细胞周期和凋亡实验(2页).doc

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-细胞周期和凋亡实验-第 2 页细胞周期实验（1）收集对数生长期细胞：弃除旧培养基，用PBS洗涤细胞加入适量胰酶进行消化。加入新鲜的培养基吹打细胞，并将细胞收集于标记好的对应离心管中，室温1000 rpm离心5 min，弃除上清液。（2）洗涤细胞：用预冷的PBS重悬上述细胞沉淀，室温1000 rpm 离心5 min，将上清液弃除。（3）固定细胞：将细胞用0.5 ml 预冷的PBS 溶液重悬，加入预冷的70%乙醇溶液在4C固定过夜。（4）PI 染色细胞：加入10l RNase（10mg/ml），置37 、5% CO2、饱和湿度恒温培养箱孵育30min，运用冰浴终止RNase A 酶作用；再加入10l溴化乙锭（PI，1mg/ml）染色，置37 、5% CO2、饱和湿度恒温培养箱孵育30min。（5）流式细胞仪检测，分析PI 荧光的直方图。细胞凋亡检测用%胰酶消化收集细胞，PBS洗涤2次，加入100l Binding Buffer和10l FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)，室温避光30min，再加入PI（50g/ml）5l，避光反应5min后，加入400l Binding Buffer。在1h内完成上机定量检测。