植物组织培养的基本步骤(3页).doc

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1、-植物组织培养的基本步骤-第 3 页植物组织培养的基本步骤成熟细胞离体（脱分化）分生细胞（分裂）愈伤组织（再分化）形态建成完整植株。培养基的主要成分【水分】【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物 【凝固剂】琼脂培养基和组织培养用具的灭菌方式【培养基，无菌水】 高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌1530分钟【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌12h【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂【超净工作台

2、】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口【培养瓶表面】70%乙醇擦拭【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒植物外植体的灭菌方式【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡510min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗35次。【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗23次。【种子】 用10%次氯酸钠浸泡2030min，或0.1%升汞消毒510min，然后再用无菌水冲洗35次。【花蕾】1.用70%乙醇浸泡1015秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗23次。【根及地下部器官】 用0.1%升汞浸泡510min 或用次氯酸钠浸泡1015min，再用无菌水冲洗35次。【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】