分解纤维素的微生物的分离课件.ppt

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1、关于分解纤维素的微生物的分离现在学习的是第1页，共35页 纤维素纤维素，一种由，一种由葡萄糖葡萄糖首尾相连首尾相连而成的而成的高分子高分子化合物，是地球上含量化合物，是地球上含量最丰富的最丰富的多糖多糖类物质。类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉棉花花是自然界中纤维素是自然界中纤维素含量最高含量最高的天然产物。的天然产物。植物每年产生的植物每年产生的纤维素纤维素超过超过7070亿吨，其中亿吨，其中40%-60%40%-60%能被能被土壤中土壤中某些微生物分解利用某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生，这是因为它们能够产生纤维素

2、酶纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人类能够对这些微生物的研究与应用，使人类能够利用秸秆等废利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。等。如何分离土壤中分解纤维素的微生物呢？其消化道内，其消化道内，共生共生有有分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物，能，能产生产生纤维素酶纤维素酶而分解纤而分解纤维素。维素。人没有分解纤维素的能力 植食性动物是怎样消化食物中纤维素的？现在学习的是第2页，共35页纤维素与纤维素酶1.1.纤维素纤维素:多糖多糖(高分子化合物高分子化合物)基本单位基本单位:葡萄糖葡萄糖一、基础知识 土壤中某些土壤中某些微生物微生物能够产

3、生能够产生纤维素酶纤维素酶,把把纤维素分解为纤维素分解为葡萄糖葡萄糖，然后再利用。，然后再利用。许多许多商品纤维素商品纤维素都是由都是由天然纤维素天然纤维素制得的，如制得的，如水溶性的水溶性的羟甲基纤维素钠羟甲基纤维素钠（CMC-Na）、不溶于）、不溶于水的微晶纤维素（水的微晶纤维素（AvicelAvicel）等。）等。现在学习的是第3页，共35页 纤维素酶纤维素酶是一种是一种复合酶，一般认为它，一般认为它至少包括至少包括三种组分三种组分，即，即C C1 1酶酶(外切酶外切酶)、C CX X酶酶(内切酶内切酶)和葡萄糖和葡萄糖苷酶苷酶，前两种酶使，前两种酶使纤维素纤维素分解成分解成纤维二糖纤维

4、二糖，第三种，第三种酶将酶将纤维二糖纤维二糖分解成分解成葡萄糖葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素 2.2.纤维素酶纤维素酶（1)1)组成：组成：（2)2)作用：作用：一种复合酶：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶现在学习的是第4页，共35页取二支取二支20mL20mL的试管。的试管。实验：纤维素酶分解纤维素的实验各加入一张各加入一张1cm1cm6cm6cm的的滤纸条。滤纸条。各加入各加入pH4.8pH4.8，物质的量浓度为，物质的量浓度为0.1mol/L0.1mol/L的的醋酸醋酸钠缓冲液醋酸醋酸钠缓冲液11ml11ml和和10ml10ml。甲 乙在在乙试管乙试管中加入中加入1mL1

5、mL纤维素酶。纤维素酶。两支试管固定在锥形瓶中，放在两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min140r/min的的摇床摇床上振荡上振荡1h1h。结果：结果：乙试管乙试管的的滤纸条消失。滤纸条消失。讨论：讨论：自变量？自变量？因变量？因变量？无关变量？乙无关变量？乙试管的滤纸条为什么会消失？试管的滤纸条为什么会消失？甲甲试管的作用是什么？试管的作用是什么？自变量：自变量：纤维素酶的有无纤维素酶的有无自变量的控制自变量的控制：乙试管乙试管-1mL1mL纤维素酶溶液纤维素酶溶液 甲试管甲试管-等量的缓冲液等量的缓冲液(不能加蒸馏水，会影响溶液的不能加蒸馏水，会影响溶液的pH)pH)。现在学习的是第

6、5页，共35页刚果红染色法（二）纤维素分解菌的筛选2、原理：即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。刚果红刚果红能与能与纤维素纤维素形成形成红色复合物红色复合物，而与，而与水解后的水解后的纤维二糖纤维二糖和和葡萄糖葡萄糖不发生不发生这种反这种反应。应。红色复合物红色消失，出现透明圈纤维素纤维素刚果红刚果红（染料）（染料）纤维素分解菌纤维素分解菌纤维素酶纤维素酶四种四种纤维素分解菌在刚果红培纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的养基上形成的透明圈透明圈(选择培养基中通过颜色反应直接对微生物进行筛选)现在学习的是第6页，共35页不同菌落的不同菌落的透明圈大小透明圈大小不同，不同，可以说明微生物可以

