2022年生物材料重点总结 .pdf

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1、学习必备欢迎下载生物材料检验：分析检验生物材料中化学物质及其代谢物的含量或因化学物质引起的生物效应指标变化。生物材料：是人体体液（如血液） 、排泄物（如呼吸气、尿液） 、毛发，指甲以及组织脏器等的总称。生物标志物： 指生物系统接触外源性物质后出现的一种变化。分为三类： 接触性生物标志物、效应性生物标志物，敏感性生物标志物。生物接触限值 （BEL ） ：大体相当于健康人吸入接触最高允许浓度的毒物时生物材料中被测物的水平。尿液可分为全日尿，晨尿，定时尿和随时尿。生物半减期：指进入生物体内的化学物质的里量通过各种途径消除一半所需要的时间，又代谢半减期。一、检验方法的一般要求： 1. 方法的一般要求1

2、）灵敏度选择符合生物监测的基本要求2）操作简便3）试剂易得、价廉4）效率高5）符合国情，易推行、推广2选择和建立生物检测方法必须考虑的因素：1）被测成分溶解性，稳定性 含量水平高 g/L水平低ug/L 二、方法研制准则的基本内容1取样、运输、保存的原则 1 ）取样：（1）容器工具材质不干扰测定（2）取样的操作要防止污染（3）取 样时间根据半减期判断决定（4）取样的体积尿液=50ml 静脉血 =5ml 末梢血 500ul 2) 保存时间：一天，三天，一周，两周一般只要求两周3）运输过程：保证分析物稳定 ，必 要时 要 冷 藏和 冷冻 运 输4） 防 腐剂 （ 尿） 和抗 凝 剂（血）2. 样品预

3、处理原则 1 ）尿液浓度按比重校正尿标准比重 1.020，1.030 及=75% 3. 制定分析方法的程序 1 ）分析条件选择、优化2）确定检出限（1）影响检出限的因素：试剂的纯度，仪器的工作状态，电源稳定性光源的温度变化、污染等不可控制的因素。 （2） 检出限的确定一般用统计法，一般用空白值的 3 倍标准差计算；色谱法用 3 倍噪音水平，检出限应小于0.3 倍生物接触限值。（3）检出限的表 示 方 法浓 度 或 绝 对 量 表 示 ， 用 浓 度 表 示 时 要 说 明 方 法 取 样 体积。3）精密度：同一个人用同一方法重复测定同一均匀样品测定结果的符合程度通常在线性范围内取高、中、低三个

4、浓度水平分别重复测定 35 次。用 RSD 表示或用变异系数表示复杂方法 RSD=20 简单方法=75% 若105% 表明存在明显的系统误差。 （3）用标准方法或权威方法比较：两个方法均值相对误差应小于10% t 检验在确定一个置信水平条件，两方法测定无明显差异5）干扰试验：如果有干扰，要找出消除干扰的方法6）样品的稳定性实验：时间：当天， 3天，1 周，2 周温度：室温，普通冰 箱冷藏（4） ， 冷冻保存（-8） ，低温冰箱（ -20）4. 方法的验证1）新方法的验证：必须是另一单位研制方提供方法所有技术材料验证内容：四项线性范围，精密度，准确度，样品的稳定性。2）引进国外标准方法或权威方法

5、，引进方精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 9 页学习必备欢迎下载就是验证方。5. 现场应用首先要观察检出率观察检测结果与环境污染的符合程度同时取非接触样品进行对照三、确定生物监测指标的依据（一）化学物质在体内的动力学过程 1. 吸收1）呼吸道吸收气体物质通过肺泡壁及周围毛细血管吸收固体物质，溶解时吸收的前提2）皮肤有些有机物很容易被皮肤吸收F=C/15 *(0.038-0.153p)exp(-0.016MN) F 皮肤吸收量mg/ 2 /h C 化学物质在水中的饱和度mg/ml P 辛醇- 水的分配系数MN 相 对 分 子

6、 质 量 许 多 农 药 易 被 皮 肤 吸 收如 有 机磷2. 体内分压和贮存1） 起始主要分布于血液中最终分布取决亲和力2） 血液侧得 量是反映新近吸收量或机体组织的水平3）血液中毒物或其他被测物并非均匀分布4） 一般脂溶性溶剂及卤代烃会分布在脂肪组织中，乳汁是检测有机氯农药最好的样品5）体内储存毒物的形式大多为结合状态，测定尿液中的代谢物需要先水解3. 生物转化1）概念：外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物的过程。2）有关生物转化的讨论是毒物发生质的变化生物转化的数量关系， 个体差异很大是一种动态过程， 对时间的了解是确定采样时间的基础，生物半衰期。 4. 排出

