2017年度一轮深刻复习细胞工程.ppt

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1、细胞工程,植物组织培养,植物体细胞杂交,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体的制备,核移植,植物细胞工程,动物细胞工程,理论基础,细胞的全能性,其他动物细胞技术的基础,一、植物细胞工程的基本技术,（一）细胞的全能性 1、概念：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。 2、原因：受精卵,有丝分裂,体细胞,含全套遗传基因,3、全能性的程度,（1）受精卵的全能性最高,4、形成不同组织、器官原因：,基因选择性表达,5、条件：,（1）离体状态 （2）提供营养物质、激素,（4）体细胞：分化程度低的分化程度高的 分裂能力强的分裂能力弱的,（二）植物组织培养技术(重点 理解 ),1、原理：植物细胞的全

2、能性 2、过程： 外植体 愈伤组织 根、芽 植物体,再分化,脱分化,避光,需光,植物激素： 细胞分裂素、生长素,分化培养基,人工种子：胚状体、不定芽、顶芽和腋芽经人工薄膜包装而得。,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,正在融合的原生质体,去细胞壁,再生细胞壁,植物组织培养,植物细胞融合,植物体细胞杂交过程,4、优势：（与有性杂交方法比较）,克服植物远缘杂交不亲和性,2、原理： 细胞膜的流动性和细胞全能性,（三）植物体细胞杂交,3、原理：,物理方法离心、振动、电激,化学方法聚乙二醇（PEG）,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,10代细胞,传代培养

3、,无限传代,单个细胞,二、动物细胞培养,1、过程,不易传下去,增殖逐渐缓慢以致停止,细胞的核型发生变化,使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。,常见现象：细胞贴壁、接触抑制,（1）无菌、无毒的环境 （2）营养 （3）温度和PH （4）气体环境：,（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）,补充合成培养基中缺乏的物质,36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。,O2作用：进行 呼吸，提供能量 CO2作用：维持培养液的PH值,（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）,有氧,95%空气和5% CO2,二、动物细胞培养,2、条件,比较：,培养基特有成分

4、,培养基性质,原理,比较项目,细胞的全能性,蔗糖、植物激素,固体培养基,植物组织培养,葡萄糖、动物血清,液体培养基,细胞增殖,动物细胞培养,1、原理：,三、动物细胞核移植,2、分类：,动物细胞核的全能性,胚胎细胞核移植、体细胞核移植,供体细胞（供核）,细胞培养,体细胞,卵母细胞 （减中期：供质）,去核,无核卵母细胞,核移植,重组细胞,重组胚胎,胚胎移植,代孕母体,新个体,分娩,激活,3、过程：,完成细胞分裂和发育进程,含有促使体细胞细胞核表现全能性的物质和营养,四、动物细胞融合,1、原理：,细胞膜的流动性,灭活的病毒(与植物细胞杂交不同点),离心、振动、电刺激；,聚乙二醇；,2、诱导融合的方法

5、：,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,仙台病毒等,3、过程：,四、动物细胞融合,五、单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,用特定的选择培养基筛选,克隆化培养、专一抗体检测,1、过程,1、过程,B淋巴细胞 骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,八单克隆抗体,五、单克隆抗体制备,2、原理：,3、单克隆抗体的优点：,特异性强、灵敏度高、可大量制备,骨髓瘤细胞能无限增殖，一种B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。,4.应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,五、单克隆抗体制备,