中药化学实验内容(15页).doc

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1、-中药化学实验内容-第 13 页目 录黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定11、巴马汀的提取12、巴马汀粗品的精制23、巴马汀氢化物的制备34、鉴定4二 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定51、大黄粉酸水解52、总羟基蒽醌苷元的提取63、PH梯度萃取74、柱色谱精制大黄素9三 槐类中芦丁的提取、分离与鉴定101、芦丁的提取102、芦丁的精制和酸水解113、槲皮素五乙酰化物的制备124、糖鉴定135、芦丁、槲皮素的鉴定14实验一 黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定(一)巴马汀的提取一、实验目的1、掌握渗漉提取方法2、得到巴马汀粗品3、学习生物碱的定性鉴别方法二、实验原理黄藤中巴马汀（掌叶防己碱，P

2、almatine）的含量为4%，是季铵型生物碱，可溶于水、醇中，盐酸盐的溶解度低，有机酸盐的溶解度高，因此，用1%的醋酸溶液渗漉提取巴马汀。用盐析的方法，使巴马汀在水中溶解度降低而沉淀出来。Palmatine三、实验方法50g黄藤粉 25ml 1%HAc湿润 15min 500ml1%HAc渗漉（1-2d/s）渗漉液10ml渗漉液 其余渗漉液 10%NaCl，搅拌溶解 沉淀反应 6 N NaOH调pH10， 静置，抽滤巴马汀粗品 反应试剂：碘化铋钾 碘-碘化钾沉淀 鞣酸 硅钨酸 苦味酸(1) 碘化铋钾试剂：取滤液1ml，加入试剂12滴，如有砖红色沉淀产生，可能存在生物碱。(2) 碘-碘化钾试剂

3、：取滤液1ml，加入试剂12滴，如有红棕色沉淀产生，可能存在生物碱。(3) 硅钨酸试剂：取滤液1ml，加入试剂12滴，如有浅黄色或类白色沉淀产生，可能存在生物碱。(4) 苦味酸试剂：取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂12滴，如有黄色沉淀产生，可能存在生物碱。(5) 鞣酸试剂：取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂12滴，如有白色沉淀产生，可能存在生物碱。四、实验注意事项1、湿润目的：避免干药材吸水后溶胀，在渗漉筒中膨胀而使渗漉液难流出；方法：溶剂量为药材的1/2，放置15分钟；程度：湿润后的药材手握成团，放开后松散。2、装筒方法：（1）两层小纱布湿润后盖于渗漉筒小孔上，避免紧、大；（2）湿润后的药

4、粉均匀地倒入渗漉筒里，避免松紧不匀；（3）药粉上盖一层滤纸，压上瓶盖，以防药粉翻出，影响提取得率；（4）渗漉筒下端活塞打开，加提取溶剂至满，排出气泡；（5）将活塞关闭5-10分钟，浸泡药粉，再打开渗漉；（6）保持液面高于药粉。3、判断提取完毕的方法（1）渗漉液颜色很浅；（2）渗漉液沉淀反应呈阴性；（3）渗漉液为药粉体积的10倍时，基本渗漉完毕。4、盐析量：固体，为渗漉液体积的10%量。5、调PH：调至PH10，由于有有机酸共存，放置后又回到PH9。6、抽滤：放置一天以上再抽滤，尽量将上清液倒去，否则影响抽滤时间。7、干燥：抽滤物放入小干燥皿中，写上姓名、班级，统一干燥。8、称重，计算粗制率。五

5、、思考题1、还可用什么方法提取黄藤中生物碱？请设计提取流程。2、渗漉用的酸水，除醋酸外，还可用什么酸水？3、分离黄藤中的季铵型生物碱，除盐析外还可用什么方法？请设计分离流程。(2)巴马汀粗品的精制一、实验目的1、学习结晶方法2、得到氯化巴马汀精品二、实验原理利用混合物中各化合物对某种溶剂溶解度的差别，而使单一成分以结晶状态析出的方法。巴马汀的盐酸盐在水和醇中溶解度小，易析出黄色针状结晶（三、实验方法巴马汀粗品 40ml 80%EtOH，加热溶解15min, 趁热抽滤 滤渣 滤液 20ml 80%EtOH 加热溶解，趁热抽滤重复数次至滤液无色 滤液 6 mol.L HCl调PH2，放置析晶，抽滤

