杠板归活性成分的粗分及体外抑菌研究(24页).doc

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1、-杠板归活性成分的粗分及体外抑菌研究-第 19 页本科毕业论文（设计）杠板归活性成分的粗分及体外抑菌研究学 院： * 专 业： * 班 级： * 学 号： * 学生姓名： * 指导教师： * 2008年 06月 01日+本科毕业论文（设计）诚信责任书本人郑重声明：本人所呈交的毕业论文（设计），是在导师的指导下独立进行研究所完成。毕业论文（设计）中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。特此声明。论文（设计）作者签名： 日 期： 目录摘要Abstract第一部分 前言11.1 蓼属植物研究概况11.2 蓼属植物的化学成分研究概况11.3 蓼属植物药理作用研究概况31.4

2、 杠板归植物研究概况4第二部分 本论8中药提取概述882.3 抑菌研究10第三部分 结果与讨论222223主要参考文献24致谢26中文摘要杠板归又名贯叶蓼、蛇牙草等，为蓼科蓼属(Polygonaceae)植物杠板归(Polygonum PerfoliatumL.)的干燥全草。杠板归味酸苦，性平，具有利水消肿、清热、活血、解毒等功效，主治水肿、黄疽、泄泻、疟疾、痢疾、百日咳、淋浊、丹毒、湿疹、疥癣。药理研究表明，杠板归具有抗肿瘤活性，而对杠板归化学成分的报道较少。为了进一步阐明杠板归的药效物质基础，为杠板归资源的深层次开发利用及质量控制提供依据，本论文对杠板归作了初步的提取及分离实验，并作了一些

3、体外抑菌实验的研究工作。实验方法：采用不同浓度的乙醇对杠板归的干燥全草进行提取，然后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。并用所得萃取物作抑菌研究，采用琼脂纸片扩散法测定其不同极性成分的抑菌效果，并与传统杠板归水煎剂的抑菌效果作比较。结论：杠板归的抑菌物质主要是弱极性到中等极性的成分，氯仿、乙酸乙酯萃取出来的成分对革兰氏菌的抑菌效果都明显比传统水煎剂的好。石油醚萃取部分对黄曲霉有较好的抑制作用，氯仿萃取部分对白色念珠菌有一定抑制作用。关键词: 蓼属，杠板归，抑菌作用AbstractThe genus Polygonaceae comprising more than 150 speci

4、es all around the word and they distribute mainly in northern temperate zone. Many of them are used in folk medicine in China. Polygonum Perfoliatum L. is one species of them. The whole Plant of Polygonum Perfoliatum L. was used as folk medicine in treating edema，jaundice，dysentery，whooping cough an

5、d so on. In recent years，some references showed that P. Perfoliatum L. has anticancer activity.In this Paper，in order to obtain the chemical constituents，the dried Plant were extracted with different Volume fraction of Et0H，then the solution was evaporated to dryness under vacuum to give a residue.

6、Then the benzine, the chloroform, the ethyl acetate, and the normal butyl alcohol were used to carry on the extract in turn. And does the bacteriostasis research with obtained extract obtained, uses the agar-agar slip of paper diffusion process to determine its different polar ingredient the bacteri

7、ostasis effect, and does with the traditional polygonum perfoliatum water decoctums bacteriostasis effect compares. Discovered that the polygonum perfoliatum the bacteriostasis material is mainly the weak polarity to the medium polar ingredient, the ingredient which the chloroform, the ethyl acetate

8、 extract come out to the Gelanshi fungus bacteriostasis effect obviously compared to traditional water decoctum good. The benzine extract part has the good inhibitory action to the yellow koji mold, the chloroform extract part has certain inhibitory action to the white rosary fungus.Keywords: Polygo

9、num, polygonum perfoliatum, bacteriostasis function第一部分 前言1.1 蓼属植物研究概况蓼科植物世界上有40 属800 余种,主要分布在北温带。蓼属( Polygonum) 是蓼科中的药用大属,全世界大约300 多种。我国约有120种,其中81种供药用,分布于全国各地,大多具有清热解毒、散结消肿、活血止痛、顺气解痉、收敛止泻、通经利尿等功效。蓼属植物为一年生或多年生草本，稀为半灌木或小灌木。茎直立、平卧或上升，无毛、被毛或具倒生钩刺，通常节部膨大。叶互生，线形、披针形、卵形、椭圆形、箭形或戟形，全缘，稀具裂片;托叶鞘膜质或草质，筒状，顶端截形

