2022年沉降菌测试方法 .docx
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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 沉降菌测试方法1、把 90mm 15mm 硼硅酸玻璃培育皿包在报纸里,放入恒温烤箱中加热至 180后,干烤 2 小时;2、取 X 克培育基放入 X 克蒸馏水,放入高压消毒锅中加热溶化, 冷至 45时,在无菌操作要求下将培育基注入培育皿,每皿约 15ml;3、待琼脂凝固后,将培育基平皿倒置于 33恒温培育箱中培育 48 小时,假设培育基平皿上确无菌落生长,即可采样用;制备好培育皿宜在 28环境中储存;4、采样时,一般在 100 级层流罩中放置 3 个培育皿,在 100000 级,10000级按面积大小一般放 2 个培育皿;打开培育皿盖,使培育基外
2、表暴露 0.5 小时,再将培育皿盖上后倒置于恒温培育箱331.5m 左右;5、将培育皿举起用肉眼直接计数,用记号笔点记然后用 510 倍放大镜检 查是否遗漏,假设培育皿上有 2 个或 2 个以上菌落重叠,辨论时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数,不要漏计培育皿边缘生长菌落,并留意细菌菌落与培育基沉 淀物区分;6、沉降菌测试前, 被测洁净室已消毒; 被测洁净室温湿度须到达规定要求,静压差、换气次数、空气流速必需掌握在规定值内,测试状态有静态和动态两 种,测试状态挑选须符合生产要求,并在报告中注明测试状态;7、测试人员必需穿戴符合环境洁净度级别工作服,静态测试时,室内测试人员不得多于2 人;测试时
3、间对单向流100 级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开头,对非单向流, 100000 级以上净名师归纳总结 化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开头;第 1 页,共 20 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 8、平均菌落数运算: M1+M2+M3平均菌落数 =M1M2Mn.nn培育皿总数 M 11 号培育皿菌落数 M 22 号培育皿菌落数 M nn 号培育皿菌落数 用平均菌落数判定洁净空气中微生物;洁净室内平均菌落数必需低于所选 定的评定标准,100 级1 个;10000级 3 个;100000
4、级10 个;假设某洁 净室内平均菌落数超过标准,就必需对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均须合格;人员进出洁净生产区的一般程序:进换脱洗穿工手气或吹洁出鞋外手洁作消闸空淋净套净服毒室气室生单旁门产区向通人员进出无菌操作洁净生产区程序:进换脱脱洗穿手穿换手气气无洁脸闸吹菌净出鞋外内无消无无消手室淋操生套衣菌毒菌菌毒腕或室作产内外鞋空区衣衣无菌医疗器具洁净室环境要求及监测:名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 监测项目技术指标监测方法监测频次温度100 级10000 级100000 级300000 级1 次/班
5、18 28相对湿度 % 4565 1 次/班水平层流风速 m/s 0.4 JC 1 次/月垂直层流换气次数20 15 12 1次/ 月静压差 Pa 不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间5 次/ 月洁净室与室外大气10 1沉降菌数1 3 10 15 GB/T16294-1996 1次/ 周附录 C资料性附录洁净室区沉降菌技术要求洁净室区沉降菌技术要求洁净度澳大利亚 TGA 欧盟 EU CGMP 美国 FDA 药品生产质量治理CGMP 附录 l CGMP 标准2002 年 8 月 16 日 2022 年 2 月 2004 年 9 月 1998 修订级别 90mm 90mm 90mm1 CFU/4h
