高二生物基因工程知识点.docx
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1、高二生物基因工程知识点高二生物基因工程学问点 第一步:目的基因的获得 1. 目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。 2. 原核基因实行干脆分别获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3. PCR技术扩增目的基因 (1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 (2)目的:获得大量的目的基因 (3)原理:DNA双链复制 (4)过程: 第一步:加热至9095DNA解链为单链; 其次步:冷却到5560,引物与两条单链DNA结合; 第三步:加热至7075,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 (5)特点:指数(2n)形式扩增 其
2、次步:基因表达载体的构建(核心) 1. 目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。 2. 组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因 (1)启动子:是一段有特别结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。 (2)终止子:也是一段有特别结构的DNA片段 ,位于基因的尾端。 (3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步:将目的基因导入受体细胞 1. 转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细
3、胞内维持稳定和表达的过程。 2. 常用的转化方法: 将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因法和花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。方法的受体细胞多是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的缘由是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ,最常用的原核细胞是大肠杆菌 ,其转化方法是: 先用Ca2+处理细胞,使其成为感受态细胞 ,再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在肯定的温度下促进感受态细胞汲取DNA分子,完成转化过程。 3. 重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表
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