[温郁金对饮用ＭＮＮＧ大鼠胃黏膜增殖的影响]郁金的功效与作用.docx

《[温郁金对饮用ＭＮＮＧ大鼠胃黏膜增殖的影响]郁金的功效与作用.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[温郁金对饮用ＭＮＮＧ大鼠胃黏膜增殖的影响]郁金的功效与作用.docx（7页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、温郁金对饮用大鼠胃黏膜增殖的影响郁金的功效与作用 摘要：目的：探讨姜科姜黄属植物温郁金水蒸气蒸馏提取液对饮用化学致癌剂(N甲基N硝基亚硝基胍，MNNG)的wistar大鼠胃黏膜PcNA表达的影响。方法：80只wistar雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组，每组16只，A组为空白组，饮用纯净水，生理盐水5mL灌胃1次/天；B组为造模组，自由饮用100g/mL的MNNc溶液，生理盐水5mL灌胃1次/天；C组：MNNG饮用量同B组，塞来昔布10mg/kg剂量5mL灌胃1次/天；D、E组MNNc饮用量同B组，1g/mL和2g/mL的温郁金水蒸气蒸馏提取波5mL灌胃1次/天。BE组试验初6周予10

2、NacI溶液1mL每周灌胃1次。试验时间40周，试验期间死亡、经病理证明有或无胃肿瘤的动物均为有效动物，计入诱癌状况统计。完成试验之动物于第41周处死，取胃黏膜(已致瘤者选取致瘤部位)免疫组化检测PCNA表达，Leica图像分析系统分析结果。结果：PCNA阳性表达主要见于细胞核内，C、D、E组大鼠PCNA积分光密度均低于B组，差异有统计学意义(P0.05)，D组与C组比较PCNA积分光密度差异无统计学意义(P0.05)，E组PCNA积分光密度高于D组和E组，差异有统计学意义(P0.05)。结论：温郁金水蒸气蒸馏提取液可抑制饮用MNNG大鼠胃黏膜PCNA的表迭，这可能是其降低胃癌发生率，显示较好

3、胃癌化学预防实力的机制之一。 关键词：温郁金；PCNA；胃癌；MNNG 中图分类号：R33文献标识码：A文章编号：16737717(2007)09186803 温郁金是姜科姜黄属植物的一种，作为传统中药应用广泛。关于郁金的很多现代探讨表明郁金提取物对体内外肿瘤细胞的增殖均有抑制作用，有肯定的预防肿瘤实力。PCNA是真核细胞DNA合成所必需的一个酸性蛋白，其表达水平反应细胞增殖状态，可以作为组织恶性化转变过程及程度的一个重要指标，与胃癌的发生，发展，转移有着亲密的关系，两者具有较好的相关性。为了进一步明确温郁金对肿瘤的作用，笔者探讨了温郁金对饮用MNNG大鼠胃黏膜PCNA表达的影响，以期探讨其预

4、防肿瘤作用机制。 1材料与方法 11 材料 温郁金产自浙江温州，水蒸气蒸馏提取液由本院制剂中心制备。6周龄雄性Wistar大鼠80只，平均体重180200g，购自中科院上海动物探讨所，饲养于浙江中医药高校试验动物中心，专人管理。MNNG购自Adfich公司，塞来昔布购自SEARLE公司，NaC1购自华东医药公司。PCNA小鼠抗大鼠单克隆抗体购自LAB VISION公司PV6001(PowerVisionTMTowStep)免疫组化检测试剂盒购自北京中山金桥生物技术有限公司。 12动物分组及处理80只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组，每组16只。A组为空白组，仅赐予纯

5、净水饲养同时予生理盐水5mL灌胃1次/天；B组为造模组，自由饮用浓度为100g/mL的MNNG液同时予生理盐水5mL灌胃1次/天；C组(塞来昔布组)：MNNG饮用量同B组，同时予塞来昔布10mg/kg剂量5mL灌胃1次/天；D(一倍郁金组)、E(两倍郁金组)MNNG饮用量同B组，同时分别予1g/mL和2g/mL浓度的温郁金水蒸气蒸馏提取液5mL灌胃1次/天。BE组试验初6周予10NaCI溶液1mL灌胃1次/周。试验时间40周，第41周处死动物，留取标本。 13标本处理试验期间死亡动物留取胃黏膜标本，计入诱癌率统计。第41周处死动物，解剖，取出胃，沿大弯切开，将腺胃沿纵轴5等分快速放入10中性福

6、尔马林溶液中固定(已致瘤者取成瘤部位)，石蜡包埋，病理连续切片为3m厚，留取1张行常规HE染色，1张按相关试剂盒说明(PowerVisionTMTowStep)检测组织PCNA的表达。 14PCNA表达结果分析用显微镜先在100倍视野下确定5个染色明显区域，再在400倍视野下记录每个区域一个视野内的阳性细胞数及细胞总数，取其平均值，以阳性细胞数/细胞总数1为PCNA表达阳性，计算每组阳性表达率。 采纳德国Leica standard Version 2.8多媒体彩色病理图像分析系统对细胞核内表达的PCNA进行定量分析。 在光学显微镜40倍视野下选定所要进行测定的病变组织，冻结图象，将光镜下的组