10、或偏斜，全缘或分裂，有缘毛或无缘毛。花序穗状、总状、头状或圆锥状，顶生或腋生，稀为花簇，生于叶腋;花两性稀单性，簇生稀为单生;苞片及小苞片为膜质;花梗具关节;花被5深裂稀4裂，宿存;花盘腺状、环状，有时无花盘;雄蕊8，稀47;子房卵形;花柱23，离生或中下部合生:柱头头状。瘦果卵形，具3棱或双凸镜状，包于宿存花被内或突出花被之外1。其中,何首乌( P. multiforum Thunb. ) 、虎杖( P. cuspidatum Sieb. Et Zucc. ) 、红蓼(又名荭草,P. orientale L. ) 、拳参( P. bistorta L. ) 、蓼蓝( P. tinc2tori

11、um Lour) 、萹蓄( P. aviculare L. ) 等均为著名常用中药材23 ,并为中国药典所收载。民间习用药材有赤胫散( P. runcinatum Buch.2Ham. ex D. Don) 、火炭母草( P. chinensis L. ) 、杠板归( P. perfoliatum L. ) 、分叉蓼( P. divaricatum L. ) 、支柱蓼( P. suffultumMaxim) 和水蓼( P. hydropiper L. ) 4 。1.2 蓼属植物化学成分研究概况目前为止，该属植物化学成分报道主要集中于何首乌(Polygonum multiforum Thunb.

12、 )、虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. Et Zucc. )、荭草(polygonum orientaleL.)、拳参(Polygonum biconvexum)、蓼蓝(Polygonum tinctorium Lour)、萹蓄(Polygonum aviculare L.)等常用中药材，从该属植物中分离得到的化合物主要为黄酮及其苷类、醒类、二苯乙烯类、苯丙素蔗糖酯类、萜类、甾类、有机酸类和其他类化合物.1.2.1 挥发油成分 蓼属植物含有多种挥发油成分。N guyen等5对越南P. od oratum L. 地上部分的挥发油组分进行了HPLC-M S （液-质联用）

13、分析, 从中检测到50 多个化合物, 主要成分为B2石竹烯、氧化石竹烯和十二烷醛等, 对南澳洲P. od otatumL. 的化学成分研究发现还有癸醛(decanal)、癸醇(decano l)等17 种挥发油成分6。1.2.2 黄酮及黄酮苷类黄酮、异黄酮及黄酮苷类是蓼属植物最主要的次生代谢产物。较早报道的该类成分有水蓼素(persicarin)、槲皮素、槲皮苷、槲皮黄苷(quercim erit rin)、色酮(ch romones)、查耳酮和二氢黄酮等。Haraguchi等78从水蓼叶中分离到7, 4- 二甲基槲皮素、3- 甲基槲皮素、异槲皮苷、槲皮素-3-磺酸盐、异鼠李黄素( isorh

14、amnet in)、异鼠李黄素-3, 7-二磺酸盐、柽柳黄素-3-葡萄糖苷-7-磺酸盐( tamarixet in-3-gluco side-7-sulfate)、甲基鼠李黄素( rhamnazin)、甲基鼠李黄素-3-磺酸盐和异槲皮苷(isoquercit rin) 等黄酮及黄酮苷类成分。One 等9 从P. hydropiper 的细胞培养物中分离出3 个儿茶素类(catech ins) 成分, 分别鉴定为catech in、ep icatech in、ep icatech in-3-O -gallate。U rones 等从P. m inus 中分离到6, 7-亚甲基二氧-5, 3, 4

15、, 5- 四甲氧基黄酮和6, 7-4,5- 二亚甲基二氧-3, 5, 3- 三甲氧基黄酮。A hmed 等报道首次从辣蓼P. f laccid um M eissn. 中分离到脂酰基黄酮类化合物。郑尚珍等从红蓼P. oriental L. 植株中分离到槲皮素-3-O -L -鼠李糖苷、槲皮素-3-O -L -葡萄糖苷、芦丁、荭槲皮素-7-O -L -鼠李糖苷和异鼠李素等5 个黄酮苷类成分, 从种籽中分离出花旗松素-3-O -D -葡糖苷( taxifo lin-3-O -D -gluco side)、山柰素-3-O -L -鼠李糖苷(kaempfero l-3-O -L -rhamno sid

