同型半胱氨酸测定检测操作程序.docx

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1、概述血清同型半胱氨酸(Hcy)是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。Hcy水平升高被认为是动脉粥样硬化性疾病独立的渐进性致病因素，血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关，同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸，Hcy的正常参考值随测定方法与种族人群的不同而有所不同，一般正常空腹血浆总Hcy水平为5-15mol/L。研究表明：Hcy每升高5umol/L脑卒中风险升高59%，缺血性心脏病风险升高32%；Hcy每降低5umol/L脑卒中风险降低24%，缺血性心脏病风险降低16%.Hcy水平与心血管事件风险呈正相关。1

2、目的规范血清同型半胱氨酸检测测试，确保检测结果准确性与重复性。2 检测方法与原理2.1检测方法：速率法2.2检测原理：本产品基于一种新型酶法，样本中的氧化型Hcy被转化为游离型Hcy后，进行一系列循环反应，这种基于共价 底物转化产物的酶循环反应系统大大提高了检测的灵敏度，主要是利用S-腺苷同型半胱氣酸(SAH)水解酶反应原理， 在该反应中SAH被水解酶水解成腺苷与Hcy,腺苷立即水 解成氨与次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，NADH 转化为NAD,样本中Hcy浓度与NADH转化速率成正比。3 标本采集与保护新鲜无溶血血清或EDTA、肝素抗凝血浆遵守以下推荐的血清标本处理，运行与储存步骤3.1

3、用真空采样管采集血液标本时须遵守常规注意事项3.2离心前使标本完全自然形成凝块3.3全程保证样品管的密闭状态3.4尽快分离血清，并及时测定3.5如果标本不能在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在4或更低温度的环境中：3.6冷藏标本室温放置20分钟后再测定；3.7冷冻标本室温解溶后放置20分钟后再测定3.8不符合标本处理3.8.1溶血与乳糜血标本在报告单的备注栏注明3.8.2标本量过少的标本，严重溶血与乳糜血标本与临床沟通并将标本退回，填写不合格标本拒接登记。4 试剂与设备4.1试剂采用深圳奥萨制药试剂4.1.1试剂组成试剂1 S-腺苷甲硫氨酸（SAM) 0. 1 mM烟酸胺腺嘌呤二核苷酸（

4、NADH) 0. 3 mM三（2-羧乙基）膦氯化氢（TCEP) 0. 5 mM酮戊二酸（Oxoglutarate) 5. 0 mMHcy甲基转移酶（HMTase) 5.0 KU/L试剂2 谷氨酸脱氢酶（GLDH） 10.0 KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶（SAHase） 3.0 KU/L腺苷脱氨酶（ADA） 5.0 KU/L4.1.2试剂准备;恢复室温后使用4.1.3试剂保存试剂28避光保存，并于有效期为12个月4.2质控品质控品为与试剂配套的临床化学质控品4.3警告与注意事项4.3.1只可用于体外诊断；4.3.2试剂中含有防腐剂与稳定剂，可能存在一定刺激作用与毒性，请勿直接接

5、触皮肤与眼睛，请勿吞服；4.3.3试剂盒的测定结果仅作为临床各种疾病的辅助诊断依据4.4仪器便携式同型半胱氨酸监测仪5 操作程序5.1检测过程流程签收样品离心上机检测审核报告签发报告标本保存5.2样本签收严格按标本接收程序签收标本5.3标本处理以3000r/min，离心610min，分离血清上机测定，若标本不能及时检测，将分离血清冷藏于28的冰箱内5.4标本检测5.4.1从冰箱中取出试剂1 (R1)与试剂2 (R2),使试剂恢复至室温；5.4.2按照便携式同型半胱氨酸检测仪操作方法，插卡，输入样本信息，确认；5.4.3按照仪器提示，精密量取8 u 1样本加入试剂1的比色管中；5.4.4启动反应

6、，等到仪器发出提示音后，按照仪器操作步骤，精密量取40 u 1试剂2加入比色管中；5.4.5仪器启动检测；5.4.6自动检测完成后，读取检测结果或打印报告5.5检验后标本保存保存在标本冰箱内，保存期为7d6 校准程序6.1校准品的准备与储存直接使用，28保存。6.2校准条件在室内质控失控，或更换仪器主要配件，或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为21d6.3校准程序本仪器校准由厂家工程师负责校准。7 质量控制程序7.1控制品的准备与储存试剂28避光保存7.2控制品水平与分析批长度每24h至少进行1批。7.3质控操作程序参见生化组的质量控制操作程序。8 性能参数8.1准确性 线性偏差不超过

7、10%8.2精密度 CV108.3线性范围 348umol/L9 生物参考区间015umol/L10异常结果的处理结果与诊断不符或两次结果差异较大时，应及时与临床沟通。11 临床意义10%的冠心病患者与同型半胱氨酸升高有关，轻、中度同型半胱氨酸水平升高可使心血管疾病死亡危险性增加4-6倍，血浆总Hcy水平每升高5mol/L则冠心病危险性男性增加60%，女性增加80%，相对危险性男性为1.6，女性为1.8，相当于总胆固醇每升高20mg/dL的危险性，因此成为冠心病的一个独立危险因素。血浆同型半胱氨酸水平与冠状动脉病变血管的支数有一定关系，有人研究结果表明，单支、双支、多支血管病变的患者血浆Hcy

8、水平呈逐级上升趋势。并且与血管病变的严重程度有关，研究表明，冠状动脉狭窄99%的患者血浆Hcy水平明显高于狭窄75%的患者。血浆同型半胱氨酸水平还与冠心病患者的远期预后、生存率、病死率有关。12 干扰因素抗坏血酸0.5g/L对实验结果无影响。胆红素855mol/L对实验结果无影响。血红蛋白5.0g/L对实验结果无影响。乳糜2.0%对实验结果无影响。13 安全防护措施13.1血液标本运输必须保证运输过程的生物安全，防止溢出。血液标本溢出后，应立即对污染环境与设备进行消毒处理；13.2对标明有污染性疾病的血液标本应特别的防护，以不污染环境与保证工作安全为前提；13.3在进行血液分析的一切操作过程中

9、应按照检验科生物安全管理程序进行；13.4与血液标本接触的一切器皿。仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员不小心接触到了这种污染源时，应立即用清水清洗被污染区域并进行消毒；13.5如果操作人员皮肤或衣服上污染（沾到）了血液或废液应立即冲洗并进行消毒处理。如果眼睛被溅入了血液或废液应立即用大量清水冲洗并进行必要的医疗措施。13.6血液标本离心的过程中所有标本都应该加盖，离心后，开启试管时应注意防止气溶（雾）胶污染环境；13.7所有检测过的血液标本及有关废物，都会给您带来潜在的危险及生物污染。所有废弃样本及废物的处理方法同血液标本的处理程序。14 参考文献14.1深圳奥萨制药试剂盒说明书14.2临床实验室操作规程编写要求14.3生化组仪器设备操作程序14.4全国临床检验操作规程第4版15 支持文件15.1标本签收制度15.2不合格标本拒收制度15.3标本处理程序15.4实验室安全管理程序15.5检验科生物安全管理程序16 记录表格16.1不合格标本拒收登记表16.2标本复检登记表第 8 页