7、易挥发性有机溶剂从呼吸气中排出较多。 长期蓄积的有机氯农药可从乳汁中排出及叮咛中排出，易代谢的有机毒物大多以结合态从尿中排出。（二） 、个体差异 1 、毒物在生物体内的动力学过程有种属家族和个体的差异，其中生物转化过程变异极大；2、生物监测的个体差异可用监测结果的变异系数表示； 3 、个体差异降低了生物监测的精确性，却可帮助检出特殊敏感人群或耐受人群。（三） 、接触水平（剂量）效应（反应）关系 1 、是确定一次生物监测指标的关键依据； 2 、生物监测结果与空气毒物浓度之间的相关资料，可作为选择生物监测指标的替代依据。四、检验指标的选择与分类（一） 、选择的基本要求1、特异性好；2、具有良好的剂

8、量效应关系； 3、稳定性好；4、有准确可靠的检验方法。（二） 、生物材料检验指标的分类1、化学物质原形：化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；缺乏毒物代谢动力学资料；代谢产物在体内没有特异性2、 化学物质代谢产物3、生物效应指标。五、 样品的采集与保存一） 、 生物材料样品的选择（一） 、种类及特点尿液: 最常用的1）特点：采集方便、无损伤性、采集量大2）适用性：水溶性化学物质、代谢产物、金属等3）尿样的种类： （1） 全日尿（24h尿）收集 24h内的全部尿液， 通常只用于住院病人（2）晨尿起床后、早餐前第一次排出的尿（3）定时尿：生物半减期班前尿：第2 个工作日上班前以内排出的尿

9、班中尿：上班23h 以后排出的尿班末尿：下班前 1h 内排的尿班后尿：下班以后 1h以内排出的尿周末尿：连续工作第五个工作日的班末尿。血液1）特点：成分较恒定个体差异小取样污染机会小损伤性采集样品血样贮存条件要求较高；2） 种类：血清：不抗凝离心分离出的上层清夜血浆：加抗凝剂离心分离的上层清夜全血红细胞。呼出气1）特点优点：操作方便、干扰物少，非损伤性缺点： a、被测物的含量比较低b、肺泡气中水分对某些测定有影响c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳定，影响测定结果的解释；2）适用性监测仅限于挥发性物质主要用于测定化学物质原形呼出气监测结果能反映采样期间车精选学习资料 - - - - -

10、- - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 9 页学习必备欢迎下载间空气的平均浓度；3）呼出气的分类混合呼出气、 终末呼出气（肺泡气）第一阶段呼出的是空气，第二阶段混合呼出气，第三阶段肺泡气。（二） 、生物材料样品的选择1、同一毒物或代谢产物在不同生物材料其生物学意义不一样，血镉代表近期接触水平、 尿镉反映长期接触的浓度；2、 选择生物材料样品种类的要求： 被测物有特异性与外剂量有相关性有足够的稳定测定结果重复性好， 个体差异在允许范围内采样能被受试者接受；3、尿、血、呼出气是目前较理想的生物材料样品，美国BEI55 个尿 58% 、血 27% 、呼出气 14% 。

11、二） 、样品采集、 运输及保存（一） 、 一般要求1、 采样时间：依据生物半减期；2、采样环境：无污染； 3 、采样容器：测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：硬质、石英不锈钢含 Cr、Ni、Mn （不能用于测此三种元素）使用前要求用酸液（稀 HNO3 ）浸泡 24h 洗涤；测有机物玻璃、塑料（不能用橡胶和添加染料的橡胶）冷冻保存不能用玻璃仪器；4、样品的运输与保存； 5 、 采样记录编号检验项目受试者信息采样信息：时间、地点、环境、过程。采样人及记录人信息（二）样品采集与保存1、尿样 1 ）尿样的校正：(1) 比重校正法标准比重 1.020 校正公式 C校正= （1.020-1.000 ） / （

