动物检疫技术.ppt
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1、动物检疫技术1现在学习的是第1页,共39页第五章第五章 动物检验检疫技术动物检验检疫技术第一节第一节 检验检疫样品检验检疫样品第二节第二节 细菌分离及鉴定细菌分离及鉴定第三节第三节 病毒分离及鉴定病毒分离及鉴定第四节第四节 其他病毒微生物分离及鉴定其他病毒微生物分离及鉴定第五节第五节 寄生虫检查寄生虫检查第六节第六节 现代生物技术在动物检验检疫中的应用现代生物技术在动物检验检疫中的应用2现在学习的是第2页,共39页第一节第一节 检验检疫样品检验检疫样品一、病料采集和运送一、病料采集和运送 1、在采取病料前必须对被检动物可能患有何种疫病作出初步诊断; 2、采取病料所用的容器、手术器械均应灭菌后才
2、能使用,采样时应无菌操作; 3、解剖前检查(只有在确定不是炭疽后,方可剖解); 4、取材时间要早(死后6h内); 5、应根据不同的疫病相应的采取脏器或内容物;若无法估计是某种疫病,可全面的采取。(脓汁、血液、皮肤、骨头、脑、脊髓等)3现在学习的是第3页,共39页二、病料的保存二、病料的保存(一)细菌检验材料的保存(一)细菌检验材料的保存 脏器组织块脏器组织块保存于饱和氯化钠溶液或保存于饱和氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐甘油缓冲盐溶液中溶液中容器加塞封固。容器加塞封固。 液体液体装地封闭的毛细玻管或试管运送。装地封闭的毛细玻管或试管运送。 生前由直肠中采集的粪团生前由直肠中采集的粪团装入灭菌容器中
3、寄送。装入灭菌容器中寄送。(二)病毒检验材料的保存(二)病毒检验材料的保存 脏器组织块脏器组织块保存于保存于50%甘油缓冲盐溶液或鸡蛋生理盐甘油缓冲盐溶液或鸡蛋生理盐水中水中容器加塞封固。容器加塞封固。(三)病理组织学检验材料的保存(三)病理组织学检验材料的保存 脏器组织块脏器组织块放入放入10%福尔马林溶液或福尔马林溶液或95%酒精中固定酒精中固定,固定液用量应为病料的,固定液用量应为病料的10倍。倍。4现在学习的是第4页,共39页三、病料的记录、包装和运送方法三、病料的记录、包装和运送方法(一)送检单(一)送检单 填写3份,一份存根,两份寄送检验室;待检查完毕后退回1份。(二)病料的包装和
4、运送(二)病料的包装和运送 液体病料液体病料(如黏液、渗出液、尿及胆汁等)装入细玻璃管中(管口用火焰封闭)再用废纸或棉花包囊装入较大的试管中再装入木盒中运送。 组织块或脏器组织块或脏器5现在学习的是第5页,共39页第二节第二节 细菌分离及鉴定细菌分离及鉴定 细菌分离及鉴定是用人工的方法使细菌在细菌分离及鉴定是用人工的方法使细菌在适当的环境和营养基质中生长繁殖,获取适当的环境和营养基质中生长繁殖,获取纯种、进行鉴定与研究等。纯种、进行鉴定与研究等。 为达到细菌分离及鉴定的目的,运用为达到细菌分离及鉴定的目的,运用 无菌技术无菌技术 提供适当的培养基提供适当的培养基 适宜的培养方法和条件适宜的培养
5、方法和条件6现在学习的是第6页,共39页六、六、细菌的分离接种细菌的分离接种 平板划线接种法平板划线接种法 斜面接种法斜面接种法 倾注培养法倾注培养法 穿刺培养法穿刺培养法 半固体培养法半固体培养法 液体培养法液体培养法 平板涂布培养法平板涂布培养法七、细菌的培养方法七、细菌的培养方法 需氧培养法需氧培养法 二氧化碳培养法(二氧化碳培养法(CO2孵箱法、烛缸法、化学法)孵箱法、烛缸法、化学法) 厌氧培养法(厌氧罐培养法、培养箱法)厌氧培养法(厌氧罐培养法、培养箱法)7现在学习的是第7页,共39页八、细菌的鉴定(一)(一)细菌的生长现象观察8现在学习的是第8页,共39页细菌的一些培养特征有小刺在
