乳腺癌组织中转录因子ZEB1的表达及意义_刘亚敏.doc

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1、DOI:10.13315/ki.cjcep.2013.06.031 594 临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2013 Jun; 29( 6) 乳 腺 癌 组 织 中 转 录 因 子 刘亚敏 ，李金枝 ，张媛媛 ，石端博 ，贺峻祎 ZEB1 的 表 达 及 意 义 摘要： 目的 观察转录因子 ZEB1 在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法 、 33 、 9 、 67 、 16 采用免 疫组化 SP 法 检测 20 例 20 正常乳腺组织 例乳腺增生组织 例乳腺导管内癌组织 例浸润 性导管癌组 织 例浸润性微 乳头状癌 组织及 例浸 润性小叶 癌组织中 Z

2、EB1 的表 达。 结果 正常乳 腺、乳腺增 生症及乳腺导管内 癌组织中 ZEB1 呈阴性，而浸润性导管 癌、浸润 性微乳头 状癌、浸润性小叶癌组织中 ZEB1 的阳性率分 别为 13. 43% （ 9 /67） 、 37. 50% （ 6 /16） 和 55. 00% （ 11 /20） ； 乳 腺浸润性 导管癌 与 浸润性小叶癌组织中 ZEB1 阳性率的差异有统计学意义 （ P 0. 01） ，浸润性导管癌与浸润性微乳头状癌组织中 ZEB1 阳性率的差异有统计学意 义（ P 0. 05） 。乳腺癌组织中有淋巴结转移者 ZEB1 阳性率为 32. 20% （ 19 /59） ，无淋巴 结转移

3、者阳 性率为 13. 20% （ 7 /53） ，两者相比差异有统计学意义 （ P 0. 05） 。 103 例浸润性乳腺癌中 ZEB1 的阳性率 与癌细胞的 Ki-67 增 殖指数具 有相关性（ P 0. 05） ， Ki-67 高增殖指数者 ZEB1 阳性 率较高。 ZEB1 表达与 ER、 PR、 HER-2 的表达 无关（ P 0. 05） 。 结论 ZEB1 在乳腺癌恶性肿瘤中的表达显著升高。 ZEB1 与 乳腺癌 的增殖、浸润 及淋巴 结转移 有关，检测 ZEB1 对 研究乳腺 癌侵袭转 移及判断患者的预后有一定的价值。 关键词 ： 乳腺肿瘤； ZEB1 转录因子； 肿瘤转移 ；

4、免疫组织化学 中图分类 号 ： R 737 9 文献标志码： A 文章编号 ： 1001 7399（ 2013） 06 0594 04 Expression of ZEB1 in breast carcinoma and its clinical significance LIU Ya-min ， LI Jin-zhi ， ZHANG Yuan-yuan ， SHI Duan-bo ， HE Jun-yi （ Department of Pathology ， Shandong University School of Medicine， Jinan 250015， China； Depart

5、ment of Pathology， Laigang Af- filiated Hospital of Taishan Medical College， Laiwu 271126， China； Department of Pathology， Zhangqiu City Peoples Hospital， Ji- nan 250200， China； Mental Health Center of Shandong Province， Jinan 250011， China； Department of Pathology， Qilu Hospital of Shandong Univers

6、ity， Jinan 250012， China） Abstract： Purpose To investigate the expression of ZEB1， an epithelial-mesenchymal transition （ EMT） transcription factor， in breast carcinoma tissues and to examine the correlation between ZEB1 expression and clinicpathological features in patients with breast cancer Metho

7、ds Immunohistochemistry was used to detect the expression of ZEB1 in 20 cases of normal breast tissues， 33 cases of breast hyperplasia， 9 cases of ductal carcinoma in situ （ DCIS） ， 67 cases of invasive ductal carcinoma， 16 cases of invasive micropap- illary carcinoma， and 20 cases of invasive lobul

8、ar carcinoma The correlation was investigated between ZEB1 expression and age， tumor size， estrogen， progesterone and HER-2 receptor status of the patients Results Our data demonstrated that there was no positive ex- pression of ZEB1 observed in normal breast tissues， breast hyperplasia and DCIS Whi

9、le the positive rates of ZEB1 in invasive ductal carcinoma， invasive micropapillary carcinoma， and invasive lobular carcinoma were 13. 43% （ 9 /67） ， 37. 50% （ 6 /16） and 55% （ 11 /20） ， respectively The differences of positive rates between invasive ductal carcinoma and invasive lobular carcinoma w

10、ere statis- tically significant （ P 0. 01） The same trend was observed between invasive ductal carcinoma and invasive micropapillary carcinoma （ P 0. 05） The positive rates in the patients with and without lymph node metastasis were 32. 20% （ 19 /59） and 13. 20% （ 7 /53） ， respectively The differenc