12、d-1.000)*c=kc d 的使用范围 1.0101.030 (2)肌酐校正法 . 尿中被测物浓度（mg/g 肌酐）=实测浓度（mg/L）/ 肌酐浓度（g/L ） ，肌酐含量2)采样.采集尿液不少于50ml,用顶空分析法测定挥发性物质时 . 收集尿样的容器要充满尿样并知道体积，记录 2 人上次排光膀胱的时间及采集样的终点时间。3) 储存. 贮存一般2 周.反腐加酸.氯仿. 冷藏测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定要保存 5 天以上的，最好冷冻2、血样 1 ）采集（1） 、全血；要抗凝（2） 、血清（血浆）或红细胞2)注意事项采集过程避免污染. 毛细管血防止溶血. 金属针头 （取下）再挤出针管时

13、不能太快取末梢血要避免挤压采集部位，自然流出弃去第一滴血有三种情况不宜采集毛细管血 a 血液量超过 5ml.b 采集环境有外源性化学物质存在c 测定挥发性成分3) 血样的运输与保存避免振动和温度的改变血样冷冻肯定溶血采集血清或血浆时，应分离再保存临时存放 4过夜，长时间保存要冷冻测酶活性要采集后尽快分析 3. 呼出气 . 1）采集方法：先深呼吸 23 次，再恢复正常呼吸时采集呼出气采集肺泡气只收集末端呼出气 2 ）注意事项：受检者必须时肺功能正常者要选择对被测物吸附小的容器要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力采样的时机要依被测物代谢速度决定三、生物材料样品的预处理原则（一）无机物分析的

14、样品处理 1 、稀释法 . 1 ）. 常用的稀释剂 ;1) 稀硝酸液（尿），2）TntonX100 表面 活 性 剂3 ） 基 体 改 进 剂 溶 液2 ） . 常 用 机 体 改 进 剂 ： 硝 酸 盐（NH4+ Ni2+ Ca2+ ）磷酸盐（ Na+ NH4+ ）3）. 应用实例:磷酸铵，硝酸铵和 TritonX-100可改善血清中铜锌的测定磷酸氢胺，硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000硝酸镍可使测定砷和Se 的灰化温度到1000磷酸铵可使测定Cd 的灰化温度增至800 2 、酸提取法1.硝酸提取，测定血铅 .6mol/L 硝酸离心取上清液。标准物质被测成分的含量是已知的 2，盐酸提取

15、3，三氯乙酸（固体） 。铁（有效）提取+2价铁3、矿物化法（无机法处理）（二）有机物分析的样品处理（p11）第五节铅一、 接触途径： 铅矿， 开采， 冶炼二、 代谢物和生物监测指标（一）精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 9 页学习必备欢迎下载动力学过程 . 1 、吸收1）呼吸道：铅尘烟蒸汽2) 消化道：铅尘3）皮肤，无机物不吸收有机铅化合物可被吸收（四乙基铅） 2 、分析：起始分布在血中有95% 与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于管中，其次是肝肾脑等 3 、生物效应：抑制血红蛋白的合成 1 ）抑制 5氨基乙酰丙酸脱水酶，导

16、致血尿中 -ALA增加2）抑制粪川啉元氧化酶 3 ）抑制亚铁螯合酶 4 、排除：吸收的铅主要经尿排出，尿铅生物半减期较长。（二）铅接触的 生 物 监 测 指 标1 、 血 铅 ： 直 接 反 映 近 期 接 触 铅 的 情况2、尿铅：反应机体中铅的负荷量，是铅中毒的辅助诊断指标3、 生物效应指标：1） 尿中ALA 2） 血中铅原卟啉三、样品的采集与保存用于尿铅血铅的测定1. 尿样. 采样时间的限定随即采集一次尿样按1% 比例加HNO3 ，4可保存两周。2. 血样. 1）末梢血40 L 2）静脉血四、尿铅和血铅的测定石墨炉原子吸收法（一）尿铅的测定 1 、原理：尿样用基体改进剂液稀释后直接进行测

17、定，基体改进剂液NH4H2PO4+抗坏血酸2、石 墨 炉 升 温 程 序 适 用 涂 铜 石 墨 管 干 燥 70 ,40S 灰化450,30S 原子化 20005S（停气）清除22003S 3、石墨管涂钼处理，向石墨管中加20L 钼酸铵液，石墨炉升温程序并重复10 次 升温，石墨管内壁呈灰白色4、标准系列液配置铅标准系列液基体改进剂液（混合液）正常人混合尿：没有接触铅的健康人的尿，取 2 份，一份比重小于 1.020 ，一份比重大于 1.020，混合 成比重为 1.020 的尿液 5 、说明：1）基体改进剂液的作用：本法选用 4% 磷酸二氢铵 -6%抗坏血酸作为基体改进剂，能有效地克服基体干

