艾滋病实验室检查.ppt

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1、1,艾滋病 (AIDS),2,实 验 室 检 查,3,免疫学检测,流式细胞仪测定,4,血清学检测（）,HIV抗体的初筛试验ELISA（酶联免疫试验）,5,血清学检测（）,HIV抗体的确证试验Western blot （免疫印迹试验）,6,血清学检测（）,HIV抗原检测ELISA夹心法,测定p24抗原 敏感性很高（710 pg/ml） 特异性稍差（可有假阳性）,7,分子生物学检测（1）,HIV RNA检测RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）,PCR：高温变性(94)低温退火(55)适温延伸(72)；经2530个循环，成倍数扩增 荧光定量PCR：比常规PCR多一个寡聚核苷酸探针（带一个荧光发光分子

2、和一个荧光淬灭分子） 应用：PCR查PBMCs前病毒DNA；RT-PCR查血浆中的病毒RNA,8,分子生物学检测（2）,淋巴细胞HIV RNA检测 Northern印迹杂交(Northern blot),原理： RNA片段经电泳分离，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜，再用探针杂交,9,分子生物学检测（3）,HIV变异株检测Sanger测序法,原理：核酸扩增时，核苷酸在某一固定点开始，随机在某一特定的碱基处终止，产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸，通过在尿素变性的PAGE胶上电泳，获得DNA序列,10,病毒检测,血浆、单核细胞、脑脊液可分离出HIV 操作复杂，主要用于科研,11,诊 断,1

3、2,诊断原则,流行病学史：有静脉注射毒品史；多个性伴和不洁性生活史；输入未经HIV抗体检测的血液和血制品史；HIV抗体阳性所生的子女；其它（如职业暴露或医源性感染史）。 临床表现： 高危对象出现上感样及单核细胞增多症样表现， 颈、腋及枕部淋巴结肿大，肝脾肿大，可考虑急性HIV感染。 无症状期、艾滋病期临床表现。 实验室检查：HIV抗体阳性，并经确证试验确认。CD4+T淋巴细胞数明显减少。HIV RNA和P24抗原的检测有助于早期诊断新生儿的HIV感染。,13,诊断标准,急性期 流行病学史、临床表现、HIV抗体由阴性转为阳性 仅实验室检查HIV抗体由阴性转为阳性 无症状期 流行病学史、HIV抗体

4、阳性 仅实验室检查HIV抗体阳性,14,诊断标准,艾滋病期 流行病学史，HIV抗体阳性，临床表现有下列一项或以上： 1.短期（6个月内）体重下降10以上；2.咳嗽或腹泻超过4周；3.持续或间歇发热超过4周；4.全身淋巴结肿大；5.反复带状疱疹或慢性播散性HSV感染；6.口咽念珠菌病；7.全身搔痒性皮炎；8.反复发生的败血症；9.深部真菌感染，马尔尼非青霉菌；10.肺孢子虫肺炎；11.活动性巨细胞病毒感染；12.弓形虫脑病。13.反复发生、难治性肺部感染或进展迅速的活动性结核病；14.中枢神经系统受损、占位性病变或中、青年痴呆症；15.卡波西肉瘤或淋巴瘤。,15,诊断标准,HIV抗体阳性 CD4

5、+T淋巴细胞数200/mm3 无上述表现或症状,16,鉴别诊断,原发性CD4+淋巴细胞减少症 无HIV感染流行病学资料，HIV-1和HIV-2病原学检测阴性。 继发性CD4+淋巴细胞减少 肿瘤和自生免疫性疾病（autoimmune disease）化疗或免疫抑制治疗后。,17,预 后,18,影响预后的因素,感染的HIV型别及亚型： HIV-1较HIV-2临床进展快 并发的机会性感染： 同时合并卡波济肉瘤及肺孢菌肺炎者病死率最高；合并丙型肝炎者预后差 抗逆转录病毒治疗： 治疗改变了艾滋病进程,19,HIV感染未治疗者的结局,典型 (70%80%)：510年进展为艾滋病 快速进展型(10%15%)：23年 长期无进展型 (500/mm3，病毒载量103拷贝/ml 长期存活型 (极少)：进展到艾滋病期后能稳定较长一段时间,