体液免疫球蛋白测定.ppt

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1、关于体液免疫球蛋白测定现在学习的是第1页，共44页免疫球蛋白（免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）：是由浆细胞合成和）：是由浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。现在学习的是第2页，共44页重链性质，Ig分5类：IgG()、IgA()、IgM()、IgD()、IgE()轻链性质，Ig分2型：、Ig占血浆蛋白总量：20%检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病Ig含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L、 IgD、IgE：mg/L 体液 IgG、IgA、IgM：mg/L 现在学习的是第3页，共44页现在学习的是第4页，共44页现在学习的是第5页

2、，共44页第一节 血清IgG、IgA、IgM 测定现在学习的是第6页，共44页IgG的特性和功能 IgG于出生后3个月开始合成，是血清中含量最高的免疫球蛋白 IgG多为单体，半衰期约为23天，占血清免疫球蛋白总量的75%80% 大多数抗感染抗体与自身抗体均为IgG类 IgG是唯一能通过胎盘的抗体 有四个亚型（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）现在学习的是第7页，共44页现在学习的是第8页，共44页现在学习的是第9页，共44页IgM的特性和功能 为五聚体，是分子量最大的Ig，称巨球蛋白。 IgM激活补体能力比IgG强 天然血型抗体是IgM IgM是个体发育过程最早能产生的抗体，胚胎晚期已能

3、合成，新生儿脐带血中若IgM水平升高，表示该儿曾有宫内感染 IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，故检测IgM水平可用于传染病的早期诊断 有2个亚型（IgM1、IgM2）现在学习的是第10页，共44页IgA的特性和功能 分为血清型和分泌型两种，血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生。而分泌型IgA（SIgA）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有层中浆细胞产生。 主要存在于初乳、唾液、泪液，以及呼吸道消化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中。 分泌型IgA的合成和主要作用部位在黏膜 分2个亚型：（IgA1、IgA2）现在学习的是第11页，共44页现在学习的是第12页，共44页一、血清IgG、

4、IgA、IgM测定测定方法 单向环状免疫扩散法 免疫浊度法现在学习的是第13页，共44页 原理原理误差主要原因误差主要原因 评价评价 单向环状免疫扩散法现在学习的是第14页，共44页免疫浊度法 直接透射比浊法 速率散射比浊法 注意点 评价现在学习的是第15页，共44页二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义 年龄年龄 年龄与血中年龄与血中Ig含量有一定关系含量有一定关系 高高Ig血症血症: 多克隆多克隆Ig增高（感染）；增高（感染）； 单克隆单克隆Ig增高（免疫增殖病）增高（免疫增殖病） 低低Ig血症血症: 先天性低先天性低Ig血症（免疫缺陷病）；血症（免疫缺陷病）； 获得性低获得性低Ig

5、血症血症(蛋白丢失蛋白丢失).现在学习的是第16页，共44页第二节 血清IgD、IgE测定 正常人血清中IgD含量很低，半衰期2.8天。膜结合型IgD(mIgD)构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志。 未成熟B细胞仅表达mIgM 成熟B细胞表达mIgM和mIgD 活化的B细胞或记忆B细胞mIgD逐渐消失 现在学习的是第17页，共44页 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起I型超敏型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。反应；与机体抗寄生虫免疫

6、也可能有关。现在学习的是第18页，共44页一、 血清IgD测定及临床意义 测定方法： 放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 免疫比浊法 酶联免疫吸附法现在学习的是第19页，共44页 IgD：生物功能不详 增高：类风湿性关节炎、变态反应性疾病、 败血症、新生儿溶血病 降低：意义不大现在学习的是第20页，共44页二、 血清IgE测定及临床意义测定方法总IgE测定：放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 免疫比浊法 酶联免疫吸附法特异性IgE测定：免疫斑点法 酶联免疫吸附法现在学习的是第21页，共44页IgE临床意义： 增高：变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。 降低：意义不大现在学习的

7、是第22页，共44页第三节 尿液及脑脊液Ig测定 正常人尿液中的Ig含量甚微，当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。 生理情况下，Ig根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，IgG、IgA、IgM在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分发生改变。现在学习的是第23页，共44页现在学习的是第24页，共44页分子屏障：肾小球滤过屏障现在学习的是第25页，共44页电荷屏障：1上皮细胞 2基底膜 3内皮细胞 4被滤过物质现在学习的是第26页，共44页一、尿液Ig测定及临床意义尿液： 肾小球滤膜受损程

8、度：选择性蛋白尿指数（selective proteinuria index,SPI）标本：晨尿或随机尿SPI（尿IgG血清IgG）（尿TRF血清TRF）SPI0.1 选择性 微小病变型肾病SPI0.2 非选择性 膜性肾病、膜增殖性肾炎、肾病综合症 现在学习的是第27页，共44页 增高有临床意义：增高有临床意义：肾病、免疫增殖病肾病、免疫增殖病 可根据尿内可根据尿内Ig增高的类型帮助鉴别诊断肾增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类小球疾病的种类现在学习的是第28页，共44页二、脑脊液Ig测定及临床意义脑脊液： 血脑屏障受损程度：白蛋白商值白蛋白商值（ALB quotient，QALB）：QAL