16、e) 和柯伊利素-7-O -D -葡糖苷(ch rysoerio l-7-O -D -gluco side) 等3个黄酮苷化合物10 。1.2.3 萜类成分 倍半萜类化合物是蓼属植物非常重要的次生代谢产物, 这些化合物大多都具有drimane 骨架, 如从水蓼及同属其它多种植物中分离出的二醛类成分水蓼二醛( tadeonal, po lygodial)、dialdehydes、异水蓼二醛( iso tadeonal) 和w arburganal 等1112。Jacobsson 等9 从P. g labrum 中分离出4 个具有典型drimane 骨架的倍半萜化合物, 这4 个化合物都是2, 3

17、 位两个羟基的羧酸酯化物。其他的萜类成分还见-檀香萜(-santalene) 及其衍生物13 。1.2.4 甾类成分 T sai 等14 从火炭母P. ch inense 的叶子中分离到25R -螺甾烷-4-烯-3, 12-二酮(25R -sp iro st-4-ene-3, 12-dione)、豆甾-4-烯-3, 6-二酮(st igmast-4-ene-3, 6-dione) 和豆甾烷-3, 6-二酮( st igmastane-3, 6-dione) 等3 种抗炎、抗过敏活性的甾类成分。其他甾类成分还见-谷甾醇、-谷甾醇苷和豆甾醇等。1.2.5 蒽醌及蒽醌衍生物 迄今已从蓼属植物中分离到

18、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚(physcion)、大黄素-1-O -D -葡萄糖苷、大黄素甲醚-1-O D-葡萄糖苷、蒽醌、蒽黄酮酸(an-th raflavic acid)、1, 5-二羟-蒽醌、蒽醌-2-羧酸、2-乙蒽醌、1-氨基蒽醌、2-氨基蒽醌和茜素(alizarin) 等一大类蒽醌衍生物15 。1.2.6 其他成分蓼属中已见报道的其它化学成分还有(st ilbenes) 和芪苷 16 、苯丙醇苷类17 、白花苷( leucoantho-cyanin) 和金丝桃苷(hyperin) 等。1.3 蓼属植物药理活性研究概况1.3.1 杀虫活性 蓼属植物大多都具有杀虫、昆虫拒食、驱避活性。水蓼

19、、萹蓄、辣蓼、异叶蓼P. heterop hy llum L indm. 、节蓼P. nod osum Pers. 、腋花蓼P. p lebeium R. B r. 、多穗蓼P. p oly stachy um W all. 和扛板归P. p erf oliatum L. 等植物的杀虫功效已见广泛的资料记载。P. accum inatum 和P.p unctatum 在巴西和巴拉圭也被用作传统的杀虫剂治疗畜禽螨病。水蓼中含有的二醛倍半萜类成分w arburganal 和po lygodial 有明显的昆虫拒食活性18 , 水蓼的乙酸乙酯提取物对S p lilarctia obliqua 和S

20、p od ep tera litu ra 的三期幼虫具有明显的驱避、拒食活性19 。P. g labrum 是生长于尼罗河岸边的一种多年生草本植物, 在苏丹一直被用作抗蠕虫药物,由于其含有昆虫驱避活性的倍半萜成分, 因而不受害虫及食草动物(单峰骆驼除外) 的侵袭。以浸纸法观察了19 种植物的20 种提取物对白蛉L u tz omy ia long ip alp is 的杀虫活性,结果表明包括P. accum inatum HBK1 和P. av icu lare L. 在内的5 种提取物显示良好的杀虫活性, 以P. av icu lare L 1活性最好18。P. convolvu lus L

