化学发光免疫分析技术 (2).ppt
《化学发光免疫分析技术 (2).ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《化学发光免疫分析技术 (2).ppt(82页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、关于化学发光免疫分析技术 (2)现在学习的是第1页,共82页一、一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术的概念二、二、化学发光免疫分析基本原理化学发光免疫分析基本原理三、化学发光免疫分析的类型三、化学发光免疫分析的类型四、临床应用四、临床应用五、发展与展望五、发展与展望现在学习的是第2页,共82页一、化学发光免疫技术的概念 化学发光免疫技术化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合,
2、用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或定性检测。,进行抗原或抗体的定量或定性检测。 现在学习的是第3页,共82页化学发光免疫分析化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA) 是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简
3、单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛,已占各种免疫分析的首位,是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。 现在学习的是第4页,共82页 是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面的体外诊断实验中。现在学习的是第5页,共82页化学发光免疫分析的优势灵敏度高灵敏度高灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性,其灵敏度可达 10-22
4、mol/L ( RIA 为 10 -12 mol/L )。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。发光强度在 4 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度( OD 值)为 2.0 的范围相比,优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。 现在学习的是第6页,共82页宽的线性动力学范围宽的线性动力学范围 光信号持续时间长光信号持续时间长辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步
5、模式现在学习的是第7页,共82页分析方法简便快速分析方法简便快速结果稳定、误差小结果稳定、误差小样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。 安全性好及使用期长安全性好及使用期长免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现其危害性;试剂稳定,保存期可达一年。 现在学习的是第8页,共82页二、化学发光免疫分析基本原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。然后进行对标记物进行检测, 来测定待
6、检物。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器光量子产率。现在学习的是第9页,共82页化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物(HRP)加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中,血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后,加入鲁米诺Luminol发光底液 ,利用化学反应释放的自由能激发中间体,从基态回到激发态,能量以光子的形式释放。此时,
7、将微孔板置入分析仪内,通过仪器内部的三维传动系统,依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后,打印数据报告,以辅助临床诊断。现在学习的是第10页,共82页三、化学发光免疫分析的类型 化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。现在学习的是第11页,共82页 用吖啶酯直接标记抗体用吖啶酯直接标记抗体( (抗原抗原) ),与待测标本中相应的,与待测标本中相应的抗原抗原( (抗体抗体) )发生免疫反应后,形成固相包被抗体发生免疫反应后,形成固相包被抗体- -待测抗待测抗原原
8、- -吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加入氧化剂(吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加入氧化剂(H H2 2O O2 2)和)和NaOHNaOH使成碱性环境,吖啶酯在不需要催化剂的情况下使成碱性环境,吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光分解、发光 。 由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能,由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能,这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准曲线上计算出待测这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。抗原的含量。3.1 3.1 直接化学发光免疫分析直接化学发光免疫分析现在学习的是第12页,共82页发光发光Y
9、 YY YY Y磁微粒磁微粒被测抗原被测抗原+抗体抗体+带吖啶酯带吖啶酯标记物抗标记物抗体体Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y冲洗后冲洗后(1 1)加入加入H H2 2O O2 2(pH10)直接化学发光的机理直接化学发光的机理现在学习的是第13页,共82页磁磁微粒微粒模式图模式图Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y Y YY Y Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y特点特点 抗原和抗体结抗原和抗体结合与未合与未结合部分结合部分的的易易分