7、说明微生物产生纤维素产生纤维素酶能力的大小酶能力的大小。不同菌落的不同菌落的透明圈大小透明圈大小不同可以不同可以说明什么问题？说明什么问题？（二）纤维素分解菌的筛选四种纤维素分解菌在刚果红四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈培养基上形成的透明圈透明圈的应用：筛选具有某种特定功能（如分泌某种酶）的微生物（目的菌）.现在学习的是第7页，共35页 在在长出菌落长出菌落的的培养基培养基上，覆盖质上，覆盖质量浓度为量浓度为1mg/mL1mg/mL的的刚果红刚果红（简称（简称CRCR）溶液，溶液，101015min15min后，倒去后，倒去CRCR溶液溶液，加入物质的量浓度为加入物质的量浓度为1m

8、ol/L1mol/L的的NaClNaCl溶液溶液，15min15min后倒掉后倒掉NaClNaCl溶液，此溶液，此时，产生时，产生纤维素酶的菌落纤维素酶的菌落周围将出现周围将出现透明圈透明圈。先先，再再加入加入刚果红刚果红进行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：3、操作：NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维素结合不牢的刚果刚果红红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。现在学习的是第8页，共35页先先，再再加入加入刚果红刚果红进行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：3、操作：在在时就加入时就加入刚果红刚果红。方法方法2 2：配制质量浓度为配制

9、质量浓度为10mg/mL10mg/mL的的刚刚果红果红（CRCR）溶液，）溶液，灭菌灭菌后，按照后，按照每每200200mLmL培养基加入培养基加入1m1mL L的比例加的比例加入入CRCR溶液溶液，混匀后，混匀后倒平板倒平板。等培养。等培养基上基上长出菌落长出菌落后，产生后，产生纤维素酶纤维素酶的菌落的菌落周围将会出现明显的周围将会出现明显的透明透明圈。圈。NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维素结合不牢的刚果红刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。现在学习的是第9页，共35页在在时就加入时就加入刚果红刚果红。先先，再再加入加入刚果红刚果红进

10、行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：方法方法2 2：3、操作：染色法染色法优点优点缺点缺点方法1(后置染色法）方法2(前置染色法）颜色反应基本上颜色反应基本上是纤维素分解菌是纤维素分解菌的作用的作用操作繁琐。操作繁琐。刚果红会使菌落之间发生混刚果红会使菌落之间发生混杂。杂。操作简便，操作简便，不存在菌落混不存在菌落混杂问题杂问题1.1.产生淀粉酶的微生物也产产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈。生模糊透明圈。2.2.有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。形成明显的透明圈。这两种方法各有哪些优点与不足？NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维

11、素结合不牢的刚果红刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。现在学习的是第10页，共35页二、实 验 设 计土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在将样品涂布在鉴别鉴别纤纤 维素分解菌的维素分解菌的培养基培养基上上 挑选挑选产生透明圈产生透明圈的菌落（的菌落（筛选）现在学习的是第11页，共35页富含纤维素富含纤维素的环境中的环境中生物与环境的互相依存关系生物与环境的互相依存关系，在富含纤维在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通

12、环境。要高于普通环境。二、实 验 设 计取样的取样的环境环境是怎样的，作出这种选择的是怎样的，作出这种选择的理由理由是什么？是什么？纤维素分解菌大多分布在纤维素分解菌大多分布在富含纤维素富含纤维素的环境中。因此，的环境中。因此，选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。殖土，多年积累的枯枝败叶等等。现在学习的是第12页，共35页如果找不到合适的环境，可以将如果找不到合适的环境，可以将滤纸滤纸埋在土壤中，埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有将滤纸埋在土壤中有什么作用什么作用？你认为滤纸应该？你认为滤纸应该埋在土壤中埋在土壤

13、中多深多深？将将滤纸滤纸埋在土壤中，能使纤维素分解菌相埋在土壤中，能使纤维素分解菌相对集中，实际上是对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境适宜环境。一般应将滤纸埋于深约。一般应将滤纸埋于深约10cm10cm左右左右的土壤中。的土壤中。增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。从样品中分离所需要的微生物。思考：用什么方法选择？思考：用什么方法选择？现在学习的是第13页，共35页纤维素分解菌的纤维素分解菌的选择选择培养基培养基组分含量/g提供的主要营养纤维素粉5NaNO31Na2HPO4.7H2O1.2KH