18、扰 2 ）背景吸收的扣除背景校正器扣除背景吸收， 氘灯背景校正石墨管涂钼可降低背景吸收（二）血铅的测定 1 、样品处理：全血用TritonX-100液稀释，稀 HNO3 酸化，进样测定2、 石墨炉升温程序 : 干燥：75-100,10S（斜坡升温）灰化450-50030S 保 持 10S（斜坡）原子化24007S清除25003S 3、标准系列液：铅标准液 TritonX-100液正常人血五、 生化指标的测定（一）尿中ALA的测定1、原理： ALA可与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物用乙酸乙酯萃取吡咯化合物显色，加对一二甲氨基苯甲酸生成红色化合物 max=554nm 2、操作要点：两份经稀释尿样加

19、 PH=6缓冲液样品管加乙酰乙酸乙酯尿样空白管补充缓冲液各沸水浴 10min 各加 4mL乙酸乙酯萃取离心、静置、分层取清夜显色 10min 后测定（二）全血中游离原卟啉的测定1、原理：用乙酸 - 乙酸乙酯破坏红细胞盐酸萃取原卟啉，测定荧光强度2、样品处理：1）样品： 20L 血+0.1mL生理盐水2） 加硅藻土悬浮液， 乙酸乙酯乙酸液、 振摇、破坏红细胞3） 离心，取上清液加盐酸萃取第三节、镉一、接触途径：锌矿的开采及冶炼工业上含镉材料的生产农业上也有镉化合物的应用二、代谢和生物监测指标（一）代谢1. 吸收、 呼吸道和消化道2. 生物效应急性中毒靶器官：肺慢性中毒靶器官：肺、肾、骨3. 排出

20、少量由尿排出，属于蓄积性元素（二）生物监测指标1、尿镉：只反映长期接触情况2 血镉：只反映近期接触情况三、镉接触指标的测定石墨炉原子吸收法（一）尿镉的测定 1 、 原理： 用磷酸氢二铵液稀释， 直接标准曲线法定量2、精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 9 页学习必备欢迎下载石 墨 炉 升 温 顺 序1 ） 干 燥010030S（ 斜 坡 ）2 ） 灰化10020020S（斜坡）40010S （阶梯）3）原子化18005S 4）清除20003S 3、标准系列液：镉标准液空白尿液基体改进剂液1%NH3 （二）血镉测定 1 、原理

21、：血样加稀HNO3 离心，取上清液测定，标准曲线法定量2、标准系列液镉血标准液：抗凝小牛全血 +镉标准液4%HNO3 第七节：汞一、接触机会矿的开采与冶炼电器和仪表制造化学工业二、 代谢和生物监测指标（一） 动力学过程1. 吸收主要是呼吸道2. 分布无机汞主要是肾、 其次肝、脑有机汞主要 是脑其次肝、胃3. 排出尿汞生物半减期 23个月（二）生物监测指标1. 血汞：反映近期接触无机汞的量2. 尿汞：用于诊断汞中毒观察驱汞 疗效三、样品采集、保存1. 尿样：随机取一次尿样加碱NaOH使浓度达到 40g/L，4可保存 2 周2. 血样周末血抗凝4可以保存数天四、尿汞的测定冷原子吸收法（一）碱性氯化

22、亚锡还原法 1. 原理：在碱性条件及有Cd+ 存在条件下，高浓度的SnCl2 将有机汞及无机汞还原成元素，用测氯仪测定 2. 标准系列液的配置汞标准液基体尿液正常人混合尿NaOH液DL-半胱氨酸3. 测定将上述标准系列液加 1 滴磷酸三酯，加 SnCl2-CdSO4液立即通入空气测定（载气）4. 说明：磷酸三酯消泡Cd2+ 催化作用DL-半胱氨酸起稳定剂的作用，防止无机汞吸附挥发； 还可使有机汞不分解测定读数：读取最大吸光度值（二）酸性 SnCl2 还原法 1. 原理：用 KMnO4 和浓 H2SO4 分解尿样，使汞都转化成 Hg2+ ，用 SnCl2 还原成 Hg，吹空气导入测汞仪 2. 测