6、琼脂穿刺培养中的生长绒毛状假根状树状念珠状有小刺念珠状假根状树状扩展状丝状丝状在琼脂划线培养上的生长量杯状漏斗状囊状层状萝卜状在明胶穿刺培养中的生长絮状环状膜状肉汤表面生长浮膜状9现在学习的是第9页,共39页(二)、细菌基本形态及特殊结构的观察细菌基本形态及特殊结构的观察 细菌基本形态的观察细菌基本形态的观察 细菌基本形态:球状、杆状和螺旋状。细菌基本形态:球状、杆状和螺旋状。 细菌基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。细菌基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。 细菌特殊结构:鞭毛、芽孢、荚膜等。细菌特殊结构:鞭毛、芽孢、荚膜等。 均需染色方可在显微镜下观察,染色方法有:均需染色方可在显微
7、镜下观察,染色方法有: 简单染色法简单染色法:只用一种染料进行染色。:只用一种染料进行染色。 复杂染色法复杂染色法: 革兰氏染色法革兰氏染色法 抗酸染色法(抗酸菌呈红色,非抗酸菌呈蓝色)抗酸染色法(抗酸菌呈红色,非抗酸菌呈蓝色) 瑞特氏染色法(细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色)瑞特氏染色法(细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色) 姬姆萨氏染色法(细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色)姬姆萨氏染色法(细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色)10现在学习的是第10页,共39页细菌特殊形态的观察11现在学习的是第11页,共39页(三)生化试验细菌的生化试验是继形态学鉴定之后,又一重要鉴别依细菌的生化试验是继形态学鉴定之后,又一重要鉴别依
8、据。据。 糖类分解试验糖类分解试验 吲哚(靛基质)试验吲哚(靛基质)试验 淀粉水解试验淀粉水解试验 V-P试验试验 甲基红(甲基红(M.R)试验)试验 柠檬酸盐利用试验柠檬酸盐利用试验 凝固血清紫牛乳试验凝固血清紫牛乳试验 硫化氢试验硫化氢试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 尿素酶试验尿素酶试验12现在学习的是第12页,共39页(四)、细菌抗原检测及血清型鉴定(四)、细菌抗原检测及血清型鉴定 细菌抗原结构比较复杂,有存在于细胞壁的菌体抗原(细菌抗原结构比较复杂,有存在于细胞壁的菌体抗原(O抗原,抗原,有运动性的细菌在菌体抗原之外还有鞭毛抗原(有运动性的细菌在菌体抗原之外还有鞭毛抗原(H抗原),
9、抗原),具有不同种、型特异性。具有不同种、型特异性。 血清型鉴定血清型鉴定 首先首先要求鉴定的细菌必须纯净、新鲜,在适宜条件下培养要求鉴定的细菌必须纯净、新鲜,在适宜条件下培养,尽量减少伟代,以防发生变异。,尽量减少伟代,以防发生变异。 其次其次有特异性强和效价高的已知标准血清(包括单克有特异性强和效价高的已知标准血清(包括单克隆抗体)和标准菌株。隆抗体)和标准菌株。(五)、细菌遗传物质检测(五)、细菌遗传物质检测 目前比较成熟的遗传物质检测包括基因探针技术和目前比较成熟的遗传物质检测包括基因探针技术和PCR技技术术 13现在学习的是第13页,共39页(六)、细菌毒力测定(六)、细菌毒力测定
10、表示细菌毒力大小的单位有:表示细菌毒力大小的单位有: 最小致死量(最小致死量(MLD):能使特定的动物感染后:能使特定的动物感染后,在一定时限内发生的最少活的细菌量或毒素,在一定时限内发生的最少活的细菌量或毒素量。量。 半致死量(半致死量(LD50):):在一定的时限内能使半数在一定的时限内能使半数实验动物感染后发生死亡所需的活的细菌或毒实验动物感染后发生死亡所需的活的细菌或毒素量。素量。14现在学习的是第14页,共39页第三节第三节 病毒分离及鉴定病毒分离及鉴定 检材的采集与送检、病料的处理标本采取的原则:标本采取的原则:1. 病毒标本的采取应尽早为好病毒标本的采取应尽早为好.2.由于大多数