14、2PO40.9MgSO4.7H2O0.5KCl0.5酵母膏0.5水解酪素0.5将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL碳源、能源无机盐生长因子、氮源氮源、生长因子 A A、旁栏中的配方是、旁栏中的配方是液液体培养基体培养基还是还是固体培养基固体培养基？为什么？为什么？是是液体培养基液体培养基，原因是配，原因是配方中方中无凝固剂无凝固剂（琼脂）（琼脂）B B、这个培养基对微生物是、这个培养基对微生物是否具有否具有选择作用选择作用？如果具有，？如果具有，是如何进行选择的？是如何进行选择的？有选择有选择作用，以作用，以纤维素粉纤维素粉作作为为主要碳源主要碳源，只有只有能分解纤能分解纤维素的微

15、生物可以大量繁殖。维素的微生物可以大量繁殖。C C、你能否设计一个、你能否设计一个对照对照实验实验，说明选择培养，说明选择培养基的作用。基的作用。自变量自变量为为培养基的种培养基的种类类（即普通培养基和选（即普通培养基和选择培养基）。可用择培养基）。可用牛肉牛肉膏蛋白胨培养基膏蛋白胨培养基与之对与之对照；或者将照；或者将纤维素粉纤维素粉改改为为葡萄糖葡萄糖。酵母膏，酵母膏，是以是以新鲜酵母乳液新鲜酵母乳液经酶解、分离、经酶解、分离、浓缩得到的一种棕黄色可溶性膏状（酵母浸浓缩得到的一种棕黄色可溶性膏状（酵母浸膏）或浅黄色粉状（酵母浸粉）纯天然制品膏）或浅黄色粉状（酵母浸粉）纯天然制品,富含蛋白质

16、、必需氨基酸及富含蛋白质、必需氨基酸及B B族维生素、核族维生素、核甘酸、微量元素甘酸、微量元素等。主要作用是补充等。主要作用是补充氮源氮源和和提供提供生长因子生长因子。水解酪素水解酪素 ，即水解酪蛋白，酪蛋白水解后得到的白色或，即水解酪蛋白，酪蛋白水解后得到的白色或浅黄粉末、易溶于水、极易潮解、具有酱香味。浅黄粉末、易溶于水、极易潮解、具有酱香味。氨基酸种氨基酸种类齐全类齐全。因此常用于制备培养基。主要作用是提供。因此常用于制备培养基。主要作用是提供氮源氮源和和生生长因子长因子。现在学习的是第14页，共35页纤维素粉纤维素粉主要碳源主要碳源。液体培养基液体培养基选择选择培养基培养基对照实验对

17、照实验牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基碳源碳源：纤维素粉纤维素粉葡萄糖葡萄糖(能分解纤维素的微生物可以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖大量繁殖)为什么？微生物大量繁殖现在学习的是第15页，共35页 在在选择培养选择培养的条件下，可以使那些能够的条件下，可以使那些能够适应适应这种营养条件的微生物得到这种营养条件的微生物得到迅速繁殖迅速繁殖，而那些，而那些不不适应适应这种营养条件的微生物的繁殖被这种营养条件的微生物的繁殖被抑制抑制，因，因此可以起到此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。现在学习的是第16页，共3

18、5页按照按照课题课题1 1的稀释操作方法，将选择培养后的的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比培养基进行等比稀释稀释10101 110107 7倍。倍。101102103104105106现在学习的是第17页，共35页组分含量提供的主要营养CMCNa510 g酵母膏1 gKH2PO40.25 g琼脂15 g土豆汁100 mL将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 此培养基为固体培养基在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。(水溶性羧甲基水溶性羧甲基纤维素钠纤维素钠)鉴别培养基鉴别培养基碳源氮源、生长因子无机盐凝固剂碳源、生长因子现在学习的是

19、第18页，共35页CMCNa（纤维素钠纤维素钠)主要碳源主要碳源。固体培养基固体培养基鉴别培养基鉴别培养基加入刚果红（前置染色法前置染色法/后置染色法后置染色法）出现透明圈鉴别与筛选纤维素分解菌 将稀释度为将稀释度为10104 410106 6的菌悬液各取的菌悬液各取0.1ml0.1ml涂布涂布到平板培养基上，到平板培养基上，3030倒置倒置培养培养。(2)(2)涂布平板涂布平板：鉴别培养基鉴别培养基5 挑取产生明显的透明圈的菌落（即为分解纤维素的菌落）纯化培养。现在学习的是第19页，共35页纤维素分解菌纤维素分解菌选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基物理物理性质性质唯一唯一C C源源作用