6、aCFU/4haCFU/4ha100 A 级1A 级11 - B 级5 B 级5 3 1000 级- 10000 C 级50 C 级50 5 3 100000 D 级100 D 级100 50 10 为培育皿暴露时间不超过4h,以平均菌落数表示;名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 无菌检查法试验步骤无菌检查在洁净度 100 级单向流空气区域内进行,其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染;1、器具灭菌:培育皿假设干个报纸所好中置电热干燥箱内 180,2 小时;、试管、剪刀、镊子等装入盒2、硫乙醇酸盐流体培育基细菌,
7、依据试验实际用量取假设干培育基和 蒸馏水,煮沸,摇匀,分装至相宜的容器中,瓶塞封口,灭菌;硫乙醇酸盐流 体培育基置 33培育 48 小时,应无菌生长;改进马丁培育基真菌 ,依据试验实际用量取假设干培育基和蒸馏水,煮沸,摇匀,分装,灭菌;改进马丁培育基置24培育 72 小时,应无菌生长;养分琼脂依据实际用量按一皿装 15ml,分装几个皿来运算,灭菌;0.9%氯化钠分装至 7 支试管,封口,灭菌;3、把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下,放入0.9%氯化钠试管中摇匀,作10 倍系列稀释至 10-7,然后从 10-5、10-6、10-7 试管各抽取 1ml,分别放入标号 5#、6#、7#培育皿里,倒入养分
8、琼脂摇匀, 养分琼脂不能太烫,以不烫手为准待养分琼脂冷却后倒置放入33培育箱中培育 48 小时,48 小时中取出观看计数,名师归纳总结 依据菌落数小于100cfu 来打算用几号;第 4 页,共 20 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 4、操作时,应用适当的消毒液对供试品外表或外包装擦拭消毒后,以无菌方法取内容物;取供试品3 只接种于足以浸没供试品的适量培育基中;一只瓣膜接种于硫乙醇酸盐流体培育基中,轻轻摇动,使瓣膜与培育基混合,1 支试管接种金黄色葡萄球菌对比用菌液 1ml, 作阳性对比, 1 支作空白对比;另取 2 只瓣膜接种于改进马丁培育基中,2
9、 支试管作空白对比; 硫乙醇酸盐流体培育基置33培育,改进马丁置 24培育阳性对比管培育 48 小时后应有菌生长;5、结果判定:在培育期间应逐日观看并记录是否有菌生长;培育 14 天后,假设供试品管匀澄清,判供试品符合规定;假设供试品管中任何一管显浑浊并有菌生长,判供试品不符合规定;名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 细菌内毒素试验步骤:1、预备工作:移液管: 0.1ml1 支,1ml10 支 试管: 10ml 4 支,试管架 2 个大小烧杯 40ml2 个,锥形瓶 2 个 试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内
10、毒素,玻璃器皿置电热干燥箱内 180干烤至少 2 小时;细菌内毒素检查水 10ml 4 支细菌内毒素工作标准品 1 支,每安瓿含内毒素 10EU 8 支 同一批号 3 支瓣膜浸提介质:细菌内毒素检查水 浸提介质体积运算公式: V=L=8.6 ml 3=25.8 ml名师归纳总结 - - - - - - -把细菌内毒素检查水4 支外表擦净打开,倒入烧杯中,用移液管取25.8ml倒入装 3 只瓣膜烧杯中, 用锡纸封口, 放进提前打开升温至37恒温培育箱中,培育 1.5 小时;供试液贮存应不超过2 小时;第 6 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 注: V-浸提介质体积
11、,单位为毫升mlL- 产品细菌内毒素限值,单位为细菌内毒素单位每毫升EV/ml - 所用鲎试剂灵敏度标示值,单位为细菌内毒素单位每毫升EV/ml2、细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查水 混匀 15 分钟;1ml 溶解,在旋涡混合器上用移液管取 0.1ml 工作标准品和 0.9ml 检查水在旋涡混匀器上混匀 30 秒钟;用移液管从第 1 管中取 0.5ml 混合液和 0.5ml 检查水在旋涡混匀器上混匀 30 秒钟;阳性对比溶液用移液管取 0.1ml 工作标准品和 0.9ml 供试液在旋涡混匀器上混匀 30 秒钟;用移液管从第 3 管中取 0.5ml 混合液和 0.5ml 供试液在旋涡混匀器上