6、 氯化巴马汀四、注意事项1、含巴马汀粗品的滤纸撕碎后同巴马汀放入圆底烧瓶中加热溶解；2、80%EtOH溶剂量以巴马汀粗品量定，3g巴马汀粗品约75ml 80%EtOH，溶剂量多，则不易析晶；溶剂量少，则结晶杂质多。3、滤液要趁热抽滤；4、滤液调PH前若有析晶，需加热溶解；5、待析晶溶液，应将瓶壁边有沉淀的部分溶解；6、析晶时间应为一天以上。五、促进析晶的方法1、将瓶盖打开，挥去部分溶剂；2、用玻棒擦瓶壁，加速析晶；3、加晶种加速析晶；4、延长放置时间或低温放置。六、思考题1、 为什么用HCl调PH值？2、 如何判断结晶的纯度？3、 滤液有析晶时调PH前，会出现什么结果？（3）巴马汀氢化物的制备

7、一、目的1、学习方法；2、得到四氢巴马汀二、原理 巴马汀 四氢巴马汀（延胡索乙素三、方法 1g氯化巴马汀30ml50%MeOH 加热溶解溶液 0.81.0g NaBH4（边加边摇至无色、无气泡产生时）6 mol HCl调PH2至无气泡产生, NH4OH调PH9，静置，抽滤沉淀 95%EtOH加热（回流）溶解，趁热抽滤滤液 加23倍量的水，摇匀静置，抽滤延胡索乙素四、注意事项1、 NaBH4为强还原剂，避免长时间接触空气及用手接触；2、 加NaBH4时充分摇匀，使反应充分；3、 四氢巴马汀在碱液中易氧化成巴马汀。五、思考题1、 加入NaBH4后，颜色由黄变无色、溶液变混浊的原因？ 2、 用6 m

8、ol HCl调反应液PH2至无气泡产生的原因？此时的溶液呈什么现象？3、 用NH4OH调PH9原因、现象？ 4、 重结晶时，加入水的原因？（4）鉴定一、实验目的1、 学习生物碱的TLC检识方法2、 巴马汀、四氢巴马汀的定性鉴别（TLC、m.p.）二、实验原理用硅胶板进行巴马汀、四氢巴马汀的TLC检识，选用氨薰的方法避免生物碱在硅胶板上易拖尾的现象。三、实验方法1、TLC点板 氨缸中放5min 展开槽展开 取出察看（可见光、荧光、显色剂）样品：巴马汀、四氢巴马汀的样品及对照品，用乙醇溶解展开剂：氯仿-甲醇（9：1）显色剂：碘化铋钾 2、 m.p.：显微熔点仪，记录初始熔化时温度及完全溶化时温度。

9、四、注意事项 1、 氨水有刺激性，操作时注意；2、 熔点测定时，样品量要少。五、思考题1、 生物碱在硅胶板上展开为什么会拖尾？2、 避免生物碱在硅胶板上拖尾的方法有哪些？3、 如何选择生物碱TLC展开剂？4、 本实验在可见光和荧光下检识有什么现象？为什么？5、 熔点测定时，样品量多会对测定结果有什么影响？6、 从鉴定结果如何判断样品的纯度？实验二 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定（1）酸水解一、实验目的1、 学习酸水解的方法2、 得到大黄粉酸水解药渣二、实验原理大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。三、方法 10g大

10、黄粉 20%H2SO4直火回流加热1小时，抽滤滤渣 水洗中性，干燥滤饼四、注意事项1、药粉在水洗中性过程中尽量避免损失；2、药渣干燥前要松散；3、水解液酸性强，避免用手直接接触。五、思考题1、酸水加热为什么要用回流装置？2、要得到大黄中的蒽醌苷元，还有什么办法？（2）总羟基蒽醌苷元的提取一、实验目的1、学习连续回流提取方法2、得到大黄中总羟基蒽醌苷元提取物二、实验原理苷元为亲脂性成分，用乙醚提取。三、实验方法 滤饼 置索氏提取器中，加150ml Et2O, 提2.5hr（提取液无色）Et2O液（大黄中总羟基蒽醌苷元）四、注意事项1、 纸筒的包法：原则是药粉不漏出2、 提取器的装法（1）纸筒的高

