易感性有关。同长度的多态可能和宿主对病毒的易感性有关。 现在学习的是第4页,共18页现在学习的是第5页,共18页CLEC4M CLEC4M 与与SARSSARS体内存在一种SARS冠状病毒的受体L-SIGN,由CLEC4M基因所编码。该基因第4 4外显子存在3-93-9个6969bp的重复片段,人群中超过50%的人以7个重复为主,常见的基因型为7/77/7,5/55/5,7/5 7/5 等不同的纯合或杂合状态,这个重复区编码位于胞外受体的颈部。研究表明,纯合型如7/7或 5
4、/5的个体较杂合型7/5的个体较少感染SARS病毒。现在学习的是第6页,共18页CLEC 4MCLEC 4M基因序列基因序列现在学习的是第7页,共18页实验原理原理:用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜细胞,释放DNA,用浓盐法沉淀蛋白质,离心去除蛋白质,再用异丙醇沉淀DNA。裂解液配方:10mM Tris-HCl,10mM KCl, 10mM MgCl2, 2mM EDTA, 0.4M NaCl, 1%SDS.现在学习的是第8页,共18页现在学习的是第9页,共18页2PCR mixddH2O引物1,引物22PCR mix 10l引物引物1,引物,引物2 各各0.4lddH2O 6.2l DNA样品
5、样品 3l PCR反应体系,反应体系, 总共总共20 l现在学习的是第10页,共18页在在PCRPCR管盖上标记号码,便于辨认管盖上标记号码,便于辨认现在学习的是第11页,共18页放入放入PCRPCR仪,并设置程序仪,并设置程序变性变性 95 5min 5min 95 20s 20s30循环循环 59 30s 30s 72 45s 45s延伸延伸 72 5min 5min现在学习的是第12页,共18页PCR过程大概100分钟现在学习的是第13页,共18页PCR仪器界面和参数现在学习的是第14页,共18页紫外透射分析现在学习的是第15页,共18页点 样将PCR扩增产物加入琼脂糖凝胶孔内,点样量10l现在学习的是第16页,共18页100bp DNA marker,最亮的为500bp500bp杂合子,根据位置判断为589和727bp。杂带,分子量小,或是引物二聚体结果分析同学们,你们的基因是纯合还是杂合呢?现在学习的是第17页,共18页感谢大家观看2022-8-21现在学习的是第18页,共18页
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