牛肉膏蛋白胨培养基配方(4页).doc

《牛肉膏蛋白胨培养基配方(4页).doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牛肉膏蛋白胨培养基配方(4页).doc（4页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、-牛肉膏蛋白胨培养基配方-第 4 页牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌（荤食），因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长

2、繁殖。 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼脂 1520g、水 1000ml、pH 74768.0）三、器材牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5590），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤 1称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会

3、与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH

4、试纸测其pH值，直至pH达76。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。4过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。5分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图-1。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面

5、，如图-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。6加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。7包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。8灭菌将上述培养基以105kg/cm2（15磅/英寸2），1213， 20

6、分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。9搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。10无菌检查将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。PDA培养基配方：特点及用途PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。 一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌（素食）。酵母菌PH（3.86.0），霉菌（4.05.8）等。 按物理性状划分：固体培养基 ，按培养基成分划分：半合成培养

7、基配方马铃薯 200克 葡萄糖 20克 琼脂 1520克 自来水 1000毫升 自然PH配制步骤其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮烂（煮沸2030分钟，能被玻璃棒戳破即 可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管，加塞、包扎，（121）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 其他事项1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmolLNaOH或lmolL

8、HCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性高氏1号培养及配方：培养放线菌用 ，改良的高氏 可溶性淀粉 2g ，KNO3 0.1g ，K2HPO4 0.05g ，MgSO4 7H2O 0.05g ，NaCl 0.05g ，FeSO4 7H2O 0.001g （母液），琼脂 2g ，自来水 100mL ，pH 7.27.4 ，灭菌 1.05kg/cm2，20min 配制时，先用

9、少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到100ml，调pH，121灭菌20min。 高温灭菌后，倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀，将培养基倒入平皿内约15ml/皿。 高氏1号： 可溶性淀粉（20g），KNO3（1g），K2HPO4（0.5g），MgSO4 7H2O（0.5g），NaCl（0.05g），FeSO4 7H2O（0.01g），琼脂 20g，pH=7.4-7.6 和改良的差别就在于有没有FeSO4 7H2O 高氏常常配完后变成褐色也是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系，所以常常有人用螯合的FeSO4，防止氧化。