常用免疫学检查.ppt

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1、关于常用免疫学检查现在学习的是第1页，共39页 基本概念 免疫免疫 免疫是指机体接触免疫是指机体接触“抗原性异物抗原性异物”或或“异己成分异己成分”的一种特异性生理反应，其作用是识别的一种特异性生理反应，其作用是识别和排除抗原性异物，和排除抗原性异物，以此维持机体的生理平衡。这以此维持机体的生理平衡。这些维持机体稳定性的反应，通常对机体是有利的：但些维持机体稳定性的反应，通常对机体是有利的：但在某些条件下也可以是有害的。在某些条件下也可以是有害的。现在学习的是第2页，共39页现代免疫学认为：以下几种生理功能：n (1)免疫防御免疫防御；指机体排斥外源性抗原异物的能力。这是动物藉以自净、不受外来

2、物质干扰和保持物种纯洁的生理机制。n (2)免疫自稳免疫自稳；指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，这是机体藉以维持正常内环境稳定的重要生理机制。这种自身稳定功能失调时易导致某些生理平衡的紊乱或者自身免疫病。n (3)免疫监视免疫监视：指机体杀伤和清除异常突变细胞的能力，机体藉以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。一旦功能低下，宿主易患恶性肿瘤。现在学习的是第3页，共39页 免疫学检验免疫学检验 免疫学检验又称检验免疫学，是研究免疫学技术及其在医学领域中的一门应用学科 免疫学检验的检测对象是具有免疫活性的物质，内容包括检测方法和临床意义 免疫学检验可分为细胞免疫检验和体液免疫检验两大类。利

3、用抗原抗体反应来测定标本中微量物质的方法称为免疫测定。免疫测定具有高度的特异性和敏感性免疫测定具有高度的特异性和敏感性现在学习的是第4页，共39页淋巴细胞标志和功能检测 人体内的淋巴细胞可分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的三群细胞分若干亚群，各有其特异的表面标志和功能，据此建立相应许多相应的检测方法现在学习的是第5页，共39页T细胞表面标志物的检测1特异性抗原检测 用单克隆抗体检测用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有细胞表面抗原的方法有两大类两大类，一类是用标记抗体着染，另一类用抗体致敏的红细胞作花环试验。2特异性受体的检测原理 T细胞表面有特异性绵羊红细胞(E)受体，当人的T细胞与绵

4、羊红细胞悬液按一定比例混合后，置4C至少2小时或过夜，T细胞表面的E受钵可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花样的花环，称为活性E(Ea)花环。检测Ea花环形成细胞可反映受检者的细胞免疫水平。现在学习的是第6页，共39页B细胞表面标志物的检测 B细胞表面抗原检测原理 B细胞表面的CD19、CD20、CD21CD22和CD29等分化抗原，有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，因而可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法，酶免疫组化或ABC法加以检测。现在学习的是第7页，共39页 肿瘤标志物肿瘤标志物 肿瘤标志物可被定义为作为肿瘤细胞合成和释放的生物性物肿瘤标志物可被定义为作为肿瘤细胞合

5、成和释放的生物性物质或由宿主响应肿瘤组织而产生的物质。质或由宿主响应肿瘤组织而产生的物质。肿瘤标志物分类大致有两种:其一按肿瘤标志物的来源，第二个肿瘤标志物本身的化学特性。按后者的分类主要包括:肿瘤胚胎性抗原标志物肿瘤胚胎性抗原标志物;糖类标志物糖类标志物;酶类标志物酶类标志物;激素类标志物激素类标志物;蛋白质类标志物蛋白质类标志物;基因标志物。基因标志物。现在学习的是第8页，共39页 一种理想的肿瘤标志物应具有满足分析的和临床的需要两方面的特性.临床的需要临床的需要对疾病的高灵敏度高灵敏度(没有假阴性结果，能检测微转移)对疾病的高特异性高特异性(没有假阳性结果，在无病个体中阴性)水平应反映出

