物质的跨膜运输翟中和细胞生物学.ppt
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1、关于物质的跨膜运输翟中和细胞生物学现在学习的是第1页,共50页第一节第一节 膜转运蛋白与物质的跨膜运输膜转运蛋白与物质的跨膜运输一、脂双层的不透性和膜转运一、脂双层的不透性和膜转运蛋白蛋白 细胞内外的离子差别分布细胞内外的离子差别分布主要由两种机制作控制:主要由两种机制作控制:1.1.取决于一套特殊的膜转运蛋取决于一套特殊的膜转运蛋白的活性;白的活性;2.2.取决于质膜本身的脂双层所取决于质膜本身的脂双层所具有的疏水性特征。具有的疏水性特征。组分组分细胞内浓度细胞内浓度/(mmol.L-1)细胞外浓度细胞外浓度/(mmol.L-1)阳离子阳离子Na+5-15145K+1405Mg2+0.51-
2、2Ca2+10-41-2H+7 10-8(pH7.2)4 10-8(pH7.4)阴离子阴离子Cl-5-15110固定的固定的阴离子阴离子高高0典型哺乳类细胞内外离子浓度的比较典型哺乳类细胞内外离子浓度的比较现在学习的是第2页,共50页一、脂双层的不透性和膜转运蛋白一、脂双层的不透性和膜转运蛋白 载体蛋白载体蛋白 通道蛋白通道蛋白 通道蛋白与载体蛋白的异同通道蛋白与载体蛋白的异同现在学习的是第3页,共50页、载体蛋白、载体蛋白结构结构:多次跨膜的整合性膜蛋白多次跨膜的整合性膜蛋白机制机制:通过通过构象的改变构象的改变介导介导与之结合的溶质分子与之结合的溶质分子的跨膜转运的跨膜转运特征特征:如同酶
3、具有特异性结合位点如同酶具有特异性结合位点,具有高度的选择性具有高度的选择性一次只能与膜一侧的一种溶质结合一次只能与膜一侧的一种溶质结合,经构象变化转运溶质经构象变化转运溶质转运过程具有类似于酶与底物作用的饱和动力学特征转运过程具有类似于酶与底物作用的饱和动力学特征 与酶不同对转运的溶质分子不作任何的共价修饰与酶不同对转运的溶质分子不作任何的共价修饰 载体蛋白载体蛋白-通透酶(通透酶(permeasepermease):):既可被底物类似物竞争性地抑制,又可既可被底物类似物竞争性地抑制,又可被某种抑制剂非竞争性抑制以及对被某种抑制剂非竞争性抑制以及对pHpH有依赖性等。有依赖性等。现在学习的是
4、第4页,共50页 载体蛋白的载体蛋白的类型类型 介导被动运输介导被动运输 易化转运蛋白易化转运蛋白:不与能量释放体系相偶联,主要介导协助扩散不与能量释放体系相偶联,主要介导协助扩散(易化扩散),物质跨膜运动可以在任一方向发生。(易化扩散),物质跨膜运动可以在任一方向发生。介导主动运输(激活转运蛋白)介导主动运输(激活转运蛋白)ATPATP驱动泵蛋白驱动泵蛋白:离子泵的主要成分离子泵的主要成分,由由ATPATP直接水解供能,直接水解供能,单方向逆着浓度梯度运送离子。单方向逆着浓度梯度运送离子。协同转运蛋白协同转运蛋白:利用储存在一种溶质(离子)电化学梯度中的自:利用储存在一种溶质(离子)电化学梯
5、度中的自由能来转运另外一种溶质,单方向逆着浓度梯度运送离子。由能来转运另外一种溶质,单方向逆着浓度梯度运送离子。光驱动泵蛋白光驱动泵蛋白:利用光能,单方向逆着浓度梯度转运质子。利用光能,单方向逆着浓度梯度转运质子。现在学习的是第5页,共50页、通道蛋白、通道蛋白 通道蛋白的通道蛋白的结构结构 通道蛋白的通道蛋白的特征特征 通道蛋白的类型通道蛋白的类型现在学习的是第6页,共50页结结 构构 通道蛋白形成跨膜的离子选择性通道。通道蛋白形成跨膜的离子选择性通道。对离子的选择性依赖于通道的直径和形状以及对离子的选择性依赖于通道的直径和形状以及通道内衬带电荷氨基酸的分布。通道内衬带电荷氨基酸的分布。它所