21、 1 的醇、水提物和蓼科酸模属植物R um ex acetosa L. 的醇提物对白菜毛虫显示强烈的驱避活性。P. lim batum 还有一定的灭螺活性, 从而对以螺类为中间宿主的疫病防制有意义。据推断该属植物含有的倍半萜类成分的8, 9-二醛基7, 8 位不饱和的drimane 骨架可能是该类植物具有昆虫驱避活性的化学基础。1.3.2 抗微生物活性 体外试验表明, 水蓼茎叶中含有的鞣质对痢疾杆菌有一定的抑制作用, 水蓼的水提物对部分革兰氏阴性菌有相当的抗菌活性。在中医临床上, 水蓼常用于治疗细菌性痢疾、肠疳。P. g labrum、P. bistorta、P. equ isetif orm

22、 e 等其他同属植物的抗菌、抗真菌、抗炎作用也多见报道2021 。1.3.3 抗氧化作用 蓼属植物大多具有抗生物膜脂质过氧化和清除体内过多自由基的作用, 因此, 许多蓼属植物都有抗衰老活性。Haraguch i7 等报道了存在于水蓼水溶性组分中的具有抗氧化活性的黄酮苷元和黄酮苷类成分, 分别为7,4- 二甲基槲皮素(a)、3- 甲基槲皮素(b)、槲皮素(c) 和黄酮苷类成分异槲皮苷(d) , 其抗氧化活性依次为d a c b。Yagi 等18从水蓼中分离出3 种亲水的黄酮类成分, 分别为3-磺基槲皮素、3, 7-二磺基异鼠李素和7-磺基柽柳素-3-葡萄糖苷, 活性试验结果表明这3 种化合物的抗

23、氧化活性均优于 -生育酚和槲皮素, 槲皮素也优于 -生育酚。P. av icu lareL 1 的抗脂质氧化及保肝作用也见报道。1.3.4 抗肿瘤作用水蓼对苯并芘、1, 6-二硝基芘和3, 9-二硝基荧蒽的致癌变作用呈现一定程度的抑制活性22 。P.cusp id atum 中含有蒽醌类化合物大黄素, 大黄素通过抑制蛋白酪氨酸激酶(PTKs) 的活性而起到抗肿瘤的作用20 。另外也见蓼属植物抑制蛋白激酶C (p ro tein k inase C) 和Ca2+ATP 酶活性的报道。1.4 杠板归植物研究概况1.4.1 杠板归简介杠板归（Herba Polygoni Perfoliati）为蓼科

24、蓼属（Polygnum L.）刺蓼组（nocaulon Meisn.）植物杠板归（Polygonum perfoliatumL.）的干燥全草。性酸，微寒。别名 河北草 蛇倒退 梨头刺 蛇不过。生于海拔1800米以下的山谷，灌木丛中或水沟旁，除新疆、西藏、内蒙、甘肃、宁夏、青海等西北干旱地区外，其他各省、市、自治区均有分布。在其分布中，自北向南，杠板归发生分布越来越普遍，总的发生分布趋势是西北、东北、华北，零星分布；华中、中南分布较广泛；华南、西南、东南分布及广泛。主产 江苏 福建 浙江 江西 广东 广西 四川 湖南 贵州2324. 植物形态：多年生蓼生草本。茎有棱，红褐色，有倒生钩刺。叶互生，

25、盾状着生；叶片近三角形，长4-6cm，宽5-8cm，先端尖。基部近心型或截形，下面沿脉疏生钩刺；托叶鞘近园形，包茎；叶柄长，疏生倒钩刺。花序短穗状；苞片圆形；花被五深裂淡红色或白色，结果时增大，肉质，变为深蓝色；雄蕊8；花柱3裂。瘦果球形，包于蓝色多汁的花被内。花期6-8月，果期9-10月2324。 药材性状：本品略呈方柱形，有棱角，最长可达1米，紫红色或紫棕色，棱角上有倒生钩刺，节略膨大；根断面黄白色，有髓心或中空。叶互生，叶柄盾状着生；叶片多皱卷，展平后近等边三角形，灰绿色至红棕色，下面叶脉及叶柄均有倒生钩刺。总状花序顶生活生于上不叶腋；花小，多卷缩或脱落。气微，味微酸。多叶者佳33。1.

