DNA的提取(34张).ppt

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1、课题1 DNA的粗提取与鉴定,1,基础知识,2mol/L浓度可使DNA溶解； 0.14mol/L浓度可使DNA析出。,一、DNA的溶解性,二、酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精； 三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 四、大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性,五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响,六、DNA的鉴定,DNA与二苯胺（沸水浴加热）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 甲基绿（绿色）,实验设计,2,（一）实验材料的选取,1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、

2、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。,2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。,加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？,洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解,会使细胞核内DN

3、A释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等,（三）去除滤液中的杂质,方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。,方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。,方案三：将滤液放在60-75的恒温水浴中保温10-15，注意严格控制温度范围。,（四） DNA的析出与鉴定,1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入 与滤液体积相等的、冷却的 酒精溶液（

4、体积分数为95%）， 静置23min，溶液中会出现 白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。,2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。,操作提示,3,2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。,3.二苯胺试剂要现配

5、现用，否则会影响鉴定的效果。,1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,提取DNA, A出现蓝色 B无变化,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,2mol/L,过滤取纱布上的滤物,纱布过滤,再次溶解DNA,2mol/LNaCl溶液,取滤物,滤液,加冷酒精使DNA析出（纯化）,冷酒精,DNA的鉴定,1.在DNA的粗提取实验过程中，两

6、次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,B,2.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是（ ） A氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B人血也可代替鸡血进行实验 C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 DDNA不能溶于酒精,D,3在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是（ ） A DNA溶解于水 B血细胞破裂，DNA释放 C稀释血液，防止凝固 D有利于搅拌,B,4若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是（ ） A利于DNA的溶解 B分离DNA和蛋白质 C溶解细胞膜 D溶解蛋白质,A,5在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A有利于溶解DNA B有利于溶解杂质 C减少DNA的溶解度 D减少杂质的溶解度,C,退出,