动物细胞融合与单克隆抗体 讲稿.ppt

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1、动物细胞融合与单克隆抗体 第一页，讲稿共二十七页哦(1)(1)(2)(3)(4)(5)第二页，讲稿共二十七页哦A细胞B细胞人工诱导杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合概念第三页，讲稿共二十七页哦细胞膜的流动性灭活的病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞2、诱导的手段？3、融合后细胞的类型？4、AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB含两种生物的遗传物质动物细胞融合过程1、原理？第四页，讲稿共二十七页哦动物细胞融合技术的意义和应用第五页，讲稿共二十七页哦比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导

2、手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性细胞的全能性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体比较动、植物细胞杂交技术第六页，讲稿共二十七页哦【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原

3、来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA第七页，讲稿共二十七页哦抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。二、单克隆抗体第八页，讲稿共二十七页哦抗体的传统生产方法抗原 反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。

4、第九页，讲稿共二十七页哦读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念 单克隆单克隆抗体：单个抗体：单个B B细胞克隆产生的细胞克隆产生的单一、特单一、特异性强异性强的抗体的抗体第十页，讲稿共二十七页哦一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞第十一页，讲稿共二十七页哦BB

5、、B瘤、瘤瘤（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞第十二页，讲稿共二十七页哦用特定的选择性培养基第十三页，讲稿共二十七页哦单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：1、诊断试剂、诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第十四页，讲稿共二十七页哦“生物导弹”单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第十五页，讲稿共二十七页哦两个过程动物细胞培养过程单克隆抗

6、体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势第十六页，讲稿共二十七页哦【例例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例例5 5】单克隆

7、抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD第十七页，讲稿共二十七页哦【例例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋淋巴细胞巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B

8、B淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B第十八页，讲稿共二十七页哦第十九页，讲稿共二十七页哦 2002年12月30日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术第二十页，讲稿共二十七页哦阅读课本阅读课本P52P52及识图及识图2-2

9、32-23第二十一页，讲稿共二十七页哦(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）d过程是一个_过程，该过程的进行常用_或_的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点是_。效应B抗原细胞融合聚乙二醇 灭活的病毒选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞第二十二页，讲稿共二十七页哦(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）_。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比

10、，其特点是_。特异性强、灵敏度高无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境第二十三页，讲稿共二十七页哦15、（1）单克隆抗体是指 。（2）制备单克隆抗体的步骤：将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤获得的B淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在_的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_的能力，又具有_的本领。检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体

11、抗原聚乙二醇选择性无限增殖产生专一抗体第二十四页，讲稿共二十七页哦（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得10g/mL的抗体；动物体内诱生法可获得520mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是 。（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为 产生 ，解决这个问题的方法是_。大量生产选，小规模生产选效应B蛋白质异物免疫反应采用人的效应B细胞制备第二十五页，讲稿共二十七页哦15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是_。（2）图中为 过程，常用 作为诱导剂。该细胞继承了_ ，因此不仅能分泌_，还有 本领。不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的B淋巴细胞细胞融合灭活病毒双亲细胞的遗传物质特异性抗体大量增殖制备单克隆抗体（3）该方案的目的是_。第二十六页，讲稿共二十七页哦第二十七页，讲稿共二十七页哦