定性试验验证内容和方法.pdf

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1、By LauraBy LauraBy LauraBy LauraBy LauraBy LauraBy LauraBy Laura 检测系统的方法学性能评价检测系统的方法学性能评价 新疆医科大学临床医学院检验系新疆医科大学临床医学院检验系 张朝霞张朝霞 教授教授 一一. .未更改检测系统的验证未更改检测系统的验证 1 1、精密度（批内、批间）、精密度（批内、批间） 2 2、准确度（标准物质、标准方法、方法、准确度（标准物质、标准方法、方法 学比对）学比对） 3 3、可报告范围（验证最大稀释倍数）、可报告范围（验证最大稀释倍数） 4 4、参考区间（检测、参考区间（检测2020个正常样本验证）个正常

2、样本验证） 定量试验方法的验证和确认试验定量试验方法的验证和确认试验 定量试验方法的验证和确认试验定量试验方法的验证和确认试验 二二. .更改检测系统的确认试验更改检测系统的确认试验 准确度（准确度（EP9EP9） 精密度（精密度（EP5EP5） 可报告范围（可报告范围（EP6-P2EP6-P2） 参考区间（参考区间（C28-A2C28-A2） 分析灵敏度（分析灵敏度（ EP17-AEP17-A） 线性范围（线性范围（EP6-AEP6-A） 分析特异性分析特异性( (包括干扰物质）（包括干扰物质）（ EP7-PEP7-P） 第二节第二节 定性定性检测系统的性能验证检测系统的性能验证 一、验证的

3、内容一、验证的内容（掌握）（掌握）: : （1 1）敏感度敏感度 （2 2）特异度）特异度 (3) (3)正确度正确度 （4 4）符合率）符合率 （5 5）精密度）精密度 （6 6）CUTOFFCUTOFF值验证值验证 二、定性临床应用与分类二、定性临床应用与分类 1 1、定性测定的临床应用、定性测定的临床应用 免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物 核酸和基因检测核酸和基因检测 微生物检验微生物检验 细胞学检验细胞学检验 寄生虫检验验寄生虫检验验 2 2、定性实验的临床分类、定性实验的临床分类 筛查实验：如便潜血、筛查实验：如便潜血、TPTP 诊断实验：如微生物

4、学培养与细菌鉴定诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定 确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和 确认确认 （一）敏感性、特异性验证（一）敏感性、特异性验证: : 1 .1 .样本的临床诊断已知（敏感性、特异性）样本的临床诊断已知（敏感性、特异性） 室间质评材料室间质评材料 ( (卫生部卫生部) ) 厂商提供的已赋值的参考材料厂商提供的已赋值的参考材料 用参考方法或决定方法定值的材料（或用参考方法或决定方法定值的材料（或 金标准诊断的标本）。金标准诊断的标本）。 选取选取4040份（份（2020份）样本份）样本, ,最好阴阳性各半最好阴阳性各半 随机盲法

5、重新分号随机盲法重新分号 检测样本检测样本 将所有检测结果汇总填表将所有检测结果汇总填表 计算评价性能指标计算评价性能指标 临床诊断临床诊断 总计总计 阳性阳性阴性阴性 验证方法验证方法 阳性阳性A AB BA+BA+B 阴性阴性C CD DC+DC+D 总计总计A+CA+CB+DB+DN N 敏感度敏感度 = 100% = 100% A A/ /（A+CA+C） 特异性特异性 = 100% = 100% D D/ /（B+DB+D） 相关样本的患病率相关样本的患病率 = 100% = 100% （A+CA+C）/N/N 阳性结果预测值（阳性结果预测值（PVPPVP） = 100% = 100

6、% A A/ /（A+BA+B） 阴性结果预测值阴性结果预测值 （PVNPVN）= 100%= 100% D D/ /（C+DC+D） 方法效率（正确率）方法效率（正确率） = 100% = 100% （A+DA+D）/N/N 2 .2 .样本的临床诊断未知（符合性）样本的临床诊断未知（符合性） 同一项目不同检测方法或仪器的比对同一项目不同检测方法或仪器的比对 适用范围适用范围: :一个项目有两种以上的方法或者两台一个项目有两种以上的方法或者两台 以上的仪器以上的仪器( (包括同一型号的仪器包括同一型号的仪器) )同时检测同时检测, , 需要进行一致性比对需要进行一致性比对. . 选取选取40