11、度不超过侧管的高度；（2）药粉的高度不超过虹吸管的高度；（3）线头在管内，保持提取器闭封。3、 溶剂的倒法50ml由提取器上端倒入，浸泡药粉；100ml倒入平底烧瓶中。4、 温度的控制溶剂蒸气至冷凝管第二个球处，水浴温度约60。5、 实验室禁止明火，实验过程中保持通风，尽量避免乙醚挥出。6、 平底烧瓶要干燥。五、思考题1、同回流提取相比，该方法的优点？2、还可选用哪些溶剂提取？3、若平底烧瓶中有水，将会有什么结果？4、为什么温度控制在溶剂蒸气至冷凝管第二个球处？（3）PH梯度萃取一、实验目的1、学习PH梯度萃取的方法和原理2、得到大黄素粗品二、实验原理 依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、

12、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取，得到大黄素。三、实验方法 1、 分离方法 乙醚液（T） 120ml(40mlX3)2.5%NaHCO3 乙醚液（1） NaHCO3液 120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3 乙醚液（2） Na2CO3液 120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3 调 pH3 沉淀 Na2CO3液 乙醚层（3） 100ml(25mlX4)0.5%NaOH NaOH 乙醚层（4）2、TLC跟踪检查硅胶-CMC-Na展开剂：Pet-EtOAc(7:3) 样品：乙醚液（T，1-4）四、注意事项1、分液漏斗使用前检查是否漏。2、乙醚提取液倒入分液漏斗中，若有

13、沉淀留在瓶中，用待萃取的碱液洗后再倒入分液漏斗中，直至沉淀全部被溶解。3、 产生乳化层，解决的方法是：（1）轻摇；（2）长时间静置；（3）用电吹风加热（4）玻棒搅动（5）抽滤4、待完全静置分层后放出水层。五、思考题1、 萃取时碱水层的颜色？2、 比较五种蒽醌类化合物极性大小、酸性大小。3、 在TLC中，五种蒽醌类成分Rf值的大小顺序？4、 萃取大黄素时，碱水中若含少量乙醚，酸化后能得到沉淀吗？5、 判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？6、 你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？写出实验方法及验证方案。（4）柱色谱精制大黄素一、实验目的1、学习硅胶柱色谱分离方法2、得到大黄素精品 二、实验原理依

14、据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。三、实验方法1、装柱方法：100200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。要求：均匀，柱面平整紧密无气泡。干法装柱：小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中；湿法装柱：硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。2、加样方法要求：原始色带小，均匀。干法上样：样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。湿法上样：样品用少量（1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。 3、洗脱收集：加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。分段标准：（1）色带颜色 （2）1015ml/瓶洗脱剂：Pet-EtOAc(7

15、:3)4、合并浓缩：TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。5、放置析晶四、注意事项1、玻璃器皿干燥，无水；2、装柱时，下端活塞应打开；3、洗脱剂不能低于柱平面。五、思考题1、 比较湿法装柱与干法装柱的特点？2、 比较湿法上样与干法上样的特点？（5）鉴 定一、实验目的1、蒽醌类化合物的颜色反应2、大黄素熔点的测定二、实验内容1、熔点：大黄素（256257）2、颜色反应：比较大黄素与茜草素的颜色区别 ( 纸片反应) 试剂：%NaOH，0.5% MgAc2三、思考题1、大黄素、茜草素定性反应后的颜色？结构与呈色的关系？2、其它鉴别方法实验三 槐类中芦丁的提取、分离与鉴定（1）芦丁的提取一、