23、定：尿液和标准系列液同样用KMnO4 和浓 H2SO4 分解 3. 说明：1）KMnO4 和浓 H2SO4 加入的顺序：先加KMnO4 液再加浓 H2SO4 2）测定前先对气路系统进行净化；加SnCl2（酸性）测定空白水、吹气观察到仪器的响应值为零为止每次测定都使响应值为0 再测第二份第三章：非金属化合物及其代谢产物第一节：CO 一、代谢及生物监测指标1. 吸收：呼吸道 2. 生物效应： 进入机体 与 血 红 蛋 白 结 合 形 成 碳 氧 血 红 蛋 白 （ HbCO ） 形 式 导 致 机 体 组 织 缺O2 HbCOHbCO3. 分布：血液中HbCO形式 4. 排出呼出气约有 1% 被氧

24、化成 CO2 5. 生物监测指标1）血中碳氧血红蛋白2）呼出气中 CO 三、样品的采集与保存 1. 呼出气： 1）采集班中（ 3h 后）或班末呼出气2）收集终末呼出气 2. 血液： 1）采集班中（ 3h 后）或接触最高浓度时的血2）抗凝3）密闭保存411 周4）最好取静脉血5） 受试者不抽烟四、 血中碳氧血红蛋白的测定分光光度法 1 、原理： 1）血中血红蛋白的四种成分：Hb 、HbO2 、HbCO 、HbMet 2 ）HbCO ，HbMet3 2 2 NaO SHb 3）测定 Hb和 HbCO 吸光度，最大吸收波长分别为 432nm和 420nm 2 、测定方法： 1 ）摩尔吸光系数的测定：

25、用吸光系数代替（1）过饱和HbO2液的制备，血样用水和Tris液适量稀释通入O2 30min （2）饱和 HbO2 液的制备： 取（1）中 2 份通入 N2 （3）饱和 HbCO液制备取（1）中 2 份，通入 CO 10min （4）HbCO 和 Hb液制备在（2）和 （3） 的溶液中加 Na2S2O4 固体 Hb2）（HbCOHb3， ）（5）分别测定 420nm和 430nm吸光度作为吸光常数（有四个值） 2 ） 血样测定HbCO HO SNab4 2 2 稀释血样分别测 420nm和 430nm的吸光度 3 计算：) 31(KA)(K AKA-KA%43042 4204 4202430K

26、K）碳氧血红蛋白精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 9 页学习必备欢迎下载（ A420：血样在 420nm吸光度；A430 血样在 430nm吸光度K1、K2是HbCO 在 420nm 、 430nm 的吸光常数K3、 K4是 Hb在 420nm 、 430nm的吸光常数 4.注意事项：（1）所用氮气和氧气应为高纯度氮和高纯度氧，不纯氮和氧气中含微量的CO ，能干扰测定结果（2）连二亚硫酸钠遇水易分解，在空气中容易被氧化失效， 应以小瓶分装使用，避免接触空气和水分（3）测定吸光系数必须采用新鲜血液， 一次测定值在仪器波长稳定

27、的情况下可以使用一段时间，但还应定期核检。（4）测试液应尽量避免接触空气，及时测定，否 则 会 造 成 结 果 偏 低第 二 节CS2 二 、 代 谢 及 生 物 监 测 指标（一）代谢1、吸收：呼吸道、皮肤2、生物转化1）吸收后约7090% 转化为多种代谢产物 2 ）目前，接触者中尿中已确认的有 3 种： TTCA 、 2- 巯基-2- 噻唑啉酮 -5， 硫脲 （其中 TTCA 研究较少，生减期为 2h） 3 ）排出： a. 代谢产物随尿排出b. 约 2030% 以原形从呼吸道排出c. 约 1% 以原形从尿中排出（二）生物监测指标 1 、尿中 TTCA ：班末尿2、呼出气中 CS2,目前研究

28、较少三、样品采集与保存四、尿中 TTCA的测定 HPLC 法 1、样品的处理： A、取离心后的尿样B、稀 HCL酸化：乙醚提取C 、离心分层， 去上层醚液于试管中D、40用 N2吹干加 20ul 甲醇定容 2 、说明：A、尿样经离心后取上层尿液，易于分离B、此法从国外引进，将原来的梯度洗脱改为等度洗脱。国外的梯度洗脱是用两种配比的流动相切换洗脱C、TTCA纯品需自己纯化五、呼出气中CS2 测定（一） GC法1、样品处理：（1） 、呼出气中 CS2浓度在测定范围内不需要处理，直接进样（2） 、呼出气中 CS2低于测定浓度范围需富集，用Tenron GC管富集2、色谱条件：固定相： OV-17 ；