11、病毒对热不稳定,应该立即接种,由于大多数病毒对热不稳定,应该立即接种,如果不能及时接种或需保存,一般置如果不能及时接种或需保存,一般置50甘油甘油盐水盐水4或一或一20以下保存。以下保存。15现在学习的是第15页,共39页三、病毒的分离培养一、动物接种培养一、动物接种培养二、病毒的鸡胚培养二、病毒的鸡胚培养三、病毒的细胞培养三、病毒的细胞培养16现在学习的是第16页,共39页一、动物接种培养一、动物接种培养 动物接种动物接种是最原始的病毒培养方法。主要用于目前无法用是最原始的病毒培养方法。主要用于目前无法用细胞、鸡胚培养的病毒。细胞、鸡胚培养的病毒。 常用的动物有小白鼠、大白鼠、田鼠、豚鼠、常
12、用的动物有小白鼠、大白鼠、田鼠、豚鼠、 家兔,家兔,有时也用猴、猿、猩猩等。接种时要根据病毒对动物,有时也用猴、猿、猩猩等。接种时要根据病毒对动物,组织细胞等嗜性不同而选组织细胞等嗜性不同而选 择特定的部位,如鼻腔、皮择特定的部位,如鼻腔、皮内、皮下、腹腔、脑内、静脉等。内、皮下、腹腔、脑内、静脉等。 小白鼠脑内接种法小白鼠脑内接种法【材料】【材料】 1.脑炎病毒(小白鼠脑脊髓炎)悬液:脑组织先用无菌生理盐脑炎病毒(小白鼠脑脊髓炎)悬液:脑组织先用无菌生理盐水洗去血液,再加水洗去血液,再加100脱脂奶水研磨成脱脂奶水研磨成10毫升悬液,离心毫升悬液,离心沉淀沉淀30分钟,吸取上清液。分钟,吸取
13、上清液。 2.小白鼠:小白鼠:3周龄,体重周龄,体重68克。克。 17现在学习的是第17页,共39页【方法】【方法】 1 11 1毫升注射器抽取脑炎病毒悬液毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.10.1毫升,去除注射器内毫升,去除注射器内的气泡。的气泡。2 2取出小白鼠,左手将小白鼠固定,固定时用大拇指和食指握取出小白鼠,左手将小白鼠固定,固定时用大拇指和食指握住小白鼠的头部,左手掌轻轻按住小白鼠的体部。住小白鼠的头部,左手掌轻轻按住小白鼠的体部。3 3右手以棉签蘸以碘酒,消毒小白鼠的右颊部皮毛右手以棉签蘸以碘酒,消毒小白鼠的右颊部皮毛4 4右手拿住注射器在小白鼠眼与耳根连线的中点略偏耳右手拿住注射器
14、在小白鼠眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向注入,进入颅腔,进针朵的方向注入,进入颅腔,进针2 23 3毫米,不要插得太毫米,不要插得太深,注射量为深,注射量为0.020.020.030.03毫升。毫升。5 5注射完毕,将用过的注射器煮沸消毒,动物一般在注射完毕,将用过的注射器煮沸消毒,动物一般在3 34 4天开始发病,食欲减退,活动迟纯、耸毛、振颤、慢慢发天开始发病,食欲减退,活动迟纯、耸毛、振颤、慢慢发展为麻痹瘫痪而死亡。展为麻痹瘫痪而死亡。18现在学习的是第18页,共39页 二、二、病毒的鸡胚培养病毒的鸡胚培养19现在学习的是第19页,共39页三、三、病毒的细胞培养病毒的细胞培养 通过机械解
15、离或消化等通过机械解离或消化等方法将组织或细胞从机方法将组织或细胞从机体取出,分散成单个细体取出,分散成单个细胞,给予必要的生长条胞,给予必要的生长条件,模拟体内生长环境件,模拟体内生长环境,使其在体外能继续生,使其在体外能继续生长繁殖,称为长繁殖,称为细胞培养细胞培养。病毒的细胞培养步骤:病毒的细胞培养步骤: 病料处理病料处理 病毒分离、繁殖病毒分离、繁殖 细胞病变(细胞病变(CPE)观察)观察20现在学习的是第20页,共39页四、分离病毒的鉴定四、分离病毒的鉴定 (一)病毒形态与结构的观察(一)病毒形态与结构的观察 (二)病毒核酸类型的测定(二)病毒核酸类型的测定 (三)病毒对几种类脂的敏
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