7、织图象经显微摄象系统输入计算机，然后启用自动图象分析系统，首先对所选定视野组织细胞PCNA行光密度测定，继而用光标笔采集勾画出拟行测定的细胞核轮廓，进行选择性修饰后，通过计算机自动数据采集系统计算出所测视野阳性细胞核面积，并计算积分光密度。每个标本均按上述标准选取5个视野采集数据，取其平均值，计算积分光密度作统计分析。 15统计学分析 应用SPSS11.5软件包进行统计学分析，诱癌率比较采纳X2检验，计量资料采纳均数分析，t检验。 2 结果 32只大鼠在试验过程中死亡，其中A组7只，B组6只，C组4只，D组7只，E组8只，试验前5个月死亡24只，解剖示肺部有淤血或出血点，胃肉眼观无明显异样，病

8、理仅示胃黏膜慢性炎症，余脏器未见明显异样，死亡系灌胃时药物误吸所致。第6个月死亡4只，均死于肺瘀血，两只有溃疡产生(B组和E组)，两只病理示胃黏膜肠化伴低级别上皮内瘤变(B组)，第9个月死亡4只，其中1只病理示胃癌(B组)，D组1只E组2只死于肺瘀血病理示属D组者有上皮内瘤变。 试验结束全部动物胃组织病变状况：A组无胃癌发生B组胃癌发生率为44(7/16)，C、D、E组的胃癌发生率均为12.5(2/16)，与B组比较差异均有统计学意义。除胃癌之外，各组尚有其他组织学改变如萎缩、肠上皮化生和上皮内瘤变等。 完成试验之动物胃组织病变状况及胃癌发生率比较，随着病变程度的加重各组PCNA阳性表达增加，

9、相对于B组，C、D、E组阳性表达率较低。 PCNA主要表达在胞核，染色由浅黄色至棕褐色不等，A组仅有4个标本散在PCNA弱表达，无明显阳性面积及光密度可测定。余各组PCNA表达状况及比较详见 3讨论 郁金是具有悠久历史的药用食用植物，近两千年来在亚洲各国广泛用作食物调味品、药物、香料、染料等等，马可波罗游历中国后将郁金带到了欧洲，自此在欧洲郁金亦被广泛用作药物及染料，现代探讨发觉郁金具有抗肿瘤活性，体内外试验中对多种肿瘤细胞生长起到抑制作用。 细胞增殖活性的增加被认为是肿瘤发生的早期生物学变更之一。PCNA是真核细胞DNA合成所必需的一种酸性蛋白，是DNA聚合酶8的协助因子，参加DNA的合成并

10、起着重要的调整作用，在静止细胞中PCNA含量很少，作为S期细胞的标记物，PCNA的合成与表达代表着细胞的增殖状态，其阳性程度可干脆反映DNA复制的活跃程度。癌前病变和癌组织的DNA合成处于紊乱状态，PCNA往往明显增加。故抑制PCNA的表达可抑制肿瘤细胞DNA合成，削减细胞增殖，检测PCNA可反应组织病变程度。本探讨中郁金提取液明显降低细胞核PCNA的表达，降低了MNNG诱导胃癌的发生率，提示郁金抑制PCNA过表达或抑制PCNADNA聚合酶活性可能是其预防胃癌发生的机制之一。E组尽管与B组比较中显示了抑制PCNA表达的有效性，差异有统计学意义，但效果不如E组，说明本试验中温郁金提取液1g/mL

11、浓度抑制PCNA表达更为有效，剂量相关副作用可能干扰了治疗效果。笔者以往的探讨提示温郁金提取液体外抑制胃癌SGC7901细胞生长在肯定浓度范围内存在量效关系，本试验中最佳有效浓度尚待进一步探讨。 据Correa胃癌发病学说，胃癌发生过程的模式为慢性浅表性胃炎萎缩性胃炎肠上皮化生异型增生(瘤变)一胃癌。已有探讨发觉当正常胃黏膜向胃癌转变过程中，细胞增殖活性的增加是组织恶性化进程早期生物学变更之一。笔者的探讨显示服用MNNG的大鼠胃黏膜虽HE证明仅有炎症或萎缩但已有PCNA阳性表达，表明此时细胞增殖活性已有加强，且随着组织恶性化程度的加深，PCNA表达也是明显增加，两者较有一样性，这提示当致癌因素存在状况下胃组织恶性化进程早期即有细胞增殖活性的增加，有必要早期即对相关环节进行干预，郁金下调PCNA表达，抑制胃癌发生，在这方面有值得进一步探讨的价值。已有探讨发觉郁金提取物姜黄素及去甲氧基姜黄素可下调人结肠癌HT29细胞PCNA表达，抑制其生长，也有探讨发觉注射DEN诱生肝癌的小鼠肝组织PCNA显著上升，经含姜黄素饮食干预后PCNA可降至正常水平。这些试验结果与笔者对郁金的探讨相一样，提示了郁金有望用于预防肿瘤的发生。