医学专题一IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体.docx

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1、附件1 IgM捕捉ELISA法MacELISA检测出血热IgM抗体本试剂盒系采用抗人链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96人份/包装。试验材料：1抗人IgM抗体链：用pH9.5的包被液包被酶标板2冻干阳性血清/冻干阴性血清1支， 0.2ml/支，工作浓度为1：10；3冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物1支， 0.5ml/支，工作浓度为1：20；4冻干小牛血清1支，1ml/支；5浓缩洗液10倍浓缩1瓶，50ml；标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液；6A

2、/B显色液和终止液各1瓶。冻干试剂先用相应量的去离子水溶解，然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用，余下的放-20保存7终止液：4N H2SO48酶标仪。检测步骤：1将待检血清用稀释液100倍稀释，参加已包被抗人链抗体的酶标板一孔中，100l/孔，同时参加已1：10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔，100l/孔，置37水浴孵育1小时。2弃去血清，用PBST漂洗5遍，甩干。3将冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物1：10稀释后，参加反响板相应孔内，100l/孔，37水浴孵育1小时。4弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干。5加显色液:于各反响孔内加A/B液各一滴，37，避光35分钟。6加终止液4NH2

3、SO4于每反响孔，一滴/孔。结果判断：1目测方法：阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；假设待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色TMB，那么标本为出血热IgM抗体阳性，反之阴性。2酶联免疫检测仪检测：于450nmTMB阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N2.1，对照成立；假设待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值2.1，那么标本为流行性出血热IgM抗体阳性，反之阴性。阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，假设大于0.05按实际数值计算意义：阳性结果，说明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。内容总结1附件1 IgM捕捉ELISA法MacELISA检测出血热IgM抗体本试剂盒系采用抗人链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体23冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物1支， 0.5ml/支，工作浓度为1：2033将冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物1：10稀释后，参加反响板相应孔内，100l/孔，37水浴孵育1小时