16、实验目的1、 学习苷类化合物的提取方法2、 得到芦丁粗品二、实验原理芦丁在热水中的溶解度为1：200，冷水中的溶解度为1：10000，因此，采用热水提取，冷水析出的方法提取得到芦丁。三、实验方法20g槐米 400ml沸水，煮1hr，过滤滤液 滤渣 300ml水煮30min，过滤 滤液 放置，抽滤，干燥 芦丁粗品四、注意事项1、开始用沸水提取2、提取液要趁热过滤3、提取时要不断补充水分五、思考题1、 苷类化合物提取时应注意什么？2、 提取液为什么要趁热过滤？3、 槐米中的芦丁还能用什么方法提取？各有什么特点？请设计方法验证。(2)芦丁的精制和酸水解一、实验目的1、 芦丁粗品重结晶，得到芦丁精品；

17、2、 芦丁酸水解，得到苷元槲皮素精品及糖水解液。二、实验原理 根据芦丁在热水中溶解度大、冷水中溶解度小的性质重结晶；三、实验方法芦丁粗品 其余芦丁 1g芦丁 水（1：200）加热溶解 2%H2SO4直火回流趁热抽滤 加热30min,抽滤滤液 放置析晶，抽滤 沉淀 滤液（PC）芦丁 水洗中性，95%EtOH重结晶 滤液 加2-3倍量水，静置析晶，抽滤 槲皮素四、思考题1、 芦丁精制时为什么要按1：200加水？2、 芦丁酸水解时溶液会呈现什么变化？为什么？3、 槲皮素重结晶时，为什么加2-3倍量水？（3）槲皮素五乙酰化物的制备一、实验目的学习五乙酰化物的制备方法，得到槲皮素的五乙酰化物。二、原理试

18、剂：无水吡啶、乙酸酐三、方法 200mg槲皮素 4ml吡啶溶解，5ml乙酸酐 空气冷凝管回流加热30min 100ml冷水 搅拌至油滴消失，白色沉淀产生，抽滤 滤饼95%乙醇重结晶 槲皮素五乙酰物四、注意事项1、反应在无水条件下进行，玻璃仪器干燥；2、反应液迅速倒入冷水中搅拌；3、注意溶剂的挥发性。五、思考题1、该反应为什么在无水条件下进行？2、反应过程中会出现什么现象？为什么？ 3、加入冷水中的目的？4、还有什么试剂能用于槲皮素五乙酰化物的制备？请设计方案并验证。（4）糖鉴定一、实验目的学习纸层析鉴定糖种类的方法，确定糖水解液中糖的种类。二、实验原理1、 用Ba(OH)2或BaCO3将酸水解

19、液SO4-去除，调PH7；2、 糖的极性差异，Rf值不同，与标准品对照鉴别。三、实验方法1、糖水解液的前处理 20ml上清液 加Ba(OH)2或BaCO3，调PH7，抽滤 滤液 直火加热浓缩1ml浓缩液2、PC（圆形滤纸法） 展开剂：n-BuOH-HAc-H2O(4:1:1) 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸钠，110C加热至呈色 标准品：葡萄糖、鼠李糖四、注意事项1、加Ba(OH)2或BaCO3调PH值时，注意不要过量，Ba(OH)2或BaCO3在溶液中有溶解的过程；2、PC时，注意滤纸不能有折痕，不能用圆珠笔标记。五、思考题 1、比较葡萄糖、鼠李糖Rf值的大小？2、鉴别苷类化合物的种类还有什么方法

20、？ （5）芦丁、槲皮素的鉴定一、实验目的1、学习黄酮类化合和的颜色反应2、黄酮苷及苷元的聚酰胺层析方法3、芦丁、槲皮素五乙酰化物熔点测定二、方法1、m.p.：芦丁、槲皮素五乙酰化物2、芦丁、槲皮素的试管反应： HCl-Mg反应Molicsh反应1%AlCl33、芦丁、槲皮素的溶解性1%NaHCO32.5%Na2CO30.5%NaOH4、聚酰胺薄层展开剂：95%EtOH标准品：芦丁、槲皮素显色剂：1%AlCl3 三、思考题1、 芦丁、槲皮素在聚酰胺薄层上的色谱行为？如果用氯仿-甲醇为展开剂，色谱行为？2、 芦丁、槲皮素在硅胶薄层、PC上的色谱行为？3、 苷类结构的研究内容还有哪些？用什么方法？天然药物化学实验供药学、药物制剂、生物制药专业用南京中医药大学药物化学教研室