6、介导的被动运输不需要与溶质分子结合,它所介导的被动运输不需要与溶质分子结合,只有大小和电荷适宜的离子才能通过。只有大小和电荷适宜的离子才能通过。现在学习的是第7页,共50页特特 征征具有极高的具有极高的转运速率转运速率 驱动带电荷离子的跨膜转运动力来自溶质的浓度梯度和跨膜驱动带电荷离子的跨膜转运动力来自溶质的浓度梯度和跨膜电位差两种力的合力电位差两种力的合力跨膜的电化学梯度,跨膜的电化学梯度,运输方向顺电化运输方向顺电化学梯度进行。学梯度进行。离子通道没有饱和值离子通道没有饱和值 即使在很高的离子浓度下它们通过的离子量依然没有最大值。即使在很高的离子浓度下它们通过的离子量依然没有最大值。是非连
7、续性开放是非连续性开放,而是门控的,即离子通道的活性由通道开或关而是门控的,即离子通道的活性由通道开或关两种构象调节。两种构象调节。通道打开时,同时结合膜两侧的离子通道打开时,同时结合膜两侧的离子.现在学习的是第8页,共50页类类 型型 电压门通道电压门通道带电荷的蛋白结构域会随跨带电荷的蛋白结构域会随跨膜电位梯度的改变发生相应膜电位梯度的改变发生相应位移。位移。配体门通道配体门通道细胞内外的某些小分子配细胞内外的某些小分子配体与通道蛋白结合继而引体与通道蛋白结合继而引起通道蛋白构象的改变。起通道蛋白构象的改变。应力激活通道应力激活通道通道蛋白感应应力而改变构通道蛋白感应应力而改变构象,从而开
8、启通道形成离子象,从而开启通道形成离子流,产生信号。流,产生信号。现在学习的是第9页,共50页、通道蛋白与载体蛋白的异同、通道蛋白与载体蛋白的异同主要不同在于它们以不同的方式辨别溶质,即决定主要不同在于它们以不同的方式辨别溶质,即决定运输某些溶质而不运输另外的溶质:运输某些溶质而不运输另外的溶质:1.1.通道蛋白通道蛋白:根据溶质大小和电荷进行辨别,假如通道处于开根据溶质大小和电荷进行辨别,假如通道处于开放状态,那么足够小的和带有适当电荷的分子或离子就能通过。放状态,那么足够小的和带有适当电荷的分子或离子就能通过。2.2.载体蛋白载体蛋白:只容许与载体蛋白上结合部位相适合的溶质分子通过,只容许
9、与载体蛋白上结合部位相适合的溶质分子通过,而且载体蛋白每次转运都发生自身构象的改变。而且载体蛋白每次转运都发生自身构象的改变。现在学习的是第10页,共50页二、被动运输与主动运输二、被动运输与主动运输 被动运输(被动运输(passive transportpassive transport)主动运输(主动运输(active transportactive transport)物质的物质的跨膜运输跨膜运输是细胞维持正常生命活动的基础之一是细胞维持正常生命活动的基础之一 现在学习的是第11页,共50页二、被动运输与主动运输二、被动运输与主动运输概念概念 被动运输:被动运输:是指通过简单扩散或协助扩
10、散实现物质由高浓度向低浓度方向是指通过简单扩散或协助扩散实现物质由高浓度向低浓度方向的跨膜转运。的跨膜转运。转运的动力来自物质的浓度梯度,不需要细胞提供代谢能量。转运的动力来自物质的浓度梯度,不需要细胞提供代谢能量。类型类型 简单扩散(简单扩散(simple diffusionsimple diffusion)水孔蛋白(水孔蛋白(aquaporin,AQP)aquaporin,AQP)协助扩散(协助扩散(facilitated diffusionfacilitated diffusion)现在学习的是第12页,共50页(一一)简单扩散简单扩散 疏水的小分子或小疏水的小分子或小的不带电荷的极性分
11、子的不带电荷的极性分子进行跨膜转运时,不需进行跨膜转运时,不需要细胞提供能量,也无要细胞提供能量,也无需膜蛋白的协助,因此需膜蛋白的协助,因此称为简单扩散。称为简单扩散。不同小分子物质跨膜转不同小分子物质跨膜转运的速率差异极大运的速率差异极大不同不同分子的通透系数有很大区别分子的通透系数有很大区别。人工脂双层膜对不人工脂双层膜对不同分子的相对透性同分子的相对透性 不同分子通过人工不同分子通过人工脂脂双层膜渗透系数双层膜渗透系数现在学习的是第13页,共50页决定通透性的因素决定通透性的因素 其通透性主要取决于分子的大小和分子的极性:其通透性主要取决于分子的大小和分子的极性:小分子比大分子容易穿膜