12、混匀 30 秒钟;供试品阳性对比溶液3、把 8 支鲎试剂外表擦净全部打开放进试管架中,每支各加入 0.1ml 细菌内毒素检查水,在旋涡器上混匀,其中2 支作供试品管, 2 支作阴性对比管, 2支作阳性对比管, 2 支作供试品阳性对比管;每支供试品管加入 0.1ml 供试液;阴性对比管加入 0.1ml 检查用水;阴性对比管加入 0.1ml 阳性对比溶液;供试品阳性对比管加入 0.1ml 供试品阳性对照溶液;封闭管口,轻轻摇匀,垂直放入 37 1恒温器中孵育 60 2 分钟,然后取出观看结果,试管在孵育期间应防止任何振动;4、结果判定:将试管从水浴箱中轻轻取出,慢慢倒转 180 假设管内形成凝胶,
13、并且凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性,未形成凝胶或形成凝胶不名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 坚实,变形并从管壁滑脱者为阴性 ;阴性对比管均为阴性,阳性对比管,供试品阳性对比管均为阳性,试验有效,否就无效;假设阴性对比管为阳性,说明鲎试剂或检查水或试验器具受污染;假设阳性对比管为阴性,说明鲎试剂 或标准内毒素已失效,或鲎试剂灵敏度及标准内毒素效价标示不精确或标准内 毒素稀释有误;供试品阳性对比管为阴性,说明反应体系内有抑制反应干扰因 素存在;一、氯化物 1、配制标准溶液: 0.1mol/L 硝酸银溶液;称取 1.6
14、987g 分析纯硝酸银,定溶至 中,避光储存,贴标签;100ml 容量瓶中,转入棕色试剂瓶2、取样,量取 50ml 样品水平行样 2 份倒入试管中,加 5 滴硝酸,再加入 1ml 硝酸银;均不得发生浑浊;二、硫酸盐1、配制标准溶液:称取5 0.5g 氯化钡分析纯,定溶至 100ml 容量瓶,倒入试剂瓶,贴标签; 假如浑浊,把蒸馏水烧开,放凉再用2、分析:取样 50ml 平行样 2 份倒入试管中,加 2ml 氯化钡溶液,不得发生浑浊;三、钙盐1、配制标准溶液:称取分析纯草酸铵3.5g ,定溶至 100ml 容量瓶,贴标签;2、分析:取样50ml 公平样 2 份,倒入试管中,加2ml 草酸铵溶液,
15、均不得发生浑浊;名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 20 页精选学习资料 - - - - - - - - - 四、二氧化碳1、配制标准溶液:称取分析纯氢氧化钙0.3g ,定溶至 100ml 容量瓶,用橡皮塞塞紧,用力振摇,放置 1 小时,用时取清液;2、分析:取样 25ml 公平样 2 份倒入带盖的试管中,加 25ml 氢氧化钙 溶液,放置 1 小时,振摇, 1 小时内不得发生浑浊;五、易氧化物1、配制标准溶液:高锰酸钾溶液:取3.3 克高锰酸钾,加水1050ml,煮沸 15 分钟,加水到 1000ml,密塞后静置 2 天以上,用微孔玻璃漏斗过滤, 摇匀,标定其浓度;稀硫酸
16、:取分析纯硫酸98%57ml,留意烧杯里放蒸馏水,沿杯壁缓慢倒入硫酸 57ml,定溶至 1000ml,放凉再用2、标定:取在 105干燥至恒重的基准草酸钠约 0.2 克,精密称定,加新沸过冷水 250ml 与硫酸 10ml 搅拌使溶解, 自滴定管中快速加入本液约 25ml,待褪色后,加热到 65,连续滴定至溶液显微红色并保持30 秒钟不褪;当滴定终了时,溶液温度应不低于 55相当于 6.70mg草酸钠,依据本液消耗量与草酸 钠取用量,算出本液浓度,即得;贮藏:置玻璃塞棕色玻璃瓶中,密闭储存;3、分析:取样 100ml 平行样 2 份加稀硫酸 10ml,煮沸后,加高锰酸钾 滴定液 0.02M0.
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