20、作用液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基纤维素纤维素CMC-NaCMC-Na使纤维素分解使纤维素分解菌菌迅速增殖迅速增殖鉴别鉴别与与筛选筛选纤维纤维素分解菌素分解菌选择培养基选择培养基与与鉴别培养基鉴别培养基比较比较现在学习的是第20页，共35页土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂布将样品涂布到到鉴别培养鉴别培养基基挑选菌落挑选菌落（产生明显的透明圈）什么样什么样的环境的环境取样取样?培养的目的培养的目的?选择培养基的特选择培养基的特点点?鉴别培养基的鉴别培养基的特点特点?如何鉴别如何鉴别?原因原因：微生物：微生物对生存环境的对生存环境的要求，到相应要求，到相应环境中去

21、找。环境中去找。目的：目的：增加纤维素分增加纤维素分解菌的浓度，解菌的浓度，以确保以确保能够从样品中分离到能够从样品中分离到所需要的微生物。所需要的微生物。刚果红染色法刚果红染色法二、实 验 设 计小结：小结：现在学习的是第21页，共35页思考：本实验的流程与思考：本实验的流程与课题课题2 2中的实验流程中的实验流程有哪些有哪些异同异同？不同：课题课题2 2是将土样制成的菌悬液是将土样制成的菌悬液直接涂布直接涂布在在以尿素为唯一氮源的以尿素为唯一氮源的选择性培养基选择性培养基上，上，直接分离直接分离得到菌落。得到菌落。本课题通过本课题通过选择培养选择培养，使纤维素分解菌得到，使纤维素分解菌得到

22、增殖增殖后，后，再再将菌液稀释将菌液稀释涂布涂布在在鉴别（选择）培鉴别（选择）培养基养基上上进行进行分离和纯化分离和纯化。相同：其他步骤基本一致。：其他步骤基本一致。现在学习的是第22页，共35页思考：本实验的流程与思考：本实验的流程与课题课题2 2中的实验流程中的实验流程有哪些有哪些异同异同？课题课题2:2:土壤取样选择培养基直接分离直接分离菌落(分解尿素的细菌)（尿素为唯一氮源）选择培养选择培养稀释涂布平板法稀释涂布平板法课题课题3:3:土壤取样选择培养基(纤维素分解菌)（纤维素为主要碳源）稀释涂布平稀释涂布平板法板法鉴别培养基透明圈透明圈挑选菌落（刚果红染色法）现在学习的是第23页，共3

23、5页现在学习的是第24页，共35页三、结果分析与评价 1.1.培养基的培养基的制作制作是否合格以及选择培养基是是否合格以及选择培养基是否否筛选筛选出菌落出菌落对照的培养基对照的培养基在培养过程中在培养过程中没有没有菌落生长则说明培菌落生长则说明培养基制作合格。养基制作合格。如果观察到如果观察到产生透明圈的菌落产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。解纤维素的微生物。2.2.分离的分离的结果结果是否一致是否一致 由于在土壤中由于在土壤中细菌的数量细菌的数量远远远远高于高于真菌和放线菌的数量，真菌和放线菌的数量，因此因此最容易最容易分离得到的是分离得到的是细菌细菌

24、。但由于所取土样的环境不。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。现在学习的是第25页，共35页 四、课题延伸2 2、纤维素酶的、纤维素酶的测定方法测定方法:对对纤维素酶纤维素酶分解滤纸等分解滤纸等纤维素纤维素所产生的所产生的葡萄葡萄糖糖含量进行含量进行定量测定定量测定。为了确定分离得到的是为了确定分离得到的是纤维素分解菌纤维素分解菌，还需要进行，还需要进行发发酵产纤维素酶酵产纤维素酶实验，纤维素酶的发酵方法有实验，纤维素酶的发酵方法有液体液体发酵发酵和和固体固体发酵发酵。1 1、纤维素分解菌的、纤维素分解菌