26、4.2 杠板归的主要化学成分（1）黄酮苷 从杠板归分离得到的黄酮苷主要是碳苷型化合物，如牡荆素,异牡荆素，异东方廖黄素，芹菜素-6，8-二葡萄糖碳苷等，具有抗炎抑菌，祛痰，解热等功效30。（2）.蒽醌苷 蒽醌苷主要对霉菌哼真菌有较强杀灭作用，是治疗疱疹，疥疮等皮肤疾病有效的外用药。（3）强心苷 强心苷是存在于植物中具有强心作用的甾体苷类化合物。目前临床上应用达二三十种，主要用以治疗充血性心力衰竭等心脏疾病，但是杠板归所含的强心苷对于这方面的治疗未见报道31。（4）.有机酸 杠板归中的有机酸主要有香豆素。，阿魏酸，香草酸，原儿茶酸，咖啡酸。（5）.鞣质 鞣质又称单宁或鞣酸，是存在于植物中的一类分

27、子较大的复杂多元酚类化合物。文献【31】报道从杠板归中提取的单宁对TMV具有明显的抑制作用。（6）.糖类和氨基酸 糖类和氨基酸是杠板归的一些基本的化学成分，他们的药用性质还未见报道。另外还含有蓼黄素、靛苷1.4.3 药理作用（1）.抗菌作用 杠板归的水煎剂对金黄色葡萄球菌、乙形溶血性链球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、斯密氏杆菌、宋氏痢疾杆菌、志贺氏痢疾杆菌均有抑制作用，常用于烧伤残余皮肤的恢复治疗。烧伤残余面经细菌培养大多数为耐药金黄色葡萄球菌，杠板归煎剂对金黄色葡萄球菌及各种细菌的抑制作用，有促进创面水肿消褪之功效，还可能对上皮生长有促进作用38。（2）抗病毒作用 杠板归乙醇粗提取浓缩在

28、经水/氯仿萃取物具有明显抑制TMV效果，而氯仿萃取物效果差。萃取物用明胶去除单宁后，基本失去抑制TMV的能力，表明单宁在其中起着重要作用。杠板归的总单宁对TMV的抑制作用可能是其与病毒外壳蛋白的结合，使病毒粒体聚集结合，降低外壳蛋白对寄主上的病毒侵染位点或抑制病毒在植物体内的复制3637. 鉴于杠板归对皮肤真菌，病毒疣杀灭作用，杠板归的煎汤还可以结合手术切除后治疗肛门尖锐湿疣。中药煎汤熏洗，其药汁可敬皮肤及创面到皮下，整个肛管及肛周，起到杀灭病毒，预防复发的作用，且对正常皮肤无腐蚀损害作用25。 带状疱疹是水痘2带状疱疹病毒感染引起的常见皮肤病，中医认为是情志内伤，以致肝胆火盛，或因脾湿郁久，

29、湿热内蕴，外受毒邪而发。杠板归味酸苦性平，具有利尿消肿，清热活血解毒作用。对于应用杠板归治疗带状疱疹主要是一些中医传统方法和中医汤剂，文献上报道主要有以下几种治疗的方法： .杠板归外敷加围针治疗，可以促进血液循环，可加速治疗效果26。 .取鲜杠板归茎叶捣烂，用凡士林适量调敷患处，每天更换一次，6-8天疱疹全部消失而痊愈，无神经痛等后遗症39。 .消疹洗剂：紫草、土茯苓、马齿苋、苦参各30克，蛇床子、野菊花、杠板归个20克，薄荷、白帆各10克，每天一剂。加水浓煎取滤，乘热外洗患处，治疗效果比较好30。（3）抗寄生微生物疥疮是由人型疥螨引起的接触性传染病行皮肤病，易在家庭和集体宿舍内传染，临床以皮

30、损，夜间瘙痒症为其特点。文献【31】报道主要用以下这种方法配合治疗：青蒿、杠板归兼有解毒利湿，止痒之功效；千里光、苦楝树皮，蓖麻树、辣蓼、花椒树兼有解毒、利湿、杀毒、止痒之功效；諸药配伍，相辅相成效果比较好。但是能否将上药浓煎制成疗效更好，疗程更短，且使用方便的药膏，则需要进一步研究。（4）止咳化痰作用 现在主要把杠板归制成糖浆来治疗消化道疾病。 杠板归糖浆是中药材杠板归的单味药制剂，临床用于止咳化痰功效显著。将杠板归干燥全草切成碎片，加水文煎熬成杠板归浓缩液，加蒸馏水配成50%的水溶液。同过实验杠板归低剂量组和高剂量组对小鼠氨水引咳均有明显的镇咳作用，且高剂量组优于低剂量组。同时对促进小鼠呼