9、B（AlbCSFAlbS）1000QALB9时，提示血脑屏障无明显受损 915 轻度受损 急慢性病毒感染、多发性硬化、神经梅毒、带状疱疹神经节炎、脑萎缩 1533 中度受损 急性神经疏螺旋体病、条件致病性脑膜炎、吉兰巴雷综合征 33100 重度受损 化脓性脑膜炎、单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等细菌感染性疾病 100 完全破裂 现在学习的是第29页，共44页区分鞘内免疫球蛋白来源：IgG生成指数和24hIgG合成率IgG生成指数QIgGQalb(QIgG=IgGCSF/IgGS,Qalb=AlbCSF/Albs)IgG合成率/24h=(IgGCSF-IgGS/541)-(AlbCSF-AlbS/

10、243) (IgGS/AlbS) 0.43500IgG生成指数和24hIgG合成升高时，表明CSF中的IgG主要有中枢神经系统鞘内合成，多见于多发性硬化症现在学习的是第30页，共44页第四节 血清IgG亚类测定及临床意义Ig亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降测定方法： 单向免疫扩散法 免疫比浊法（常用） 放射免疫分析法 酶联免疫吸附法现在学习的是第31页，共44页临床意义：临床意义：IgG亚类的含量随年龄的不同而变化亚类的含量随年龄的不同而变化IgG亚类缺陷可表现为：反复呼吸道感染、亚类缺陷可表现为：反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支扩以及哮喘腹泻、中耳炎、鼻窦

11、炎、支扩以及哮喘等等IgA缺乏症常伴有缺乏症常伴有IgG2缺陷，某些病毒感缺陷，某些病毒感染染IgG1、IgG2、IgG3下降显著下降显著IgG亚类异常增高主要见于亚类异常增高主要见于型变态反应型变态反应现在学习的是第32页，共44页第五节 M蛋白测定及临床意义 M蛋白： B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖产生的异常单克隆免疫球蛋白 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等 现在学习的是第33页，共44页M蛋白测定蛋白区带电泳：经典方法 计算蛋白含量和百分比免疫比浊法： 免疫球蛋白定量 准确性高、快速免疫电泳： M蛋白分型免疫固定电泳： M蛋白分型及鉴定，分辨 率

12、高现在学习的是第34页，共44页GAMIgG-型M蛋白Marker 免疫固定电泳模式图现在学习的是第35页，共44页第六节 轻链测定及临床意义本周蛋白的检测 样本：尿液 方法：免疫电泳、加热沉淀（简便易行）Ig和-Ig定量检测 样本：尿液、血液 方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速）应用：M蛋白血症的分型及鉴定现在学习的是第36页，共44页第七节 冷球蛋白的检测冷球蛋白： 在低温下发生沉淀，加温后又复溶的免疫球蛋白 在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确 多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源 性的，也可以是内源性的现在学习的是第37页，共44页冷球蛋白的类型及临床意义 I型：

13、为单克隆冷球蛋白型，占25%40%;最常见为IgG或IgM。多见于免疫增生性疾病 型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占15%25%;最常见的组合为IgMIgG。多见于自身免疫性疾病 型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50% ;最常见的组合为IgMIgG。多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病 现在学习的是第38页，共44页标本：在体温条件下采集和保存静脉血4ml，不加抗凝剂检测：静脉血 水浴 离心 冰箱37370-412h沉淀24h内，单克隆冷球蛋白数天后出现为混合型冷球蛋白验证：将冷沉淀物置于pH4.0的0.1M乙酸钠缓冲液 加热35d现在学习的是第39页，共44页重点肾小球滤过膜破坏程度、血脑屏障

14、受损程血脑屏障受损程度评价指标度评价指标冷球蛋白检测冷球蛋白检测现在学习的是第40页，共44页1.1.免疫应答主要分为哪几个阶段？免疫应答主要分为哪几个阶段？2.2.什么是免疫球蛋白什么是免疫球蛋白? ?其分子基本结构其分子基本结构? ?3.3.免疫球蛋白分类及亚类免疫球蛋白分类及亚类? ?4.4.血清免疫球蛋白测定方法有哪些血清免疫球蛋白测定方法有哪些? ?5.5.比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。6.6.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定有何临床意义？测定有何临床意义？思考题现在学习的是第41页，共44页7.7

15、.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG亚类测定有何临床意义？亚类测定有何临床意义？8.8.单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？9.9.如何保证速率散射比浊法测定结果准确？如何保证速率散射比浊法测定结果准确？10.10.如何评估肾小球滤过膜破坏程度？如何评估肾小球滤过膜破坏程度？11.11.如何判定血脑屏障受损程度？如何判定血脑屏障受损程度？12.12.如何正确选择测定如何正确选择测定M M蛋白的实验项目蛋白的实验项目? ?现在学习的是第42页，共44页选择题1.巨球蛋白血症患者血清中哪种免疫球蛋白量增加（）A.IgGB.IgMC.IgAD.IgDE.IgE现在学习的是第43页，共44页感谢大家观看现在学习的是第44页，共44页