25、的鉴定鉴定：发酵发酵产纤维素酶产纤维素酶实验实验液体液体发酵发酵固体固体发酵发酵现在学习的是第26页，共35页分解分解纤纤维素的维素的微生物微生物的分离的分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化活力种类、作用、催化活力刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌课堂小结课堂小结现在学习的是第27页，共35页比较项目比较项目分解尿素的细菌纤维素分解菌选择培养基原理原理培养基培养基类型类型目的目的

26、鉴鉴定定培培养养基基原理原理现象现象方法方法将细菌涂布在将细菌涂布在只有只有尿素做氮源尿素做氮源的选择的选择培养基上培养基上将细菌涂布在将细菌涂布在主要主要以纤维素粉做碳源以纤维素粉做碳源的选择培养基上的选择培养基上固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基筛选菌株筛选菌株选择培养选择培养课题2与课题3相关比较现在学习的是第28页，共35页比较比较项目项目分解尿素的细菌分解尿素的细菌纤维素分解菌纤维素分解菌选选择择培培养养原理原理培养基类培养基类型型目的目的鉴鉴定定培培养养基基原理现象方法在细菌分解尿素的化学反应在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的中，细菌合成的脲酶脲酶将尿素将尿素分解成了氨，

27、氨会使培养基分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，的碱性增强，pHpH升高。在培升高。在培养基中加入养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，如，如果果pHpH升高指示剂会变红升高指示剂会变红刚果红刚果红可以与纤维素形成可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被红色复合物，当纤维素被纤维素酶纤维素酶催化分解后红色催化分解后红色复合物无法形成，培养基复合物无法形成，培养基上就会出现以纤维素分解上就会出现以纤维素分解菌为中心的菌为中心的透明圈透明圈观察菌落周围是否有观察菌落周围是否有着色着色的的环带出现来鉴定尿素分解菌环带出现来鉴定尿素分解菌观察菌落周围是否出现观察菌落周围是否出现透明圈透明圈来筛选纤维素分解菌来

28、筛选纤维素分解菌脲酶检测法脲酶检测法刚果红染色法刚果红染色法现在学习的是第29页，共35页1.1.【生物【生物 选修选修1 1：生物技术实践（：生物技术实践（1515分）分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：降解原油的菌株。回答问题：在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于能上讲，该培养基属于 培养基。培养基。纯

29、化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即方法有两种，即 和和 。石油石油选择选择平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法当堂训练当堂训练现在学习的是第30页，共35页为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有菌方法有 、和和 。无菌技术。无菌技术要求试验操作应在酒精灯要求试验操作应在酒精灯 附近进行，以避免附近进行，以避免周

30、围环境中微生物的污染。周围环境中微生物的污染。强强灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰火焰现在学习的是第31页，共35页2 2如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：此回答有关问题：（1 1）要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，）要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明这说明 。（2 2）接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采）接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用用 法，原因是法，原因是 。

31、（3 3）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择菌落数在）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择菌落数在 间的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为间的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为10105 5的的平板上的平均菌落数为平板上的平均菌落数为3030个，所用稀释液的体积为个，所用稀释液的体积为0.2 mL0.2 mL，则每克样品中的菌落，则每克样品中的菌落数为数为 。寻找目的菌，根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 释稀涂布平板 平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌数 30300 1.51.510107 7个个现在学习的是第32页，共35页3从自然菌样筛选较理想生

32、产菌种的一般步骤是：采集菌样从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样富集培富集培养养纯种分离纯种分离性能测定。性能测定。（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 环境采集。环境采集。（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产使其群落中的数

33、量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 的培养基，并在的培养基，并在 条条件下培养。件下培养。（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是 ，获得图B效果的接种方法是 。（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 ，培养基接种前要进行 ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在 条件下进行。海滩等高盐 以淀粉为唯一碳源 高温 稀释涂布平板法 平板划线法

34、调节 pH高压蒸汽灭菌 无菌 现在学习的是第33页，共35页4有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵生产，为了提高酶的产量，请你等。纤维素酶可以通过微生物发酵生产，为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。株。（1）写出实验步骤：）写出实验步骤：将培养好的生产菌株分成两组，将培养好的生产菌株分成两组，。制备含有制备含有的固体培养基。的固体培养基。一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作为对照 纤维素 把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固基上，同时接种对照组（未处理）的菌株，把它们置于相同的适宜条件下培养一段时间后，取培养基用刚果红染色，观察记录菌落周围透明圈的大小情况 现在学习的是第34页，共35页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第35页，共35页