29、检测器：火焰光度检测器3、说明： （1）采集终末呼出气，最后呼出的100ml （2）TenronGC管：2,6-二苯基对苯醚的多孔聚合物， 用于捕集 / 热解吸（3）富集测定要求做富集空白测定：用180ml 气体（冲洗气）注入空白Tenron GC管中，热解吸后测定（二）检气管法：快速检测法1、根据检气管中形成色带长度，粗略估计浓度2、特点：操作简单、快速、成本低、精度差，相 对 偏 差 达20%-30% 以 上第 四 章芳 香 烃 及 其 代 谢 产 物第 一节苯一、代谢及生物监测指标1、吸收：主要是呼吸道，其次是皮肤2、代谢与排泄 1 ）吸入的苯约50% 以上以原形从肺中排出，约 10%

30、以原形储存在有机组织中 2 ）约 40% 进入血液循环，在肝中代谢，代谢产物 50%-70% 的苯酚， 6% 为间苯二酚， 2% 为对苯二酚，还有极少量的粘糖酸等都以结合态从尿中排出3）有极少量的苯以原形从尿中排出3、生物检测指标： 1 ）尿酚A、因正常人尿中很有酚且个体差异大B、尿酚不是特异性指标C、仅用于群检 2 ）呼出气中的苯：在测定尿酚以后，测定呼出气中苯作为确认试验3） 尿苯：1993 年有人提出用尿苯作苯接触的生物接触指标，目前，还没纳入生物监测指标二、 呼出气中苯的测定 GC法（一）原理：用塑料袋或采样管收集呼出气，呼出气用N2吹入活性炭管吸附（ -78）280热解吸，用载气（N

31、2）导入色谱仪，FID 检验，通过六通阀切换完成（二）苯标准气的配制：注入20ul 苯于 100ml 玻璃配气瓶中，临用时从中抽取一定体积注入另一配气瓶中稀释成20ng/ml 的苯标准气（三）测定：1）取苯标准气（ 0.5 、1.0 、2.0ul ）和样品分别注入呼吸气的采样管中2）将采集管37 摄氏度恒温2h 3）一端与六通阀连接，一端接N2 4） 吹入冷阱（-78） 中的活性炭管5） 热解吸导入色谱仪三、精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 9 页学习必备欢迎下载尿酚的测定 GC法1、原理：尿样加盐酸加热（90水浴）水解，

32、再用乙醚萃取苯酚2、尿样采集与保存：班末尿50ml 42周3、 样品处理与测定：1） 5.0ml 尿样，1ml 浓盐酸于具塞试管中， 90水浴 1h 2） 、 用 3.0ml 乙醚振摇萃取3） 取上层醚液注入 GC 仪4、标准曲线：苯酚标准系列液用3ml 乙醚提取 4 、色谱条件（ 1）液晶柱分离分离苯酚和邻间对甲酚。（2）FFAP柱，分离苯酚和对甲酚5、 说明： （1） 3ml 乙醚萃取要避免乙醚挥发， 分层后不是 3ml，加乙醚补至3ml （2）可用内标志法定量四、甲苯、二甲苯（一）代谢及生物监测指标1）代谢(1) 甲苯约15%25%以原型呼出约1% 从尿中排出约 80% 代谢甲苯 O 苯

33、甲酸马尿酸马尿酸排出的半减期为23 人。(2) 二甲苯约 5% 原形从肺中呼出60%80% 生物转化主要终产物是甲基马尿酸 2 ）生物监测指标 (1) 甲苯尿中马尿酸非特异性对群体判断有一定的定义呼出气体中甲苯作为确认(2) 二甲苯： 尿中马尿酸正常人尿中无甲基马尿酸特异性指标（二） 、尿中马尿酸的测定比色法（喹啉苯磺酰氯比色法）（1）原理（2）样品采集两天后班末尿，按 100+1 体积比加氯仿（3）样品处理与测定（4）注意事项：1、试剂加入顺序不能颠倒2、 日光对显色有破坏作用要避光放置（加入苯磺酰氯后）第四节乙苯一、代谢及生物监测指标（一） 代 谢与排 泄 1、只有 少部分 以原形从呼吸道