7、40份（份（2020份）样本份）样本, ,最好阴阳性各半最好阴阳性各半 随机每随机每8 8（4 4）份分成一组）份分成一组 两种方法两种方法( (或两台仪器或两台仪器) )每天平行检测一组样本每天平行检测一组样本 将所有检测结果汇总将所有检测结果汇总 评价符合率评价符合率 对比方法对比方法 总计总计 阳性阳性阴性阴性 实验方法实验方法 阳性阳性a ab ba+ba+b 阴性阴性c cd dc+dc+d 总计总计a+ca+cb+db+dn n 阳性符合率阳性符合率 = 100% = 100% a a/(a+c)/(a+c) 阴性符合率阴性符合率 = 100% = 100% d d/(b+d)/(

8、b+d) 总符合率总符合率 = 100% = 100% = 100% = 100% ( ( ( (a+da+da+da+d)/n)/n)/n)/n 更换批号的简易比对：更换批号的简易比对： 新鲜患者血清阴性新鲜患者血清阴性2 2例，阳性例，阳性3 3例，阳性包含有例，阳性包含有 S/COS/CO高、中、低值，用新旧批号试剂检测。高、中、低值，用新旧批号试剂检测。 低值避开低值避开“灰区灰区” 夹心法：夹心法：S/COS/CO低值低值1.21.23 3 竞争法：竞争法：S/COS/CO低值低值0.40.40.60.6 判断标准：符合率为判断标准：符合率为100%100%为可接受。为可接受。 二二

9、. .精密度验证精密度验证: : 1.1.批内精密度批内精密度: :同一份样本在同一批次内平行重复检同一份样本在同一批次内平行重复检 测测2020次次. .然后计算均值然后计算均值,SD,SD和和CV.CV. 2.2.批间精密度批间精密度: :同一份样本连续检测同一份样本连续检测2020天天, ,每天平行每天平行 检测双孔检测双孔. .然后计算均值然后计算均值,SD,SD和和CV.CV. 注意注意:1.:1.用用S/COS/CO比值进行统计计算比值进行统计计算. . 2. 2.最好选择临界值最好选择临界值, ,或弱阳性样本或弱阳性样本. . 判断标准判断标准: ELISA: ELISA批内批内

10、CV CV 10%10%，批间，批间20%20% 室内质量控制存在问题 室间质量评价存在问题 （三）分析中质量控制的分类 检验科室内质控总结报告表（一） 月质控分析 仪器名称： 仪器编号： 表格编号： 项 目 质控 物批 号 数据 总个 数 失 控 个 数 均 值 标准 差 设 定 靶 值 CV % 均值 -靶 值 要求范围 填表人： 日 期：20 年 月 日 审核人： 日 期：20 年 月 日 注：要求；均值、标准差、CV%为3S数据的统计值。 （一）试剂方面 1.是否更换批号？ 配套试剂及辅助试剂，更换后是否重新定标 2.试剂是否过期？开瓶时间是否过长，试剂及辅助 试剂是否在有效期 3.保

11、存是否正确，冰箱温度变化，试剂是否变质 4.试剂是否放错位置？ 5.不同瓶、不同批试剂是否合并使用？ 质量控制工作失控分析思路 质量控制工作失控分析思路 （二）标准品及定标 1.是否更换批号，新批号的标准品设定值是否正确 2.标准品是否过期？开瓶时间是否过长，是否反复使用 3.标准品是否正确？（冰箱温度，标准品变质） 4.标准品与试剂是否配套？ 5.定标值（读数值）是否有明显变化？ 6.定标时间是否过长？（设定过长） （三）质控品 1.是否更换批号？若有更换，新批号质控品靶值是否 重新设立 2.质控品是否过期？开瓶时间是否过长或多次使用 3.保存是否正确？（冰箱温度，质控品变质） 4.质控品使用前处理是否正确？ （四）仪器及外部状况 1.近期仪器是否使用情况正常？ 2.近期是否进行了仪器的维护和保养？ 3.缓冲液和冲洗液是否正确配制？ 4.实验室温度、湿度是否在控，实验室用水是否符合 要求 5.电压是否有波动，是否使用UPS （五）员工及操作状况 1.近期操作员工是否有变更 2.操作员工是否按操作SOP进行操作？ 3.操作员工对关键的操作步骤是否掌握？ 重点：试剂、质控品、校准品、分 析仪 六、 室间质量评价问题室间质量评价问题 （三）实验室间和实验室内比对 实验室间比对 实验室间比对 实验室内比对 实验室内比对