31、吸道内酚红排泄试验有显著统计学意义37。同时由于杠板归具有清热利水、宣肺止咳之功效。近年以来将杠板归制剂用于临床治疗风热型、风燥型咳嗽，疗效显著，也为民间治疗百日咳的常用草药32。（5）其他药理作用现代药理研究表明，杠板归体外实验具有抗癌活性，体内试验对实验性动物移植肿瘤有抑制作用41，由杠板归制成的蛇牙草注射剂用于癌症患者化疗后的白细胞降低，有一定的提升作用41。目前国内对痔痿术后一般常规使用抗生素和止血药来防治感染和止血。由于杠板归煎剂具有抑菌作用，而且杠板归提取的杠板归明胶纤维素有止血作用。用杠板归制剂作为痔瘘术后药物效果良好，和抗生素和止血药的效果接近且在应用过程中未发现不良反应38。

32、 杠板归还可以用于治疗急性扁桃体炎，利尿消肿，活血除湿，还可治疗农药， 根皮可提取栲胶，叶可制靛蓝。第二部分 本论广义中药提取也称为分离，是指从中药材原料开始，经过一道或多道操作工序，最终得到所需要的药物或其半成品的全过程。包括从原料前处理，溶质分离，浓缩到得到某一物质的整个生产过程，可以分成很多个工序或单元操作过程。前面的过程为前处理，后面的过程为分离精制。通过化工传质，传热理论及其实际应用的综合来指导中药有效成分或其提取物生产过程，为中药制剂中医处方和中药调剂提取或提纯的中药原料学。中药提取不同于天然化学药物的制备，中药提取主要要求提取总有效成分，不特别强调结晶性的单一成分，实际上多数是粗

33、提物，所以中药提取过程主要是研究各种中药材和各种中药处方中总有效成分的提取物生产技术的，它的产品是中药制剂的原料药。按照分离手段的不同，溶质分离方法主要包括化工传质方式和机械方式。前者是用液体溶媒从固体药材中浸出有效成分的操作过程，称为浸提、浸出或浸取，是现代中药生产的主要提取方法，后者即榨取法通过机械方法使含液固体组织发生体积变化和碎裂进而分离液体和固体45 杠板归活性成分的提取与粗分2.2.1 仪器与材料（1）药物：杠板归（蛇倒退）购于贵州省贵阳市花溪区中药店（2）试剂：不同体积分数的乙醇、 石 油 醚（30-600C） 成都金山化学试剂有限公司 氯 仿 重庆川江化学试剂厂 乙酸乙酯 无锡

34、市科密欧化学试剂开发中心 正 丁 醇 山东瑞兴化工有限公司（3）仪器：1000ml分液漏斗RE-52A旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 SHB-D真空泵 郑州长城科工贸有限公司 SW-CJ-1FD型单人单面净化工作台 苏州净化设备有限公司 HZQ-F160A高低温恒温振荡培养箱 上海一恒科技仪器有限公司 BCD-208K/A N冰箱 青岛海尔集团GMSX-280手提式压力蒸汽消毒器灭 北京市永光明医疗仪器厂 提取率实验 本实验采用溶剂提取法中的浸渍法来对杠板归进行提取，浸渍法系将中草药粉末或碎块装人适当的容器中，加入适宜的溶剂（如乙醇、稀醇或水），浸渍药材以溶出其中成分的方法。本法比较简单易行，

35、但浸出率较差，且如用水为溶剂，其提取液易于发霉变质）须注意加入适当的防腐剂。 本实验以不同体积分数的乙醇作为溶剂对杠板归进行提取。称取重20g的杠板归干燥全草7份，分别用体积分数为60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%的乙醇室温冷浸3次，每次分别用相应浓度的乙醇200ml，周期为7天。分别合并3次浸体液，然后分别将提取液减压回收乙醇，最后称量出相应所的浸膏质量，并分别计算出相应的提取率。实验结果见表2.1表2.1 乙醇体积分数对杠板归粗提取率的影响杠板归样重乙醇体积分数（%）浸提所得浸膏质量（g）提取率20g60%13.6%20g70%12.8%20g75%11.6%20g80

