反相高效液相色谱原理_反相高效液相色谱法测定痢必灵片中芍药苷的含量.docx

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1、反相高效液相色谱原理_反相高效液相色谱法测定痢必灵片中芍药苷的含量 摘要：目的：建立一种可测定痢必灵片中芍药苷含量的RPHPLC方法。方法：采纳HypetsilBDS c18(200mm4.6mm,5m)为色谱柱；流淌相为乙腈0.1磷酸溶液(15:85)；检测波长为230nm；柱温：40：流速为1.0mLmin；峰面积外标法定量。结果：芍药苷在39.84796.80gmL范围内呈良好的线性关系，(r=0.9999)，平均回收率为100.2；RSD：1.2。结论：方法简便，快速，精确牢靠，可作为该制剂的质控方法。 关键词：高效液相色谱法；痢必灵片；芍药苷 中图分类号：R284文献标识码：A文章编

2、号：1673-7717(2007)11-2422-02 痢必灵片是由苦参、白芍以及木香提取制成的中药制剂，具有清热利湿的功效，用于湿热痢疾、泻热、腹痛等症状。原标准无含量测定项，不利于质量限制。芍药苷为白芍的主要成分，本文采纳高效液相色谱法测定痢必灵片中芍药苷的含量，结果精确，操作便利，可用于该制剂的质量限制。经方法学探讨，证明本法可行。 1仪器与试药 日本岛津LC2010 A高效液相色谱仪，自动进样系统；CIASSVP ver.6.1色谱数据工作站，BOLONGUSC302超声波清洗器(上海波龙电子设备有限公司)。 乙腈为色谱纯；甲醇、磷酸为分析纯；水为纯化水；芍药苷比照品由中国药品生物制品

3、检定所供应，批号：110736200526，供含量测定用，经HPLC归一化法测定色谱纯度为99.10。痢必灵片(市售，批号：050803、051011、060724，规格：0.5g片)。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：HyperailBDS C18(200 mm4.6mm,5m)；流淌相：乙腈0.1磷酸溶液(15:85)；检测波长为230rim；流速：1.0mLmin；柱温：40；进样量：10L；面积外标法定量。 2.2样品溶液的制备 将10片痢必灵片研磨成细粉，精密称定0.5g置锥形瓶中，精密加入70甲醇25mL，称定重量，超声20min，放冷，再称定重量，用70甲醇补足减失重量，摇

4、匀，将溶液用0.45m微孔滤膜滤过。 2.3阴性空白比照溶液的制备 按其质量标准中的处方比例，制备缺味白芍的阴性空白比照样品，照上述样品溶液的制备方法制成阴性空白比照溶液。 2.4比照品溶液的制备 精密称取芍药苷比照品9.96mg，置50mL量瓶中，加入甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含芍药苷0.20mg的比照品溶液。 2.5系统适用性试验 取芍药苷比照品溶液、阴性空白比照溶液和样品溶液，按上述色谱条件进样10L，测绘HPLC图谱，结果见(图1)。由图谱可知，阴性空白比照溶液在芍药苷比照品出峰时间区域没有干扰峰出现，故样品中的其他组分对芍药苷测定无干扰作用。理论塔板数按芍药苷峰计算

5、不应低于3000。分别度大于1.5，芍药苷对称因子为0.951.05之间。 图1 比照品芍药苷和样品及阴性空白比照液的HPLC图 2.6线性关系的考察 精密称取芍药苷比照品约9.96mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷比照品储备液。按上述色谱条件，分别进样2、5、10、15、20、30、40L，并分别记录峰面积，以峰面积(y)为纵坐标、芍药苷浓度(x)为横坐标进行线性回来，得回来方程：Y=1.41103X-2.67104，r=0.9999，表明芍药苷的溶液在39.84796.80gmL之间呈良好的线性关系。 2.7精密度试验 取芍药苷比照品溶液，重复进样5次，进样量

6、10L，结果：芍药苷峰面积基本不变，RSD为0.5，说明仪器性能良好。 2.8重复性试验取同一批号样品5份(批号：050803)，按2.2项下样品溶液的制备方法平行测定，结果：芍药苷的含量为：2.18mgg，RSD为1.5(n=5)。说明方法重现性良好。 2.9稳定性试验 取同一批号样品溶液(批号：050803)，在常温下放置12h，每间隔2h测定1次，连续共测定6次，结果：芍药苷峰面积RSD为1.6。表明样品溶液在12h内稳定性良好。 2.10回收率试验 精密称取已知含量(每克含芍药苷2.18rag)的同一样品9份，分别精密加入肯定量的芍药苷比照品，按供试品溶液的制备法制备供试品溶液，按所给

7、色谱条件测定峰面积，计算回收率，结果见表1。 2.11样品含量测定 精密量取样品0.5g，按2.2项下方法制备供试样品溶液。另精密称取芍药苷比照品适量，同2.4项下制备比照品溶液，按上述色谱条件进样10L，记录芍药苷峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。 3探讨 本试验曾分别采纳甲醇-水(35:65)，甲醇-0.1磷酸(20:80)，乙腈0.1磷酸溶液(15:85)为流淌相系统，结果以乙腈0.1磷酸溶液(15:85)分别效果好，且峰型尖锐，对称性好，因此选用该系统为流淌相。 试验通过分别采纳甲醇，70甲醇，稀乙醇，0.1molLHC12mL润湿，再加水30mL作为提取溶剂，结果以70甲醇提取法峰型好，杂质干扰少，且基线平稳。在试验过程中，曾对超声提取时间做过考察，结果超声20min后，含量基本不变，表明提取完全。故采纳70甲醇超声20rain提取法，结果更为精确。 芍药中的有效成分芍药苷具有抗炎和抗病原微生物等药理作用。原标准无含量测定项，不利于该制剂的质量限制。为此试验中选择芍药苷为含量测定指标，在文献方法基础上，结合本品药味的性质，确定了提取条件和测定方法，建立质量限制标准，结果表明该方法分别良好，重现性好，结果满足。本法的建立，有利于更好的提高和限制药品质量。