6、肿瘤的大小在病情稳定的患者中水平应保持相对地恒定并且没有波动在完全缓解的患者中应该检测不到或是低的在病情稳定的患者中应能预测结果 现在学习的是第9页，共39页 常见的肿瘤标志物及其应用评价 肿瘤胚胎性抗原胚胎性抗原标志物(1)癌胚抗原癌胚抗原(CEA):CEA是由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前6个月内CEA含量最高，出生后血清中含量已很低下，健康成年人血清中CEA浓度小于25ug/L。在临床上，当当CEA大于大于6Oug/L时，可见于结肠癌时，可见于结肠癌、胃癌和肺癌。(2)甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP):妊娠的妇女的血和尿中AFP含量会持续增高，从妊娠6周开始合成，至121

7、5周达高峰。胎儿血浆中的AFP值可达到3mg/ml，出生后，AFP合成很快受抑制，其含量降至5Oug/L，周岁末婴儿的浓度接近成人水平，一般健康成人血浆AFP浓度低于25ug/L。AFP是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于5OOug/L以上，或含或含量有不断增高者，更应高度警惕。量有不断增高者，更应高度警惕。肝癌患者血清AFP含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性。分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于200ug/L。现在学习的是第10页，共39页 糖类抗原标志物糖类抗原标志物 糖类抗原标志物，肿瘤标志物相关物质是指由

8、肿瘤细胞表面的抗原物质或者是肿糖类抗原标志物，肿瘤标志物相关物质是指由肿瘤细胞表面的抗原物质或者是肿瘤细胞所分泌的物质，这类物质又是单克隆抗体，故又称为糖类抗原瘤细胞所分泌的物质，这类物质又是单克隆抗体，故又称为糖类抗原(CA)。n(l)CAl25:CAl25是上皮性卵巢癌卵巢癌和子宫内膜癌的标志物，浆液性子宫内膜样癌、未分化卵巢癌患者的CAl25含量可明显升高。n(2)CAl5-3:正常健康者血清CAl5-3含量(RIA法)小于28kM/L。30%50%乳腺癌乳腺癌患者的CAl5-3明显升高，肺癌、胃肠癌、卵巢癌及宫颈癌患者的血清CAl5-3也可升高，应予以鉴别。n(3)CAl9-9:正常人

9、群的CAl9-9血清含量为(RIA法)216KM/L。Cal9-9是胰腺癌胰腺癌和结、直肠癌的标志物。如胰腺炎和黄疽，Cal9-9浓度也可增高，但往往呈一过性，必须加以鉴别。现在学习的是第11页，共39页 酶类标志物酶类标志物 前列腺特异性抗原前列腺特异性抗原(PSA)PSA是前列腺癌的特异性标志物，目前少数器官特异是前列腺癌的特异性标志物，目前少数器官特异性肿瘤标志物之一。性肿瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的主要囊性肿瘤，前列腺癌的诊断特异性达诊断特异性达90%97%。血清PSA除了作为检测和早期发现前列腺癌，还可用于治疗后的监控，90%术后患者的血清PSA值可降至不能检出的痕量水平。

10、若术后血清PSA值升高，放疗后疗效显著者，50%以上患者在2个月内血清PSA降至正常。现在学习的是第12页，共39页现在学习的是第13页，共39页现在学习的是第14页，共39页现在学习的是第15页，共39页现在学习的是第16页，共39页现在学习的是第17页，共39页现在学习的是第18页，共39页现在学习的是第19页，共39页 自身免疫疾病的检测自身免疫疾病的检测(一)自身免疫 当某种原因使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成分产生免疫应答这种现象称为自身免疫(二)自身免疫性病的概念及特征 健康个体的正常免疫调节功能会将自身耐受和自身免疫协调在一个相辅相成的合理水平上当某种原因使自身免疫

11、应答过分强烈时，也会导致相应的自身组织，器官损伤或功能障碍，这种病理状态称为自身免疫病(AID)，包括三个基本特征：1患者血液中可以检出高滴度的自身抗体和(或)与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞2患者组织器官的病理特征为免疫炎症，并且损伤范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对应。3动物中可复制出相似的疾病模型，并能通过血清或淋巴细胞使疾病在同系动物同系动物中转移。现在学习的是第20页，共39页 类风湿因子类风湿因子(RF)RF是抗变性是抗变性IgG的自身抗体，主要为的自身抗体，主要为IgM，也可见，也可见IgG及及IgA，可与人或动物的变性，可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常结