12、小分子比大分子容易穿膜 非极性分子比极性分子容易穿膜非极性分子比极性分子容易穿膜 带电荷的离子跨膜需要更高的自由能带电荷的离子跨膜需要更高的自由能无膜蛋白的人无膜蛋白的人工脂双层对带电荷的离子是高度不透的。工脂双层对带电荷的离子是高度不透的。现在学习的是第14页,共50页为什么具有极性的水分子容易穿膜?为什么具有极性的水分子容易穿膜?可能是因为水分子非常小,可以通过由于膜质运动而产可能是因为水分子非常小,可以通过由于膜质运动而产生的间隙的缘故。生的间隙的缘故。但是,速度缓慢。但是,速度缓慢。水分子快速跨膜运动是以何种方式实现的?水分子快速跨膜运动是以何种方式实现的?水孔蛋白水孔蛋白 现在学习的
13、是第15页,共50页(二二)水孔蛋白水孔蛋白 水孔蛋白的发现水孔蛋白的发现 水孔蛋白的结构水孔蛋白的结构 水孔蛋白的选择性水孔蛋白的选择性 现在学习的是第16页,共50页水孔蛋白的发现水孔蛋白的发现 长期以来长期以来,普遍认为细胞内外的水分子是以简单扩散的普遍认为细胞内外的水分子是以简单扩散的方式透过脂双层膜。后来发现某些细胞在低渗溶液中对水的方式透过脂双层膜。后来发现某些细胞在低渗溶液中对水的通透性很高通透性很高,很难以简单扩散来解释。很难以简单扩散来解释。例如,将红细胞移入低渗溶液后,很快吸水膨胀而例如,将红细胞移入低渗溶液后,很快吸水膨胀而溶血,而水生动物的卵母细胞在低渗溶液不膨胀。溶血
14、,而水生动物的卵母细胞在低渗溶液不膨胀。因此,人们推测水的跨膜转运除了简单扩散外因此,人们推测水的跨膜转运除了简单扩散外,还存在还存在某种特殊的机制某种特殊的机制,并提出了并提出了水通道水通道的概念。的概念。现在学习的是第17页,共50页 1988 1988年年AgreAgre在分离纯化红细胞膜上的在分离纯化红细胞膜上的RhRh血型抗原时,发现了一血型抗原时,发现了一个疏水性跨膜蛋白,称为个疏水性跨膜蛋白,称为CHIP28(Channel-Forming integral membrane CHIP28(Channel-Forming integral membrane protein)pro
15、tein)。19911991年得到年得到CHIP28CHIP28的的cDNAcDNA序列,序列,AgreAgre将将CHIP28CHIP28的的mRNAmRNA注注入非洲爪蟾的卵母细胞中,在低渗溶液中,卵母细胞迅速膨胀,入非洲爪蟾的卵母细胞中,在低渗溶液中,卵母细胞迅速膨胀,并于并于5 5分钟内破裂,纯化的分钟内破裂,纯化的CHIP28CHIP28置入脂质体,也会得到同样的结果。置入脂质体,也会得到同样的结果。细胞的这种吸水膨胀现象会被细胞的这种吸水膨胀现象会被HgHg2+2+抑制,而这是已知的抑制水通透的处理抑制,而这是已知的抑制水通透的处理措施。这一发现揭示了细胞膜上确实存在水通道,措施。
16、这一发现揭示了细胞膜上确实存在水通道,AgreAgre因此而与离子因此而与离子通道的研究者共享通道的研究者共享20032003年的诺贝尔化学奖。年的诺贝尔化学奖。目前在人类细胞中已发现的此类蛋白至少有目前在人类细胞中已发现的此类蛋白至少有1010种,被种,被命名为水通道蛋白(命名为水通道蛋白(AquaporinAquaporin,AQPAQP)现在学习的是第18页,共50页水孔蛋白的结构水孔蛋白的结构水孔蛋白是由四个亚基组成的四聚体。水孔蛋白是由四个亚基组成的四聚体。每个亚基由每个亚基由6 6个跨膜个跨膜螺旋组成,相对分子质量为螺旋组成,相对分子质量为28 00028 000。每个每个水孔蛋白
17、亚基单独形成一个供水分子运动的中央孔。水孔蛋白亚基单独形成一个供水分子运动的中央孔。中央孔的直径稍大于水分子的直径,约中央孔的直径稍大于水分子的直径,约0.28 nm0.28 nm,水孔长约为,水孔长约为2 nm2 nm。现在学习的是第19页,共50页水孔蛋白的选择性水孔蛋白的选择性 水孔蛋白形成对水分子高度特异的亲水通道,只容许水孔蛋白形成对水分子高度特异的亲水通道,只容许水而不容许离子或其他小分子溶质通过。水而不容许离子或其他小分子溶质通过。源于源于通道内高度保守的氨基酸残基侧链与通过的水分子形成通道内高度保守的氨基酸残基侧链与通过的水分子形成氢键。氢键。源于非常狭窄的孔径。源于非常狭窄的