34、排出。2、70% 以上代谢后随尿排出， 主要代谢产物为扁桃酸60% 苯酰甲酸25% （二）监测指标： 1、呼出气体中乙苯2、尿中扁桃酸（非特异性）二、生物监测方法： 1、呼出气体中乙苯的测定GC法与呼出气中笨的测定类似2、 尿中扁桃酸的测定HPLC 法内标法定量内标物4- 羟基苯甲酸第五章芳香族硝基和氨基化合物第一节苯胺一、代谢和生物监测指标 1 、吸收：主要通过呼吸道吸收，很容易经皮肤吸收2、代谢主要代谢途径：苯胺苯基羟胺对氨基酚接触 24h 后，有 1560% 转化为对氨基酚、以结合态随尿排出3、生物监测指标： 尿中对氨基酚正常人尿中含微量对氨基酚平均3.7mg/L 二、尿中对氨基酚的测定

35、（一）盐酸萘乙二胺分光光度法 1 、原理：尿中对氨基酚经水解。萃取分离重氮化偶合显色。 重氮化试剂：亚硝酸盐偶和显色剂：盐酸萘乙二胺2、 操作要点 (1)样品处理：盐酸酸化沸水浴水解约1 人萃取先用 NaOH 调中性， 用乙酸乙酯萃取，再用盐酸溶液反萃取。(2) 重氮化偶合反映重氮化，酸性条件下加过量的亚硝酸盐、反应10min 除过量 的NaNO2 液 加 氨 基 磺 酸 胺 溶 液 至 无 色 气 泡 产 生 止 放10min 偶合反应显色：加盐酸萘乙二胺生成紫红色(3) 比色定量580nm 尿空白管作参比，标准曲线法定量3、说明： (1) 尿样应采集班末或班后尿，采样前要询问受检者是否服用

36、药物(2) 重氮化反应，NaNO2过量才能完全重氮化但 NaNO2 对偶和显色有干扰(3) 重氮化反应应在尽量低温条件下进行，而偶合反应在60为宜，水浴加热前，偶合剂加入后充分混合（二） HPLC法 1样品处理： (1) 水解，同上精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 9 页学习必备欢迎下载法(2) 萃取先在酸性条件下用乙酸乙酯萃取再在中性条件下用乙酸乙酯萃取对氨基酚(两次萃取除杂质 ) 2 、说明： P96 用磷酸氢二钾（ 弱碱 ）调 节 PH 值第 二 节： 硝基苯一 、 代 谢产 物 和生 物 监 测指标 1 、吸收：很

37、容易从皮肤吸收，主要从呼吸道吸收。 2 、代谢：代谢产物有硝基酚和氨基酚还有少量苯胺， 对硝基酚 1316% ， 对氨基酚 10% 。 3、排出：代谢产物与葡萄糖醛酸和硫酸结合，随尿排出。 少量以原形级微量本案随呼出气排出。 4 、生物监测指标尿中对硝基酚（特异性）二、尿中对硝基苯酚的测定P98 （一） 、邻甲酚分光光度法 1 、原理：尿样经酸水解。苯取先用混合有机溶剂取，再用氢氧化铵溶液反萃取。还原用三氯化钛将其还原成对氨基酚。邻甲酚显色蓝色 600nm比色定量。 2 、样品处理： 1）水解盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取先用异戊醇石油醚乙醚萃取，再用3mol/L 氯水反萃取。3、显色测定先加邻

38、甲酚，再加三氯化钛溶液。立即振摇至黄色沉淀变成淡黄色沉淀，过滤30min 后600nm测定吸光度。 （二）HPLC 法 1 、 样品处理1） 水解同上法。2） 萃取二氯甲烷萃取 3 次定容至 20ml。 2 、 说明1） 尿液采集后，尽快加盐酸，10o c以下运输。 2）流动相配比和流速可根据仪器性能调整。第三节：三硝基甲苯TNT 2,4,6 三硝基甲苯一. 代谢1）经氧化还原化合等途径代谢。 2）以还原代谢途径为主，主要代谢物4硝基 2，6二硝基甲苯。 3）各种代谢产物以结合态随尿排出。二. 生物监测指标4A 三.GC 法测定尿中 4A 1 、样品处理： 1）盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取代谢

39、加固体碳酸氢钠调 PH7 8 用甲苯萃取（尿样1ml，甲苯 1ml）2. 色谱条件：1）检测器ECD 2）固定相：OV 17（固定液）3）柱温220程序升温效果更好200（0.4min ）10/min 2205/min 240第六章：卤代烃化合物及其代谢产物的测定第一节：氯乙烯一、代谢1）经呼吸道吸入大部分以原形从呼吸道中排出 2 ）少部分在肝脏转化先转化成一种致癌活性物环氧氯乙烯在甘光甘肽或半胱氨酸参与下最终代谢物为亚硫基二乙酸（硫代二乙酸）3） 少量的氯乙烯以原形随尿液排出二、生 物 监 测 指 标 ： 尿 中 硫 代 氯 乙 酸 ， 呼 出 气 中 氯 乙 烯 很 少 作 为 检 测 指