10、离分离磁微粒磁微粒技术技术现在学习的是第14页,共82页 化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(化物酶(HRP)或碱性磷酸酶或碱性磷酸酶(ALP)(ALP)来标记抗原或抗体,在与待测标来标记抗原或抗体,在与待测标本中相应的抗原本中相应的抗原( (抗体抗体) )发生免疫反应后,形成固相包被抗体发生免疫反应后,形成固相包被抗体- -待测抗原待测抗原- -酶标记抗体复合物,经洗涤后,加入底物酶标记抗体复合物,经洗涤后,加入
11、底物( (发光剂发光剂) ),酶催化和分解底,酶催化和分解底物发光,由光量子阅读系统接收,光电倍增管将光信号转变为电信号并物发光,由光量子阅读系统接收,光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大,再把它们传送至计算机数据处理系统,计算出测定物的浓度加以放大,再把它们传送至计算机数据处理系统,计算出测定物的浓度。3.23.2、化学发光酶免疫分析、化学发光酶免疫分析现在学习的是第15页,共82页该分析系统采用辣根过氧化物酶(该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标记)标记抗体抗体(或抗原或抗原),在与反应体系中的待测标本和固相,在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后,形成固相包被抗体载体发
12、生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗待测抗原原-酶(酶(HRP)标记抗体复合物,这时加入鲁米诺)标记抗体复合物,这时加入鲁米诺发光剂、发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光和化学发光增强剂使产生化学发光。 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析现在学习的是第16页,共82页辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 现在学习的是第17页,共82页该分析系统以碱性磷酸酶该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体标记抗体(或抗原或抗原),在,在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫
13、反应后,形成固相包被抗体后,形成固相包被抗体-待测抗原待测抗原-酶标记抗体复合酶标记抗体复合物,这时加入物,这时加入AMPPD发光剂,碱性磷酸酶使发光剂,碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。脱去磷酸根基团而发光。 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析现在学习的是第18页,共82页碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 现在学习的是第19页,共82页分配样品分配样品,磁颗粒磁颗粒和试剂和试剂孵育孵育使反应物使反应物结合结合在磁场中在磁场中清洗去除清洗去除未结合物质未结合物质加入加入底物底物产生产生信号信号孵育孵育,促使信号促使
14、信号的产生的产生信号信号检测检测现在学习的是第20页,共82页电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)是以电化学发光剂三联吡啶钌标记是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体抗体( (抗原抗原) ),以三丙胺,以三丙胺(TPA)(TPA)为电子供体,为电子供体, 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应,它包括电化学和化学发光两个过程。反应,它包括电化学和化学发光两个过程。 3.3 3.3 电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析现在学习的是第21页,共82页在电化学发光免疫分
15、析系统中,磁性微粒为固相载体包被抗体在电化学发光免疫分析系统中,磁性微粒为固相载体包被抗体( (抗抗原原) ),用三联吡啶钌标记抗体,用三联吡啶钌标记抗体( (抗原抗原) ),在反应体系内待测标本与相应的,在反应体系内待测标本与相应的抗原抗原 ( (抗体抗体) )发生免疫反应后,形成磁性微粒包被抗体发生免疫反应后,形成磁性微粒包被抗体- -待测抗原待测抗原- -三联吡三联吡啶钌标记抗体复合物,这时将上述复合物吸入流动室,同时引人啶钌标记抗体复合物,这时将上述复合物吸入流动室,同时引人TPATPA缓冲缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时,被安装在电极下面的电磁铁吸液。当磁性微粒流经电极表面时,被安装
16、在电极下面的电磁铁吸引住,而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极引住,而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压,启动电化学发光反应,使三联吡啶钌和加压,启动电化学发光反应,使三联吡啶钌和TPATPA在电极表面进行在电极表面进行电子转移,产生电化学发光,光的强度与待测抗原的浓度成正比电子转移,产生电化学发光,光的强度与待测抗原的浓度成正比。现在学习的是第22页,共82页电化学发光免疫分析示意图电化学发光免疫分析示意图现在学习的是第23页,共82页电化学发光免疫测定示意图电化学发光免疫测定示意图现在学习的是第24页,共82页标记磁颗粒在电场中发光工作示意图标记磁颗粒在电场
17、中发光工作示意图现在学习的是第25页,共82页 目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统主要以化学化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权,它的酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一,其核心性能达到了国际同类产品先进水平。现在学习的是第26页,共82页该机采用高灵敏全球主流化学发光技术的CL-2000i 分析系统,拥有业内领先的高效处理能力,可实现240T/H检测;智能优化的测试流程,专利逻辑设计,提升测试通量,瀑布式真空气吸清洗技术降样本携带干扰至最低,涵盖甲状腺功能、激素、肿瘤标志物、传染病等50多个检测项目。目前我科开展肿瘤标
