细胞划痕实验(2页).doc

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1、-细胞划痕实验-第 2 页细胞划痕实验一、 实验原理细胞划痕（wound healing）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。二、 实验步骤1、 所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。2、 1）先用

2、marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。2）在空中加入约5105个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满），37培养箱培养。3）第二天用10l枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜。4）用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。5）放入37 5% CO2培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。三、注意事项1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（2%），否则细胞增殖就不能忽略。（也可用丝裂酶处理一小时）3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。