梅毒实验室检测技术.ppt

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1、关于梅毒实验室检测技术现在学习的是第1页，共51页2梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（1 1）1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋体特异性抗体通常会终身阳性 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初筛3.二期梅毒时，TPPA和RPR两种血清学试验100阳性4.接受抗梅治疗的婴儿，随访18个月后TPPA（+）/RPR（-）可确诊为胎传梅毒 5.常规梅毒血清学检测的是IgG抗体，不能检测到IgM抗体6.TPPA（-）/RPR（+）结果一般可排除梅毒螺旋体感染 7.TPPA滴度检测是临床治疗梅毒效果评价的重要参考指标 现在学习的是第2页，共51页3梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（2 2）

2、8.新生儿血清TPPA（+）/RPR（+），可诊断为先天梅毒9.梅毒初筛可采用任何一种血清学检测方法10.RPR和TRUST的方法原理相同，所以两种方法的定量试验滴度结果一定一致11.TPPA（+）/RPR（-）可能是极早期梅毒12.ELISA法检测阳性，TPPA复检阴性，最终结果报告：TPPA试验阴性，解释ELISA法为假阳性。现在学习的是第3页，共51页实验室检测的目的？早期发现早期发现临床诊断临床诊断有效治疗有效治疗精准医疗精准医疗疫情报告疫情报告检测方法检测策略结果的解读和合理应用医生医生、检验、防保现在学习的是第4页，共51页结果如何解读和合理应用现在学习的是第5页，共51页如何发挥

3、实验室检测作用实验室检测实验室检测 实验室诊断实验室诊断艾滋病检测策略最新进展（艾滋病检测策略最新进展（2015）v 确证（诊）试验 补充试验v 阳、阴性有、无反应v 增加了各种检测策略v 强调临床诊断 现在学习的是第6页，共51页梅毒是一个可以临床治愈的传染病病例诊断依据v病史v症状v实验室检查实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义现在学习的是第7页，共51页如和达到实验室检测的基本要求检测方法检测方法检测策略检测策略质量保证质量保证管理层面（行政、疾控）生产厂家医疗机构（医生、检验、防保）现在学习的是第8页，共51页常用梅毒实验室检测方法检测方法病原学检测梅毒螺旋体血清学试验非梅毒螺旋

4、体血清学组织病理学检测白细胞检测蛋白检测现在学习的是第9页，共51页未经治疗的梅毒病人的自然病程感染梅毒螺旋体感染梅毒螺旋体一期梅毒一期梅毒二期梅毒二期梅毒隐形梅毒隐形梅毒三期梅毒三期梅毒梅毒树胶肿梅毒树胶肿脊髓痨脊髓痨,麻痹性痴呆麻痹性痴呆心血管梅毒心血管梅毒72%30%终生隐形梅毒终生隐形梅毒中枢神经系统感染中枢神经系统感染28%感染梅毒螺旋体感染梅毒螺旋体2-62-6周周1-3月月 1-3月月2-50年年现在学习的是第10页，共51页病原学检查v原理：一期、二期梅毒时一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边

5、缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。v方法：（1）暗视显微镜检查 （2）镀银染色法 （3）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。现在学习的是第11页，共51页病原学检查的临床意义v螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。v如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。现在学习的是第12页，共51页梅毒血清学检测方法(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类

6、方法。现在学习的是第13页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）。v未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。中华人民共和国卫生行业中华人民共和国卫生行业标准标准 WS/T4912016:梅梅毒非特异性抗体检测操作指南毒非特异性抗体检测操作指南-发布发布 -实施实施现在学习的是第14页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学原理v方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验

7、室试验(VDRL)等。v基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇v抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见v上述方法的敏感性和特异性都基本相似现在学习的是第15页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图现在学习的是第16页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？水平旋转仪，转速？转幅？2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1 1滴抗原滴抗原n反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结果？滴/mL，1滴=？ul现在学习的是第17页

8、，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅水平旋转仪，转速、转幅 2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1 1滴抗原滴抗原n反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结果60滴/mL，1滴=17ul100r/min约18mm现在学习的是第18页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验n稀释夜准备：在反应纸板圈内反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，

9、并涂布整个圈内。n 下同定性试验。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512现在学习的是第19页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验n稀释夜准备：在反应纸板圈内反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512现在学习的是第20页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义v非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。v因治疗后血

10、清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒现症感染和既往感染vVDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。现在学习的是第21页，共51页血清固定血清固定早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后v 一期梅毒1年后转为阴性v 二期梅毒2年后转为阴性。v 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。血清固定：一直保持低滴度，不转阴血清固定：一直保持低滴度，不转阴 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点现在学习的是第22页，共51页1:1

11、1:21:81:41:16非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点前带现象前带现象现在学习的是第23页，共51页非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点假阳性反应假阳性反应v技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可排除。v生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进行排除。现在学习的是第24页，共51页梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。v感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。现在学习的是第25页，共51页

12、梅毒螺旋体抗原血清学试验方法v梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)v 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)v 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）v 化学发光免疫分析法（CLIA）v 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)v 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）v梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）-IgM、IgG现在学习的是第26页，共51页TPPATPPAvTPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。v TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。现在学习的是第27页，共51页+明胶颗