18、志物,甲状腺功能检测,生殖内分泌激素检查肿瘤标志物,甲状腺功能检测,生殖内分泌激素检查项目,后续依临床需要酌情开展新的项目,更好的服务临床,服务患者现在学习的是第27页,共82页 四、临床应用四、临床应用 1.1.甲状腺激素甲状腺激素 2.2.生殖激素生殖激素 3.3.肾上腺肾上腺/ /垂体激素垂体激素 4.4.贫血因子贫血因子 5.5.肿瘤标记物肿瘤标记物 6.6.感染性疾病感染性疾病 7.7.糖尿病糖尿病 8.8.心血管系统心血管系统 9.9.病毒标记物病毒标记物 10.10.骨代谢骨代谢 11.11.过敏性疾病过敏性疾病 12.12.治疗药物监测治疗药物监测 现在学习的是第28页,共82
19、页甲状腺功能检测项目及临床意义 甲功五项是T3、T4、FT3、FT4和TSH的总称,它与甲状腺功能有密切关系,是诊断甲亢、甲减的重要依据 。检测甲状腺激素在甲亢和甲减病人的诊断中已得到广泛应用,并成为判断疗效、监测复发的重要手段 现在学习的是第29页,共82页甲状腺素(T4)甲状腺素(T4)是由甲状腺合成、分泌的激素,在调节机体代谢中起着重要作用,被分泌到血液循环中的T4能对垂体的促甲状腺激素(TSH)的调节起反应;下丘脑、甲状腺、垂体所组成负反馈机制对T4的分泌起着调节作用。在血循环中,T4约60%与甲状腺结合球蛋白(thyroxine-binding globulin,TBG)结合,30%
20、与甲状腺激素转运蛋白(Transthyretin,TBPA)结合,其余约10%与白蛋白结合,仅0.03%-0.04%为游离状态游离的T4有活性,而结合的T4无活性,主要起备用作用。现在学习的是第30页,共82页参考范围:5.014.5ug/dl(CENTAUR)临床意义:T4升高:见于甲状腺功能亢进的病人,但轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化未如T3明显; 凡引起TBG升高的因素均可使T4升高,如妊娠、应用雌激素、葡萄胎、淋巴瘤、血卟啉病等;药物如胺碘酮、含碘造影剂、受体阻断剂、奋乃近、海洛因等T4降低: 见于甲状腺功能减退的病人,轻型甲减、亚临床甲减的变化较T3明显; 缺碘性甲状腺肿可见T
21、4降低或在正常低限,而T3正常; 肾病综合征、肝功能衰竭、遗传性TBG缺陷症、肢端肥大症、重症全身性疾病状态等;以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥英钠等药物现在学习的是第31页,共82页血清中的三碘甲状腺原氨酸(T3)血清中的三碘甲状腺原氨酸(T3),仅20%由甲状腺直接分泌而来,80%以上在外周组织通过T4脱碘而来。血液循环中的T3能对垂体的促甲状腺激素(TSH)的调节起反应,下丘脑、垂体、甲状腺所组成负反馈机制对T3的分泌起着调节作用。在血循环中,约99.5%的T3与TBG结合,但T3与TBG的亲和力明显低于T4;T3不与TBPA结合未结合的T3有活性;而结合的T3无活性,主要起备
22、用作用。现在学习的是第32页,共82页参考范围:0.581.62 ug/dL临床意义:T3升高:见于甲状腺功能亢进的病人,轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化较T4明显,适合轻型甲亢、早期甲亢和亚临床甲亢以及甲亢治疗后复发的诊断;T3型甲亢仅有T3和FT3升高; 与T4一样,T3亦受TBG变化影响,但受影响程度不及T4。T3降低: 仅于较重甲状腺功能减退的病人,T3和T4均下降,轻型甲减T3不一定下降; 重症全身性疾病状态或慢性病变可导致T3下降,多见于慢性肾功能不全、慢性心功能不全、糖尿病、心梗等疾病的患者。现在学习的是第33页,共82页游离甲状腺素(游离甲状腺素(FT4)游离三碘甲状腺原氨
23、酸()游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)FT3和FT4分别为T3和T4在血清中未与蛋白结合的部分,其不受血清中TBG的影响,直接反映甲状腺功能的状态,其敏感性和特异性均高于T3和T4参考范围: FT3:2.34.0pg/mL FT4:0.61.2ng/dL现在学习的是第34页,共82页临床意义:血清FT3和FT4升高:甲亢;低T3综合征,由于5脱碘酶受抑制,T4外周脱碘作用障碍使FT4升高;甲状腺素不敏感综合征, FT3和FT4升高,而无甲亢表现;某些药物,胺碘酮、肝素等可使FT4升高;FT3适合于甲亢和左旋甲状腺素治疗中药物是否过量的判断。血清FT3和FT4降低: 甲减病人两者皆下降,但轻型甲减
24、、甲减初期多以FT4下降为主;低T3综合征仅有FT3下降; 某些药物,如苯妥英钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。现在学习的是第35页,共82页T3、T4均升高:均升高:高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。T4升高,升高,T3正常或下降:正常或下降:家族性白蛋白异常性高T4血症;胰高血糖素瘤;药物普萘洛尔、胺碘酮、胆囊造影剂;全身性疾病、精神性疾病;苯丙胺成瘾;T4型甲亢、甲亢伴T4转换T3障碍。T4正常,正常,T3升高:升高:T3型甲亢;甲减用T3或者其他甲状腺激素制剂替代治疗后T4正常,正常,T3下降:下降:患有全身性疾病时;5单脱碘酶活性下降;血皮质醇升高的各种情况;
25、营养不良综合征。T4下降、下降、T3升高:升高:医源性甲亢;甲状腺功能正常病人服用甲状腺激素制剂。T4下降,下降,T3正常:正常:轻至中度甲减;碘缺乏;苯妥英钠、卡马西平。T3和和T4均下降:均下降:中至重度甲减;重症全身性疾病;低TBG血症;大剂量使用水杨酸制剂现在学习的是第36页,共82页促甲状腺激素(促甲状腺激素(TSH)促甲状腺激素是由、两亚单位非共价结合而成的糖蛋白,亚单位与LH、FSH的亚单位相似;而亚单位与上述垂体糖蛋白的相应部分完全不同,有自已独特的生化及免疫特性;TSH主要由垂体合成,主要针对FT3、FT4的负反馈起反应;下丘脑三肽、促甲状腺激素释放激素(TRH)都可直接刺激
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 化学发光免疫分析技术 2 化学 发光 免疫 分析 技术
限制150内