11、e between these two groups was statistical significance （ P 0. 01） The positive expression rate of ZEB1 in 103 cases of invasive carcinoma was significantly correlated with the expression of proliferation index Ki-67 （ P 0. 05） ， indicating that cases with higher proliferation index tend might have

12、higher ZEB1 positive rate The expression of ZEB1 had no correlation with age， tumor size， estrogen， progesterone and HER-2 receptor status of the patients （ P 0. 05） Conclusions The expression of ZEB1 is upregulated in breast carcinomas with more aggressive activity， and it is correlated with the pr

13、oliferation， invasiveness and lymph node metastasis of breast carcinoma Therefore， the detection of ZEB1 expression may be helpful for the investigation of invasion and metas- tasis， and judgment of prognosis in patients with breast carcinoma Key words： breast neoplasms； ZEB1 transcription factor； c

14、ancer metastasis， immunohistochemistry 收稿日期： 2013 02 19 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，近年来国 内乳腺癌的 发病率呈逐年上升趋势 且发病年龄呈 年轻化 转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因 作者 简 介： 刘 亚 敏，女，硕 士，主治 医 师。 E-mail： laigangliuyamin 的重要过程。 EMT 受多种转录抑制因子的调节，如 163 com Snail、 Twist、 ZEB1 等。国内关于 Snail 、 Twist 与乳腺 1， 2 3 4 1 5 1， 2 3 4 1 5 1 2 3 4 5 1 作者单位： 山东大

15、学医学院病理学教研室，济南 250015 2 泰山医学院附属莱钢医院病理科，莱芜 271126 3 上皮 间 质转化 （ epithelial-mesenchymal transition， 4 EMT） 是促进癌细胞侵入邻近组织，发生浸润、转移 山东大学齐鲁医院病理科，济南 250012 ， 临床与实验病理学杂志 ZEB1 J Clin Exp Pathol 2013 Jun; 29( 6) FISH ， HER-2（ ） 595 HER-2 癌关系的报道较多 但目前尚 缺乏 在乳腺癌 病例进一步做 检测 以 和 组织中作用的报道。本文采用免疫组化 SP 法检测 ZEB1 在不同类型乳腺癌组

16、织中的表达，观察 ZEB1 在乳腺癌的浸润、转移中的作用，探讨其与乳腺癌临 床病理因素之间的关系，为研究乳腺癌侵袭转移的 分子机制及判断预后提供依据。 1 材料与方法 1 1 临床资料 收集齐鲁医院病理科 2005 年 1 月 2006 年 12 月存档的部分乳腺癌标本。包括导管 内癌 9 例，浸润性导管癌 67 例，浸润性微乳头状癌 16 例，浸润性小叶癌 20 例，所有患者术前均未接受 放、化疗和内分泌治疗。所选病例均为女性，年 龄 32 76 岁，中位年龄 50 岁。另收集正常乳腺组织 20 例作为对照，年龄 35 63 岁，中位年龄 47 岁； 乳 腺增生组织 33 例，年龄 32 7

17、1 岁，中位年龄 52 岁。 1 2 试剂 兔抗人 ZEB1（ bs-4187R） 多克隆抗体购 自北 京 Bioss 公 司， ER （ ZA0102） 、 PR （ ZA0255 ） 、 HER-2（ ZA0023） 、 Ki-67（ ZM0167，单克隆抗体） 、免 疫组化 SP 试剂盒及 DAB 显色剂均购自北京中杉金 桥公司。 1 3 免疫 组化 所有标本均经 10% 中性福尔马林 固定，常规石蜡包埋， 4 m 厚切片， 0. 01 mol / L ED- TA 缓冲液抗原高温修复 20 min， SP 法免疫组化染 色。 ZEB1 抗体浓度 为 1 500，按照试剂盒说明书 进行染

18、色， PBS 代替一抗做阴性对照，预试验中乳腺 癌细胞阳性数 10% 病例作为阳性对照。 ER、 PR、 HER-2、 Ki-67 均经 0. 01 mol / L EDTA 缓冲液抗原高 温修复 2 min，行免 疫 组 化 SP 法 染 色。 ER、 PR、 HER-2、 Ki-67 抗体均为工作液，依次按照试剂盒说 明书进行染色。所有抗体均用 DAB 显色剂显色，苏 木精复染，二甲苯透明，中性树胶封固。 1 4 结果判定 ZEB1 阳性染色主要位于细胞核， 也可位于细胞质中。目前对于 ZEB1 的研究多以细 胞核阳性为判定标准，本实验采取细胞核阳性作为 判定标准。 ZEB1 在细胞核中的