18、孔径。现在学习的是第20页,共50页(三三)协助扩散协助扩散概念:概念:各种极性分子和无机离子,如糖、氨基酸、核苷酸以及细胞代谢各种极性分子和无机离子,如糖、氨基酸、核苷酸以及细胞代谢物等顺其浓度梯度或电化学梯度减小方向的跨膜转运。物等顺其浓度梯度或电化学梯度减小方向的跨膜转运。该过程不需要细胞提供能量,这与简单扩散相同,因此该过程不需要细胞提供能量,这与简单扩散相同,因此两者都称为被动运输。两者都称为被动运输。但在但在协助扩散协助扩散中,物质跨膜转运需要特异性的膜转运蛋白中,物质跨膜转运需要特异性的膜转运蛋白“协助协助”,从而使其转运速率增加,转运特异性增强。,从而使其转运速率增加,转运特异
19、性增强。现在学习的是第21页,共50页 绝大多数哺乳类细胞都是利用血糖作为细胞的主要能源,绝大多数哺乳类细胞都是利用血糖作为细胞的主要能源,人类基因组编码人类基因组编码1212种与糖转运相关的载体蛋白种与糖转运相关的载体蛋白GLUT1GLUT1 GLUT12GLUT12,构成葡萄糖载体(构成葡萄糖载体(GLUTGLUT)蛋白家族。)蛋白家族。用红细胞和肝细胞设用红细胞和肝细胞设计葡萄糖摄取实验,发现计葡萄糖摄取实验,发现由由GLUT蛋白所介导的细蛋白所介导的细胞对葡萄糖的摄取表现酶胞对葡萄糖的摄取表现酶动力学基本特征,与简单动力学基本特征,与简单扩散相比极大地提高了摄扩散相比极大地提高了摄入速
20、率。入速率。现在学习的是第22页,共50页特征:特征:葡萄糖载体介导的葡萄糖载体介导的协助扩散协助扩散比简单扩散转运速率高。比简单扩散转运速率高。膜转运蛋白协助的结果膜转运蛋白协助的结果与酶催反应相似与酶催反应相似,存在最大的转运速率,因此可用达到最大存在最大的转运速率,因此可用达到最大转运速率一半时的葡萄糖浓度作为其转运速率一半时的葡萄糖浓度作为其KmKm值,用以衡量某种物质值,用以衡量某种物质的转运速率。的转运速率。膜转运蛋白的数量有限。在一定限度内运输速率同物质膜转运蛋白的数量有限。在一定限度内运输速率同物质浓度成正比。如超过一定限度,浓度再增加,运输也不浓度成正比。如超过一定限度,浓度
21、再增加,运输也不再增加。因膜上载体蛋白的结合位点已达饱和。再增加。因膜上载体蛋白的结合位点已达饱和。比较不同分子的比较不同分子的KmKm值,可以发现不同载体蛋白对溶质的亲值,可以发现不同载体蛋白对溶质的亲和性不同。和性不同。实验还发现,不同的载体蛋白具有的转运特异性溶质的偏好性。实验还发现,不同的载体蛋白具有的转运特异性溶质的偏好性。现在学习的是第23页,共50页、主动运输、主动运输定义:是由载体蛋白所介导的物质逆浓度梯度或电化学梯度由浓度低定义:是由载体蛋白所介导的物质逆浓度梯度或电化学梯度由浓度低的一侧向高浓度的一侧进行跨膜转运的方式。的一侧向高浓度的一侧进行跨膜转运的方式。类型(根据能量
22、来源):类型(根据能量来源):ATP直接供能直接供能(ATP驱动泵驱动泵)、ATP间接提供能间接提供能量量(耦联转运蛋白耦联转运蛋白)、光能驱动、光能驱动Fig.Fig.驱动主动运输的三种类型驱动主动运输的三种类型现在学习的是第24页,共50页Fig.NaFig.Na+-K-K+泵的结构与工作模式示意图泵的结构与工作模式示意图1.由由ATP直接提供能量的主动运输直接提供能量的主动运输钠钾泵钠钾泵ATPATP催化位点催化位点结构:结构:(MW=120,000DaMW=120,000Da)+(MW=50MW=50,000Da000Da)NaNa+-K-K+泵泵功能:维持细胞内低功能:维持细胞内低N
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