12、合，而不与正常IgG发生凝发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者集，最多见于类风湿性关节炎患者 RF在类风湿性关节炎患者中的检出率很高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，如对年轻女性应进行RA和风湿热间的鉴别；而对非活动期RA的诊断，需参考病史。但RF也象ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。在SLE患者约有50RF阳性，在混合性结缔组织病如ss、硬皮病、慢性活动性肝炎以及老年人中均可有不同程度的阳性率 现在学习的是第21页，共39页 病毒性肝炎血清标志物检测 病毒性肝炎主要有5型，即甲型(HA)、乙型(HB)、丙型(HC)、丁型(HD)和戊型(HE)，它们分别由肝炎病毒甲型(HAv)、乙型乙

13、型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)和戊型(HEV)所引起。HDV是一种缺损性病毒依附HBv而存在和复制。现知还有己型和庚型肝炎。现在学习的是第22页，共39页甲型肝炎病毒标志物甲型肝炎病毒标志物nRNA病毒，粪-口传播n检测指标：抗HAV抗体（保护性抗体）HAVAg（粪）HAV-RNA现在学习的是第23页，共39页 临床意义临床意义 HAVAg阳性：见于70.687.5的甲肝患者。HAVAg于发病前于发病前 二周可从粪中排出二周可从粪中排出，其发病第一周粪便的阳性率为42.9，1-2周为18.3，2周后消失；HAV-RNA阳性：对诊断具有特异性，特别对早期诊断意义更大。甲型肝炎病毒抗

14、体测定 机体感染HAV后，可产生lgM、lgA和lgG抗体。HAV-lgM是病毒衣蛋白抗体，HAVIgA是肠道粘膜分泌的局部抗体，HAVIgG病愈后可长期存在。抗HAVIgM阳性：据观察，甲肝患者抗HAVIgM的阳性率，在发病后2周为100，1个月为76.5，3个月为23.5，6个月为5.9，12个月时可为阴性。所以，抗AVigM阳性说明机体正在感染HAV，它是早期诊断甲肝的特异性指标；抗 HAVIgA阳性：甲肝早期和急性期，由粪便中测得抗HAV IgA呈阳性反应，是早期诊断甲肝的指标之一；抗HAVIgG阳性：提示既往感染，可作为流行病学调查的指标。现在学习的是第24页，共39页乙型肝炎病毒乙

15、型肝炎病毒（HBV)的实验室诊断的实验室诊断 HBV为乙型肝炎的病原体，归类于Hepadna病毒科(1981年Robinson提倡的新病毒科)，为一直径42nm的球形颗粒，病毒核酸由两条不完全的环状DNA组成，有3200个碱基对。HBV外层为一厚约外层为一厚约7 n m的 包 膜，称 为 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原的 包 膜，称 为 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原(HBsAg)，内层的抗原称为乙型肝炎核心抗原，内层的抗原称为乙型肝炎核心抗原(HbcAg)和乙型肝炎和乙型肝炎e抗原抗原(HBeAg)，两者组成，两者组成HBV的核心部分，的核心部分，HBeAg是HBcAg的一部分被切断后由14

16、9个氨基酸组成的多肤。核心内部还包含有双股DNA和DNA聚合酶见下图。现在学习的是第25页，共39页Laboratory Diagnosis乙肝乙肝“两对半两对半”及临床意义 nHBsAg、抗抗HBsnHBeAg、抗抗HBen 抗抗HBcHBcAg、乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitis B Virus core antigen，HBcAg)存在于Dane颗粒的核心部位，是一种核心蛋白，其外面被乙型肝炎表面抗原所包裹，所以一般情况下血清中不易检测到游离的所以一般情况下血清中不易检测到游离的HBcAg。临床意义 HBcAg 阳性，提示病人血清中有感染性的HBV存在,表示复制活跃，传染性强，预后

17、较差。约有78的阳性病例病情恶化。现在学习的是第26页，共39页1.乙肝五项标志物的临床意义：1）HBsAg阳性 可见于急性乙肝的潜伏期、急性 期、慢性期、无症状HBsAg携带者、部分肝 硬化和肝癌的血清中及受HBV感染的肝细胞 胞浆中，是乙肝的感染指标之一。2）Anti-HBs是特异性抗体，能中和体液中的 HBV，可见于乙肝恢复期，HBV既往感染者 和乙肝疫苗免疫后,反映机体对HBV具有保 护性免疫力，Anti-HBs的效价与保护作用 呈平行关系。现在学习的是第27页，共39页3）HbeAg在乙肝潜伏期的后期出现，略晚于 HBsAg,HBeAg存在于HBsAg阳性的血清中，其中大多数伴有血中