36、%10.5%20g85%10.1%20g90%8.5%20g95%8.4%注：室温冷浸3次，每次分别用相应的乙醇200ml,周期为7天。 杠板归活性成分的提取与粗分称取1千克重的杠板归干燥全草4份，分别用10升60%、75%、85%、95%的乙醇室温冷浸3次，每次7天。提取液减压回收乙醇分别得浸膏、。粗分采用两相溶剂萃取法，用蒸馏水使浸膏混悬,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取。实验结果见表 表2.2 杠板归提取结果杠板归重乙醇体积分数浸膏重（g）石油醚层氯仿层浸乙酸乙酯层正丁醇层浸水层难溶性成分浸膏重(g)占总浸膏的百分比浸膏重(g)占总浸膏的百分比浸膏重(g)占总浸膏的百分比浸膏重(

37、g)占总浸膏的百分比浸膏重(g)占总浸膏的百分比重量（g）占总浸膏的百分比1kg60%4.3%9.8%9.6%49.5%17.5%10.9%1kg75%11.3%12.6%11.0%43.8%15.7%8.1%1kg85%16.9%27.8%23.9%18.6%9.8%3.4%1kg95%20.4%30.6%23.1%17.8%6.9%3.0%合计12.2%18.8%15.9%34.6%13.2%6.9%2 化学成分初步鉴定（1）甾体或三萜类化合物的检查（Liebbermann-Burchard反应）用4支小试管分别取石油醚层浸膏、氯仿层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏各少许，然后分别加0.

38、5ml醋酐，加1ml浓硫酸，氯仿层浸膏的试管溶液界面初呈红色，试管内溶液逐渐由红紫蓝绿污率。其余无明显现象。实验结果见表（2）黄酮类化合物的检查（盐酸镁粉反应）用4支小试管分别取石油醚层浸膏、氯仿层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏各少许溶于 10 ml乙醇中，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏的试管即升起红色的泡沫。其余无明显现象。实验结果见表（3）糖、多糖和苷类化合物的检查（Molish反应）用4支小试管分别取石油醚层浸膏、氯仿层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏各少许加1ml热水，再加5%-萘酚乙醇溶液2-3滴，摇匀，沿管壁缓缓加入0.5ml浓硫酸，氯仿层浸膏

39、、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏的试管里在试液于浓硫酸的交界面处很快形成紫色环，经振摇后颜色变深并发热，冷却加水稀释有暗紫色沉淀出现。石油醚层浸膏的试管里无明显现象。实验结果见表表鉴定反应Liebbermann-Burchard反应盐酸镁粉反应Molish反应石油醚层浸膏+-氯仿层浸膏+-+乙酸乙酯层浸膏-+正丁醇层浸膏-+2.3 抑菌研究 概述目前，在食品药品中应用的防腐剂有合成防腐剂和从植物中提取得天然防腐抑菌剂。天然防腐剂按其来源可分为植物源防腐抑菌剂、动物源防腐抑菌剂及微生物源防腐抑菌剂；而合成的防腐抑菌剂对人体、生态环境会产生一些不利影响。这就需要人们发现和研究一些具有良好防腐作用的天

40、然防腐抑菌剂，这种防腐抑菌剂不但要求能抑制腐败微生物的污染和繁殖，还要对人体健康无害42。.2 天然植物防腐抑菌剂的应用研究植物源防腐抑菌剂来源广泛，目前世界上大约存在20000种药用植物具有抑菌作用。我国的中药大词典中收录传统中草药4773种42，其中具有抗菌防腐作用的植物至少有2000种左右，而且它们的药效和安全性较明确，无毒性。近年来，国内外对植物源杀菌剂的研究倍受重视，并取得了较大的进展，发现了很多具有开发潜力的抑菌、杀菌或抗菌的化学成分。植物提取物中的抗菌物质有效成分结构类型较多，几乎涉及各类植物成分。在化学组成上分属于多类化合物，大致可以分为以下几类44：萜类(如倍半萜、皂苷类等)

