动物细胞培养和核移植技术 (5).ppt
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1、关于动物细胞培养和核移植技术 (5)现在学习的是第1页,共29页2.2 动物细胞工程动物细胞工程单克隆抗体等等 动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的是其他动物细胞工程技术的基础基础。现在学习的是第2页,共29页1.1.动物细胞培养动物细胞培养如何进行细胞培养?培养时又需要提供哪些必要条件呢?2.2.12.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。和增殖。1
2、.1概念概念阅读课文阅读课文44-46面相关内容:面相关内容: 注意关键词: 细胞贴壁细胞贴壁 接触抑制接触抑制 原代培养原代培养 传代培养传代培养现在学习的是第3页,共29页动物细胞培养的过程动物细胞培养的过程: :原代现在学习的是第4页,共29页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散细胞,说明细胞细胞,说明细胞间的物质主要是间的物质主要是蛋白质蛋白质。动物细。动物细胞培养适宜的胞培养适宜的PH为为7.27.4,此,此环境
3、下胃蛋白酶环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,)没有活性,而胰蛋白酶而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。比老比老龄动龄动物的组织物的组织细胞增殖细胞增殖能力强,能力强,有丝分裂有丝分裂旺盛。旺盛。分分化程度越化程度越低,增殖低,增殖能力越强,能力越强,越容易培越容易培养。养。动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体细胞增殖细胞增殖缓慢,核缓慢,核型可能变型可能变化化贴壁生长接触抑制10代以内,保持正常二倍体核型代以内,保持正常二倍体核型传代培养原理?:原理?:细胞增殖细胞增殖现在学习的是第5页,共29页 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你多细胞
4、动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:所学的内环境的知识,思考以下问题: 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?体外培养细胞时需要提供哪些物质? 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?体外培养的细胞需要什么样的环境条件? 讨讨 论论葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子和葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子和动物血清动物血清等。等。适宜温度、适宜温度、 PH和气体环境;和气体环境; 无菌无毒环境无菌无毒环境36.5 +0.5度PH为7.2-7.4O2和和CO2(95%空气和空气和5% CO2 )现在学习的是第6页,共29页现在学习的是第7页,共29
5、页培养器皿动物细胞培养瓶内表面为什么动物细胞培养瓶内表面为什么要光滑、无毒?要光滑、无毒?现在学习的是第8页,共29页获得细胞获得细胞细胞的全能性细胞的全能性细胞或细胞产品细胞或细胞产品新的个体或细胞产品新的个体或细胞产品培养结果培养结果或细胞产物或细胞产物快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清促生促生长因子长因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原原 理理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细
6、胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较现在学习的是第9页,共29页 大规模的生产有重要价值的生物制品大规模的生产有重要价值的生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体为基因工程技术提供受体细胞为基因工程技术提供受体细胞 有毒物质的检测有毒物质的检测细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物等,为治疗和预如用于筛选抗癌药物等,为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据防癌症及其他疾病提供依据动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植现在学习的是第10页,共29页 动物细胞特点:动
7、物细胞特点: 分化潜能变窄分化潜能变窄:随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄,这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性细胞核仍具有全能性:细胞核,它含有保持物种遗传性所需的全套基因,而且并没有因细胞分化而丢失基因,因此高度分化细胞的细胞核仍具有细胞核仍具有全能性。全能性。比较植物组织培养和动物细胞培养(原理、培养结果)比较植物组织培养和动物细胞培养(原理、培养结果) ?现在学习的是第11页,共29页2.2.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育
8、成为一个新的胚胎,这个新的胚胎细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为最终发育为动物个体动物个体(克隆动物)(克隆动物)分分类类胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植:体细胞核移植体细胞核移植:细胞分化程度低,恢复全能性容易细胞分化程度低,恢复全能性容易 细胞分化程度高,恢复全能性不容易细胞分化程度高,恢复全能性不容易2.1 动物细胞核移植概念:动物细胞核移植概念:现在学习的是第12页,共29页卵黄膜2.2体细胞核移植的过程:体细胞核移植的过程:请看教材请看教材P48图图2-21思考:思考:1.核移植的受体细胞是什么?处核移植的受体细胞是什么?处在什么时期?在什么时期?2.通过什么
9、手段激活受体细胞,通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎?构建重组胚胎? M M中期卵母细胞中期卵母细胞诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细胞分裂和发育进程。胞分裂和发育进程。3.原理:原理:4.为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞?为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞?细胞核的全能性细胞核的全能性卵母细胞体积大、易操作,含有促使细胞核表达全能性的物卵母细胞体积大、易操作,含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。质和营养条件。现在学习的是第13页,共29页例.在克隆多利羊的过程中,下列哪项技术没有运用到( )A.细胞培养技术B.细胞核移
10、植C.胚胎移植技术D.基因工程技术D现在学习的是第14页,共29页供体细胞(供核)供体细胞(供核)细胞培养细胞培养体细胞体细胞卵巢卵母细胞(卵巢卵母细胞(M中期:供质)中期:供质)去核去核无核卵母细胞无核卵母细胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞构建重组胚胎构建重组胚胎胚胎移植胚胎移植代孕母体代孕母体生出与供体奶牛遗传基础生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛相同的犊牛归纳归纳: 共分成两大阶段:共分成两大阶段:核移植核移植和和胚胎移植。胚胎移植。你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了胞供体动物进行了100%的复
11、制吗?为什么?的复制吗?为什么?绝大部分绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。是来自于受体卵母细胞。克隆动物的性别取决于?思考:思考:现在学习的是第15页,共29页讨论:讨论:1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核?为什么必须先去掉受体卵母细胞的核? 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞重要利用价值的动物提供的体细胞,在供体细胞的,在
12、供体细胞的细胞核移至受体细胞之前,必须将受体细胞的遗传细胞核移至受体细胞之前,必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。物质去掉或将其破坏。现在学习的是第16页,共29页 培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至1050代左代左右时,部分细胞核型可能会发生变化,其细胞右时,部分细胞核型可能会发生变化,其细胞遗传物质可能会发生突变,而遗传物质可能会发生突变,而10代以内的细代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型胞一般能保持正常的二倍体核型。因此,在体。因此,在体细胞核移植中,为了保证供体细胞正常的遗传基细胞核移植中,为了保证供体细胞正常的遗传基础,通常采用传代础,通常采用传代10代以内
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