19、染色呈点灶状，以细 胞核呈清晰棕色或棕褐色为阳性，以细胞核无棕褐 色或与背景一致极淡的棕色为阴性 。随机选择 表达最集中的（ 5 个 /400 HPF） 病变，统计阳性肿瘤 细胞 数所占肿瘤细胞总数的比例 计算平均值， ，阳性 细胞数 10% 为阳性，无阳性细胞着色或阳性细胞 数 10% 为阴性。 ER、 PR、 Ki -67 均为细胞核着色， HER-2 为细胞膜着色，利用现阶段统一的判断标准 进行判读。由于本实验未对 HER-2 （ ） 的乳腺癌 （ ） 作 为阴性， HER -2 （ ） 作 为阳性 进行统 计比 较。 1 5 统计学处理 采用 SPSS 13. 0 统计软件进行 统计学

20、 分析，采用 检验分 析不同类型乳腺癌与 ZEB1 表达的相关性。 2 结果 2 1 ZEB1 在乳腺癌组织中的表达 乳腺癌组织 中 ZEB1 主要表达于胞质和胞核，正常乳腺组织、乳 腺增生症和乳腺导管内癌组织中 ZEB1 呈阴性（ 图 1 3） ，浸润性导管癌（ 图 4） 、浸润性微乳头状癌（ 图 5） 和浸润性小叶癌（ 图 6） 中 ZEB1 的阳性率分别为 13. 43% （ 9 /67 ） 、 37. 50% （ 6 /16 ） 和 55. 00% （ 11 / 20） ，浸润性导管癌与浸润性小 叶癌之间差异有统 计学意义（ P 0. 01） ，浸润性导管癌与浸润性微乳 头状癌之间差异

21、有统计学意义（ P = 0. 035 3，表 1） 。 表 1 ZEB1 在不同乳腺癌组织中的表达 阳性 阴性 阳性率（ % ） 导管内癌 9 0 9 0 00 浸润性导管癌 67 9 58 13 43 5 053 0 0 024 6 15 030 0 0 000 1 以上 4 组乳腺癌组织中 ZEB1 表达检验值 =19. 484 9， P 0. 01； 2 * 与浸 润性导管癌 相比； 与浸润性导管癌相比 2 2 ZEB1 的表达与乳腺癌 临床病理特征的关系 112 例乳腺癌组织中， 59 例（ 52. 68% ） 发生远处 淋巴结转移。 ZEB1 阳性率在转移组和无转移组之 间差异有统计

22、学意义（ P = 0. 017 4） ，乳腺浸润性癌 组织 中 ZEB1 的阳性率和 Ki-67 阳性率有相关性（ P = 0. 026 8） 。 ZEB1 与患者年龄、肿瘤大小、 ER、 PR 及 HER-2 的阳性无明显相关性（ P 0. 05，表 2） 。 3 讨论 ZEB1 属于锌指结构转录因子中 E 盒结合锌指 蛋白家族中的一员，是胚胎发育中必须的转录因子。 在真核细胞中，锌指结构是一种很常见的 DNA 结合 单位。 ZEB 家族包含 ZEB1 和 ZEB2 两类蛋白类转 录因子。正常组织中 ZEB1 基因在膀胱和子宫中表 达最高，在胚胎发育过程中，其在心 脏、肺和胸腺中 的表达水平

23、最高 。 Jia 等 利用免疫组化法检测 45 例胃癌和癌旁正常黏膜组织标本，发现 ZEB1 在 胃癌组织中的阳性率远远高于 癌旁正常胃黏膜组 1， 2 596 临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2013 Jun; 29( 6) 图 1 正常乳腺组织中 ZEB1 呈阴性 ， SP 法 图 2 乳腺增生组织中 ZEB1 呈阴性 ， SP 法 图 3 乳腺导管内癌中 ZEB1 呈阴性 ， SP 法 图 4 乳腺浸润性导管癌中 ZEB1 呈阳性 ， SP 法 图 5 乳腺浸润性微乳头状癌中 ZEB1 呈阳性 ， SP 法 图 6 乳腺浸润性小叶癌中 ZEB1 呈阳性， SP

24、法 表 2 乳腺癌组织中 ZEB1 的表达及其与临床病理参数的相关性 ZEB1 呈高表达 ，经 EMT 促进肿瘤转移。 Liu 等 的研究 临床病理参数 年龄（ 岁） 50 n 62 阳性 15 阴性 47 阳性率（ % ） 24 19 值 P 值 还发现干扰 ZEB1 siRNA 可以抑制肿瘤的侵袭和转 移，减少甲状旁腺激素相关蛋白的表达。 本组实验 结果显示，乳腺导 管内癌中 无 ZEB1 50 肿瘤直径（ cm） 50 11 39 22 00 0 747 1 0 784 6 阳性表达 ，浸润性导管癌 ZEB1 、浸润性微乳头状癌和浸润 ， 2 25 5 20 20 00 0039 0 0