40、标三GC法测定尿中硫代氯乙酸（一）原理尿样经酯化后水蒸气蒸至近干甲醇乙醚溶解其中的硫代二乙酸酯化重氮甲烷酯化火焰光度计监测（二）样品处理：1）1ml 尿液加 0.1mlHCl 酯化2）瓷蒸发皿水蒸气蒸干至结晶状态3） 甲 醇 乙 醚溶 解 残 渣 ， 上 层 夜 转 入 离 心管 混 水 浴浓 缩 至1ml （三）酯化： （通风柜中进行）亚硝基甲脲与氢氧化钠溶液反应生成重氮甲烷气体导入样液酯化溶液至浅黄色为止，在放置10min，最终用甲醇定容。（四）注意事项？第三节：三氯乙烯和四氯乙烯一、代谢与生物监测指标（一）代谢1. 三氯乙烯1）吸入约 20% 以原形从肺中排出2）有 5060% 储存在体

41、内（蓄积性）3）大部分在肝中转化成三氯乙酸和三氯乙醇还有少量一氯乙酸4）脱离接触50h 后，尿中三氯乙酸浓度达到最高。2. 四氯乙酸约 98% 经肺排出约 2% 代谢转化成三氯乙酸 ( 二)生物监测指标1. 三氯乙烯：尿中三氯乙酸和三氯乙醇联合作为三氯乙烯接触的生物监测指标呼出空精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 9 页学习必备欢迎下载气中三氯乙烯特异性指标 2. 四氯乙烯：尿中三氯乙酸非特异性呼出空气中特异性二、尿中三氯乙酸的测定（一）顶空 GC法 1 、原理在密闭顶空瓶中三氯乙酸三氯乙烷抽取顶空气注入气相色谱仪FID 检

42、测内标法定量内标物为正丁醇第七章： 农药接触指标的测定第一节、有机磷农药二代谢和生物监测指标（一） 、毒性效应抑制胆碱酯酶的活性造成乙酰胆碱过量，导致胆碱能神经过度兴奋， 使中枢神经系统紊乱（二） 、胆碱酯酶1. 真性胆碱酯酶 1 ）指的是乙酰胆碱酯酶和红细胞胆碱酯酶2）主要存在于神经组织和细胞中3）对乙酰胆碱有很高的特异性4）在血中活性占 80% 以上2、假性胆碱酯酶 1 ）指的是血清胆碱酯酶2）存在于血清中3）是非特异性胆碱酯酶4）在血中活性约 20% （三）生物监测指标：血中胆碱酯酶活性效应性指标（三全血中胆碱酯酶的活性测定）（1）三氯化铁分光光度法1. 原理：乙酰胆碱酶 乙酸+胆碱剩余

43、的乙酰胆碱与羟胺反应乙酸胆碱 - 2OH OH NH乙酰羟胺显色乙酰羟胺3 FeCl 红色物质520nm测定吸光度标准曲线法定量2、 标准系列液乙酰胆碱标准系列液3、 样品处理及测定 1 ）样品处理：将A、B 两个样品管 37水浴 5min 向 A 管加入乙酰胆碱标液1ml， 37 水浴中精确反应30min（每隔 10min 振摇一次）取出立即向 A、B管各加胆碱羟胺液4ml 再向 B管加乙酰胆碱标液1ml 2）测定向 A、 B管及标准管各加盐酸 （1+2） 2ml 加 2ml FeCl3 液振摇过滤520nm测定吸光度 4 、计算：被水解的乙酰胆碱吸光度=AB-AA以此吸光度（差值）查标准曲线得到被水解乙酰胆碱量（mol）此值为 40ul 血 37反应 30min 胆碱酯酶活性绝对值（G ）全血胆碱酯酶活性（mol/ml ）=c/0.04 （绝对值）全血胆碱酯酶活性相对值 （% ） =C/正常人血胆碱酯酶活性5、 注意事项：P116 （2）DTNB 分光光度法：硫代乙酰胆碱试剂测定血清中酶活性精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页，共 9 页