多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因.doc

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1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌四环素耐药基因检测闫国超，张征(河北医科大学第一医院，050031)【摘要】 目：了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌四环素耐药基因检出情况。方法：收集2007年1月2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者MRSA 45株，采用聚合酶链式反应进行四环素耐药基因检测。 结果：45株MRSA中有26株检出四环素耐药基因，检出率为57.8。 结论：四环素耐药基因检出率较高，是MRSA对四环素类抗菌药物耐药重要机制。【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MRSA；四环素耐药基因；tetM基因Research on the tetracycline drug-resistant g

2、ene of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus YAN Guo-chao, ZHANG Zheng(1. The Frist Hospital of Heibei Medical University，Shijiazhuang 050031)【ABSTRACT】Objective: To learn the tetracycline drug-resistant gene of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Methods: 45 strains of MRSA we

3、re clinically isolated from the patients in The First Hospital of HeBei Medical University from January 2007 to June 2008. The tetracycline drug-resistant gene were detected by polymerase chain reaction(PCR) methods. Results: Among 45 strains of MRSA, the rate of positive of the drug resistant genes

4、 tetM were 57.8（26/45）. Conclusion: The isolating rates of drug-resistant genes such as tetM in Multiple drug-resistance MRSA were higher than. It showed that drug-resistant genes are important mechanism in which MRSA showed drug resistance of the tetracycline.【Key words】Methicillin-resistant Staphy

5、lococcus aureus; MRSA; the tetracycline drug-resistant gene；tetM gene中图分类号：R378.1+1 文献标志码：A 四环素类抗生素是由放线菌产生一类广谱抗生素，常规浓度时有抑菌作用，高浓度时呈杀菌作用，该类抗生素对革兰阳性菌尤其是葡萄球菌抗菌活性较革兰阴性菌高。近年来，随着-内酰胺类、大环内酯类等抗生素耐药性增加、新四环素类抗生素副作用减少，其在临床应用又有增加趋势。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)已为医院感染中常见重要病原菌1，具有多

6、重耐药特征，给临床治疗带来困难。为进一步了解MRSA对四环素类抗菌药物耐药机制，本研究对45株MRSA进行了四环素耐药相关基因检测，现将结果报告如下：材料和方法1材料1.1菌株 45株MRSA为2007年1月2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者痰液、伤口分泌物和脓液等标本，-70保存；质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923。1.2主要仪器 Mastercycler型PCR扩增仪(德国Eppendrof公司)；Bio-Vison-3000型凝胶成像仪（法国Vilber Lourmat公司）。1.3主要试剂 微球菌鉴定卡（湖南天地人生物科技有限公司）；DNA分子量参照物（100b

7、p DNA Ladder）、琼脂糖、溴化乙锭（上海生物工程技术服务有限公司）；四环素耐药基因tetM试剂盒（无锡市克隆技术研究所）。1.4菌种鉴定：应用微球菌鉴定卡鉴定为金黄色葡萄球菌；应用苯唑西林-盐平板筛选法确认为MRSA。1.5四环素耐药基因tetM检测 DNA提取采用蛋白酶K消化法，基因扩增采用聚合酶链式反应法，严格按试剂盒提供说明书进行操作。PCR产物电泳后，将胶块置于凝胶成像系统下照相并鉴定，出现和阳性对照分子相当目条带判断为阳性，tetM产物长度501bp。引物：P1：5-GTGTGACGAACTTTACCGAA-3 P2：5-GCTTTGTATCTCCAAGAACAC-3 2结

8、果2.1 四环素耐药基因tetM检出情况 45株MRSA四环素耐药相关基因tetM检出率为57.8（26/45）；tetM基因PCR电泳结果见图1。图1 tetM基因PCR电泳结果(501bp)900bp800bp700bp600bp500bp400bp300bp200bp100bp从左到右依次为：标准分子量，阳性对照，样本1-样本73讨论MRSA对-内酰胺类、四环素类等多种抗菌药物均有较高耐药性，且呈多重耐药趋势。四环素类抗生素抑菌机制为抑制细菌蛋白质合成。四环素进入细胞后，和细菌核蛋白体30S亚基结合，阻止蛋白质合成始动复合物形成，并抑制氨酰tRNA和mRNA-核蛋白体复合物结合，从而抑制

9、肽链延长和细菌蛋白质合成。细菌对四环素类抗生素耐药机制主要有3种： 由质粒或转座子编码排出因子（Tet A-E，Tet K和Tet L）在细菌细胞膜表达，这些排出因子也称泵蛋白，可介导Mg2+依赖性药物外流。 由质粒或转座子编码核蛋白体保护因子（Tet M和Tet O）在细菌细胞内表达，可和四环素结合，从而阻碍四环素和核蛋白体结合，发挥核蛋白体保护作用。 细菌产生灭活酶。其中TetM耐药基因表达可能为MRSA对四环素类药物耐药中重要耐药机制 2。本研究MRSA中tetM基因检出率为57.8。比陆亚华3（100%）和孔海深4（89.4%）检出率低，这可能和我院患者多来源于烧伤科、普外科、呼吸科，

10、病情较重，且各地区经济水平不一，用药方式不同，产生耐药不均一性有关。MRSA四环素耐药基因研究，为MRSA耐药机制研究提供了实验依据，尤其对tetM基因阳性多重耐药MRSA在医院流行病学研究有一定促进作用，防止MRSA在医院暴发流行。参考文献1 Hiramatsu K, Katayama Y, Yuzawa H, et al. Molecular genetics of methicillin-resistant Staphylococcus aureusJ. Int J Med Microbiol，2002，292(2)：67-74.2 Aminov RI，Garrigues-Jeanjea

11、n N，Mackie RIMolecular ecology of tetracycline resistance:development and validation of primers for detection of tetracycliroteinsJAppl Environ Microbiol，2001，67(1)：22-32.3陆亚华，时庭文，陈虹等. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及耐药基因研究J. 中华检验医学杂志，2005，28（7）：744-745.4 孔海深，徐根云，李雪芬等. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测J. 中华检验医学杂志，2005，28（10）：1027-1029.