25、 843 4 性小叶 癌组 织中 的 阳 性率 明显 升高 提 示 2 淋巴结转移 无 有 ER 阳性 阴性 PR 阳性 阴性 Ki-67 增殖指数（ % ） 10 10 HER-2 阳性 阴性 87 53 59 70 33 73 30 47 56 9 80 19 7 19 18 8 16 10 7 19 3 17 68 46 40 52 25 57 20 40 37 6 63 21 84 13 20 32 20 25 71 24 24 21 92 33 33 14 89 33 93 33 33 21 25 5 562 0 0 025 7 1 468 0 4 906 0 0 678 0 0 0

26、17 4 0 872 5 0 317 7 0 026 8 0 410 3 ZEB1 对乳腺癌进展起促进作用。而在转移性较强、 预后相对较差的浸润性微乳头状癌组织中 ZEB1 的 阳性 率明显高 于浸润性导管 癌，进一 步提示 ZEB1 具有促进乳腺癌转移的能力。乳腺浸润性导管癌中 ZEB1 阳性率（ 13. 43% ） 较浸润性小叶癌低（ 55% ） ， 这种差异可能与乳腺癌的组织学类型有关，与国外 报道相似。曾有报道显示 ZEB1 在乳腺导管内癌中 无表达，在浸 润性 导管 癌组 织 中阳 性 率为 8% 19% ，而在浸润性小叶癌组织中阳性率为 38% 。本 组实验检测 ZEB1 在乳腺浸

27、润性小叶癌中阳性率较 浸润 性 导管 癌 高，证 实 先 前 的 研究 结 果。 Aigner 等 曾报道 ZEB1 在 38% 的去分化乳腺浸润性导管 癌中表达，但他们检测的标本呈细胞质 ZEB1 阳性 而非细胞核阳性。 ZEB1 在各种肿瘤中表达的报道 织，并且在低 分化 癌组 织 和 TNM 高分 期组 织中， 定位均为细胞质，而本组实验目的重在展示核的阳 ZEB1阳性率明显升 高。已有报道 ZEB1 ， 表明转录因子 ZEB1 性率 。 与肿瘤细胞的转移密切相关 如 可下调 Ki-67 抗原最早于 1983 由 Gerdes 等 发现，该 6 2 5 结肠癌的 LgL2 极性因子促 进

28、结肠癌的转移。 ZEB1 在骨转移性小细胞肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤中 抗原存 在 于 增 殖 细胞 核 内 9 ，在 G 0 期 无 该 抗 原 表 达 ，在调节细胞的增生中起重 要作用，是目前比 临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2013 Jun; 29( 6) 597 。 ， Ki-67 of the breast： a cooperative effort J？ Hum Pathol， 2011， 42（ 1 ） ： 较肯定的细胞增殖标志物 因此 增殖指数的 103 10 高低与 肿瘤的复发、转移相关。而 ZEB1 作为一种 促进 EMT 的转录因子，可促进肿

29、瘤的浸润转移。本 3 Hurt E M， Saykally J N， Anose B M， et al Expression of the 组实验发现 ，ZEB1 的表达与 Ki-67 的增殖活性具有 ZEB1 （ deltaEF1 ） transcription factor in human： additional in- 一致性， Ki-67 增殖指数高的肿瘤 ZEB1 表达强。两 sights J Mol Cell Biochem， 2008， 318（ 1 2） ： 89 99 4 Jia B， Liu H， Kong Q， Li B Overexpression of ZEB1 a

30、ssociated 者比较差异有统计学意义 （ P = 0. 026 8） 。这也意 味着 ZEB1 的过表达是预后不良的因素之一。 乳腺癌的转移是患者最大的威胁，也是在治疗 中遇到的最大障碍。本组实验结果显示， ZEB1 与乳 腺癌细胞侵袭力的获得密切相关，其表达水平在乳 腺浸润性导管癌、浸润性微乳头状癌到浸润性小叶 癌中显著升高，并且淋巴结转移组比未转移组表达 水平显著升高，表明 ZEB1 在乳腺癌的转移过程中 发挥重要作用。因此， ZEB1 作为转录因 子，其与乳 腺细胞的增殖、侵袭和淋巴结转移密切相关，可作为 评价乳腺癌细胞增殖、浸润和转移能力的生物学指 标。 参考文献： 1 Gera

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