微生物的实验室培养学案2(7页).doc
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1、-微生物的实验室培养学案2答案精析一、基础梳理2(1)配方称量纸蛋白胨迅速称取琼脂琼脂100调节pH分装牛皮(2)高压蒸汽干热(3)灭过菌火焰旁迅速通过火焰稍大于瓶口倒过来放置问题探究1促使蛋白胨和氯化钠溶解防止琼脂糊底而导致烧杯破裂2(1)琼脂是一种多糖,在98 以上熔化,在44 以下凝固,倒平板时高于50 则会烫手,低于50 时若不及时操作,琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。(2)通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好
2、地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。(3)未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后,如果无菌落生长,说明培养基制备成功、合格,未受到污染。拓展应用1(1)牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂(2)比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂(3)高压蒸汽灭菌锅废弃2C琼脂是一种多糖,在98 以上可溶解于水,在44 以下凝固,倒平板时高于50 则会烫手,低于50 时若不能及时操作,琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程,皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。等待平板冷却凝固(大约需510 min)后,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上。问题导析(1)50 (2)酒精灯火焰一题多变要对培养基
3、进行高压蒸汽灭菌,对培养皿进行干热灭菌,酒精灯火焰旁属于灼烧灭菌。二、基础梳理1(1)连续划线稀释分散火焰旁棉塞火焰冷却通过火焰三至五不要划破培养基b划线的末端第一区倒置(2)梯度稀释:9 mL1 mL:酒精培养基冷却菌液2频繁使用长期保存固体斜面液体4 灭菌问题探究1(1)接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。划完一个区域后,将接种环灼烧,冷却后再划下一区域。接种环沾取菌液时,要将试管口、棉塞等通过火焰。划线时将培养皿打开一条缝隙,将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内。(2)避免接种环温度太高,杀死菌种。(3)操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。每次划线前灼烧接种环
4、是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。(4)需要。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。(5)划线后末端含有的细菌数目较少,每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少,最终分散成单个的细菌。(6)最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞,如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目,得不到纯化的效果。2(1)应从操作的各个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适,吸管头不要接触任何其他物体,
5、吸管要在酒精灯火焰附近等。(2)培养未接种培养基的作用是对照。未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的;若有菌落生长,说明培养基灭菌不彻底,或培养基被污染,需要重新制备。拓展应用3C稀释涂布平板法要先将菌液进行一系列的梯度稀释,A项正确;只有在稀释度足够高的菌液中,聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落,故而要将不同稀释度的菌液分别涂布平板,B项正确、C项错误;在稀释涂布过程中,为防止杂菌污染,要对培养基和涂布器等进行严格灭菌处理,D项正确。一题多变(1)为保证结果准确,每个稀释度的菌液一般涂布3个平板,并对结果取平均值。(2)将
6、接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入适宜温度的恒温箱中,培养12 h和24 h后,观察培养基上的菌落情况,若未接种的培养基上无菌落生长,则证明操作是成功的;否则不成功。(3)可能是稀释度不够,聚集在一起的微生物没能被分散成单个细胞。(4)菌落种类和数目增多。4C灼烧后的接种环如果没有冷却就接触菌种,会将菌体杀死,A正确;稀释倍数过低,会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落,B正确;平板划线法中一般最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成,这种菌落才符合要求,C错误;连续划线中,除了第一次划线外,每一次划线的起点是上一次划线的末端,目的是使得菌体密度越来越小,保证最后划线末端
7、处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。问题导析(1)越高太高(2)冷却(3)越来越少菌体数目一题多变决定稀释倍数及划线次数的因素是菌液的浓度,如果菌液的浓度较高则需要高倍数的稀释,所划线次数也要较多,否则就可以低倍稀释或减少划线次数。课堂小结称量倒平板平板划线法稀释涂布平板法当堂检测1C制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,应先根据需要计算各成分用量,然后称量、溶化、灭菌、倒平板。2D平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。3D划线之前应对接种环灭菌;划线操作在酒精灯火焰旁进行;从1区域至5区域菌落密度越来越小,可能会在3、4、5区域得到所需菌落。4B用稀释涂布平板法时,如果稀释得当,在平板表
8、面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的。平板划线中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成,这种菌落才符合要求。5(1)氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)稀释倍数不够,菌液的浓度太高;划线时,划完第一次没有灭菌又接着划第二次;培养过程灭菌不严格,受到微生物的污染解析(1)培养微生物的培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子。牛肉膏、蛋白胨既是碳源又是氮源;培养基在接种前必须灭菌处理。(2)微生物的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法两种。(3)多种因素都会导致接种的菌种密度较大,没有形成单一的菌落。-
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