18、Dane颗粒、HBVDNA、DNA多聚酶阳性，具有很强的传染性，有 助于确定乙肝.无症状乙肝病毒携带者及 妊妇的传染性强弱,HBeAg阳性表示HBV在 体内复制。现在学习的是第28页，共39页 其传染性较弱，HBeAg消失前后出现Anti-HBe，即由复制期转为非复制期，预示HBV繁殖中止或减弱，疾病可向好的方面转化，但有部分乙肝病人HBeAg转阴是HBV基因突变所致，故血中仍有HBV颗粒，所以,在乙肝中Anti-HBe不能作为HBV 复制停止的绝对指标，Anti-HBe可存在于无症状携带者及无活动性肝病患者中，若Anti-HBe存在于慢活肝患者中，则肝病有可能继续发展，并逐步变成肝硬化。4）

19、Anti-HBe阳性者现在学习的是第29页，共39页5）Anti-HBc是乙肝病毒核心总抗体 感染乙肝病毒后最早出现的抗体是IgM型核心抗体（Anti-HBc IgM）,它是乙肝急性或近期感染的重要指标.在慢活肝（活动期)也可能呈阳性,核心抗体不是中和抗体,Anti-HBc IgG可持续多年不消退,是既往受过HBV感染的血清学指标。现在学习的是第30页，共39页 HBV HBV抗原抗体系统检测临床意义抗原抗体系统检测临床意义HBsAgHBeAg抗-HBe抗-HBc抗-HBs临床意义IgMIgG+-感染或无症状携带者感染或无症状携带者+-+-（大三阳）（大三阳）（有（有传染）传染）+-+-（大三

20、阳）（大三阳）（有传染）（有传染）+-+-（小三阳）（小三阳）-+-+恢复期（传染性低）恢复期（传染性低）-+既往感染或接种疫苗既往感染或接种疫苗-未感染，无免疫力未感染，无免疫力现在学习的是第31页，共39页乙型肝炎病毒DNA测定 乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)呈双股环形,是HBV的基因物质，也也是乙型肝炎的直接诊断证据。是乙型肝炎的直接诊断证据。参考值 HBVDNA斑点杂交试验和聚合酶链反应(PCR)为阴性。临床意义 HBV-DNA阳性是诊断乙型肝炎的佐证，表明HBV复制及有传染性。菌素也用于监测应用HBsAg疫苗后垂直传播的阻断效果，若HBVDNA阳性表明疫苗阻断效果不佳。现在学习

21、的是第32页，共39页现在学习的是第33页，共39页丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物 RNA病毒，血液传播 标志物检测：HCV-IgG（无保护性）HCV-RNA 临床意义 丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)阳性提示HCV复制活跃，传染性强；HCV-RNA转阴提示HCV复制受抑，预后较好。丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCVIgG)阳性表明已有HCV感染。输血后肝炎有8090的患者抗-HCVIgG阳性。经常接受血制品(血浆、全血)治疗的患者可以合并HCV的感染，易使病变转为慢性、肝硬化或肝癌。现在学习的是第34页，共39页丁型肝炎病毒标志物丁型肝炎病毒标志物 依赖依赖HBV衣壳的衣壳的RNA病

22、毒病毒 HDV抗体必须与抗体必须与HBsAg同时阳性同时阳性临床意义 丁型肝炎病毒RNA(HDVRNA)阳性可明确诊断为丁型肝炎与与HBV重叠感染的患者易迅速发展成肝硬化或肝癌。重叠感染的患者易迅速发展成肝硬化或肝癌。现在学习的是第35页，共39页戊型肝炎病毒标志物戊型肝炎病毒标志物nRNA病毒，粪-口传播n检测HEV抗体现在学习的是第36页，共39页 庚型肝炎病毒标志物检测 庚型肝炎病毒(hepatitis G Virus，HGV)侵人人体后，机体可产生相应的抗体(抗-HGV)。参考值)RIA和ELISA法均为阴性。临床意义 抗-HGV阳性表示曾感染过HGV，多见于输血后肝炎或使用血液制品引起HGV合并HCV感染的患者。现在学习的是第37页，共39页现在学习的是第38页，共39页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第39页，共39页