41、含氧或含硫组分（生物碱、胺和酰胺）、脂肪族化合物（尤其是长链烯烃和脂肪酸）和芳香族化合物（如酚类、联苯甲酰、咕吨酮和苯醌）。 天然抑菌物质抑菌效果的微生物测定法43抑菌成分抑菌效果的测定方法，按性质来说可以分为三大类即物理方法、化学方法及微生物方法。对于那些已经知道成分化学结构的物质，可以用定性定量的化学分析方法求知其抑菌效力。但对于天然植物提取来讲，其成分多数是未知的，无论是作为医疗还是添加剂应用，都迫切需要知道这些物质的抑菌或杀菌能力，微生物学法恰能够满足这个要求。从目前的研究成果来看，微生物学法大致可以分为扩散法、比浊法、稀释法三大类。（1） 扩散法扩散法是在固体培养基融化凝固前接种试验

42、菌。待凝固后，将待测品用不同的方法放在培养基上，待测样品在某一溶剂的带动下再培养基内呈放射状扩散。抑菌物质在培养基中的浓度，随离开扩散原点的距离增大而降低，离扩散原点越远处，培养基中抑菌物质的浓度越低。当培养基中抑菌物质的浓度恰好高于该抑菌物质对实验菌的最低抑菌浓度时，试验菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。从理论上讲，抑菌范围的大小可以作为抑菌物质生物效价评定的依据。管碟法和滤纸片法是扩散法的典型代表。（2） 比浊法比浊法如同稀释法中所提到的那样，将不同量的被检样稀释液加入到液体培养基中，根据浊度的变化观察试验菌的生长情况。由于比浊法终点的观察不是根据试验菌生长与否作为终点的判断，而是借助其抑

43、制试验菌生长的速度不同而定。（3） 稀释法稀释法是将含有不同剂量抑菌物质的培养基，依次分装在容器中，并于各个容器内加入对该抗菌物质有高度敏感性的试验菌，经过一定时间和温度的培养，观察其对菌体生长的抑制情况，确定其最低抑菌浓度。作为稀释法的终点有以下两种情况：（1）试验菌的生长被抑制；（2）试验菌的某一生理功能被阻碍。 菌种革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌（Stahylococcus aurers）藤黄微球菌（Micrococcus luteus）革兰氏阴性菌：大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli）绿脓杆菌（P.aeruginosa）真菌： 白色念珠菌（Candida albicans）

44、以上菌种由+生化与制药工程实验室提供黄曲霉（Aspergillus flavus Link）由+微生物实验室提供 培养基牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏 ，蛋白胨 ,NaCl ,加蒸馏水至1000ml,PH 7.4-7.6。萨氏培养基配方：酵母膏 5g，蛋白胨 10g，葡萄糖20g, 琼脂 15g, 加蒸馏水至1000ml查氏培养基配方：硝酸钠 , 磷酸氢二钾 , 硫酸镁（Mgso4.7H2o）, 蔗糖 30g, 琼脂15g, 加蒸馏水至1000ml 杠板归粗提物的抑菌实验（1） 抑菌用样品药液的配制备。 水煎浸膏样品液的制备：称取杠板归干燥全草100g，用温水800ml浸泡1h后文火煎煮30m

45、in，滤出煎煮液；再加水500ml煎煮30min，滤出煎煮液；最后再加水500ml煎煮30min，滤出煎煮液；合并煎煮液，抽滤后减压蒸馏成浸膏。称取浸膏100.0mg利用超声波使其溶于1ml蒸馏水中制成浓度为100mg/1ml的样品液备用。水层浸膏样品液的制备：称取2.2.3所得水层浸膏100.0mg利用超声波使其溶于1ml蒸馏水中制成浓度为100mg/1ml的样品液备用。石油醚层浸膏样品液的制备：称取2.2.3所得水层浸膏100.0mg利用超声波使其溶于1ml浓度为50%的DMF溶液中制成浓度为100mg/1ml的样品液备用。氯仿层浸膏样品液的制备：称取2.2.3所得氯仿层浸膏100.0mg利用超声波使其溶于1ml浓度为40%的DMF溶液中制成浓度为100mg/1ml的样品液备用。其他样品液的制备：分别称取所得乙醇提取浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏各100mg，分别加入浓度为25%的DMF溶液1ml利用超声波分别使其溶解制成浓度都为100mg/1ml的样品液备用。（2） 培养基的制作25牛肉膏蛋白胨培养