13、粒明胶颗粒梅毒抗原梅毒抗原+抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒血液中抗体血液中抗体抗原抗体凝集抗原抗体凝集TPPATPPA试验原理示意图现在学习的是第28页，共51页294+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+：粒子光滑覆盖大部分底 2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 1+：粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环 ：粒子沉集孔底，中央形成一小点 ：粒子紧密沉积孔底中央 TPPATPPA试验结果判读敏感性特异性病期一期二期隐性临床试验a100100100美国CDC8810010095a:均为RPR阳性标本现在学习的是第29页，共51页ELISA/ELISA/CLI

14、ACLIAvELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。v本法可用于大样本血清检测。化学发光法的临床应用意义基本同ELISA化学发光法的敏感性？现在学习的是第30页，共51页31梅毒免疫层析快速检测方法（全血法）现在学习的是第31页，共51页梅毒免疫层析快速检测方法（血清、血浆法）现在学习的是第32页，共51页梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义v作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验，排除RPR 假阳性。v不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进

15、行诊断。v不能作为疗效观察的指标。现在学习的是第33页，共51页34梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）试验结果参考结果解释*梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性阳性可能为现症梅毒阴性阳性非梅毒螺旋体血清试验假阳性阳性阴性临床治愈的早期梅毒（既往感染者）或极早期梅毒阴性阴性排除梅毒感染或极早期梅毒问题：此结果解释适用于先天（胎传）梅毒吗？问题：此结果解释适用于先天（胎传）梅毒吗？现在学习的是第34页，共51页35梅毒IgMIgM抗体（TP-IgMTP-IgM）IgM抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。IgM分子比IgG较大，所以IgM抗体不能通过胎盘屏障。而母亲的

16、IgG抗体可以通过胎盘屏障传给胎儿。因此若在新生儿血中检测到IgG抗体不能作为先天梅毒的诊断依据，而IgM抗体可为先天梅毒的诊断依据。IgM抗体检测其特异性较高，但敏感性较低。因此，IgM抗体检测阴性，不能排除先天梅毒感染。现在学习的是第35页，共51页36先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断标准先天梅毒的诊断标准梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST检测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升1.满18月龄后，TPPA检测阳性现在学习的是第36页，共51页37所生新生儿采集

17、新生儿静脉血，进行“非梅”定量检测滴度母亲滴度的4 倍，母亲孕期接受规范性梅毒治疗滴度 母亲滴度的4 倍，无论母亲孕期是否接受规范治疗有条件进行梅毒螺旋体暗视野检查或梅毒螺旋体I g M抗体检测婴儿3、6 月龄进行“非梅”定量检测观察临床症状每3 个月同时进行“非梅”定量检测 和“T P”检测3 次检测结果均为阴性反应排除先天梅毒感染，停止观察任何一次“T P”检测结果为阴性反应，“非梅”检测阴性反应或低滴度水平诊断先天梅毒感染进行传染病信息报告，提供规范治疗、随访及转介服务给予儿童先天梅毒规范治疗和随访给予儿童预防性治疗没有条件进行梅毒螺旋体暗视野检查或梅毒螺旋体I g M抗体检测阴性反应阳

18、性反应母亲孕期接受过规范性梅毒治疗母亲孕期未接受过规范性梅毒治疗滴度母亲滴度的4 倍，母亲孕期未接受规范性梅毒治疗任何一次“非梅”检测结果由阴转阳，或滴度不下降反而上升，同时“T P”检测结果为阳性反应说明：图中“非梅”指“非梅毒螺旋体抗原血清学试验”“T P”指“梅毒螺旋体抗原血清学试验”1 8 月龄后“T P”检测结果仍为阳性反应任何一次“非梅”检测结果由阴转阳，或滴度不下降反而上升进行“T P”检测阳性反应尽快复检“T P”；给予儿童规范治疗和随访阴性反应阴性反应阳性反应梅毒感染产妇分娩前进行“非梅”定量检测现在学习的是第37页，共51页梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测策略现在学习的是第

19、38页，共51页梅毒实验室检测策略思考39非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验n排除试验假阳性排除试验假阳性n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验：初筛试验 TPPA：确证试验：确证试验现在学习的是第39页，共51页40现在学习的是第40页，共51页41阳性 梅毒螺旋体血清 试验（ELISA）阴性 报告：ELISA 阴性阴性 阳性 RPR 定性/定量试验 阴性 推荐 TPPA 复检 阳性 报告：ELISA 阳性 RPR

20、 阳性及滴度 果 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阳性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阴性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 RPR 阴性 果 现在学习的是第41页，共51页42接 受 初 次 产 前 保 健 的 孕 产 妇选 用 一 种 梅 毒筛 查 试 验 进 行筛 查采 用 梅 毒 螺 旋 体 抗 原 血 清 学 试 验*（如 TP P A、ELISA或 快 速 试 验 等）采 用 非 梅 毒 螺 旋 体 抗 原 血 清 学试 验（如 R P R 或 TR U ST等）采 用 非 梅 毒 螺 旋 体抗 原 血 清 学 试 验进 行 复 检采 用 梅 毒 螺

21、旋 体 抗 原血 清 学 试 验 进 行 复 检报 告“梅 毒 螺 旋 体抗 原 血 清 学 试 验”阴 性诊 断 梅 毒 感 染进 行 传 染 病信 息 报 告继 续 进 行 常 规产 前 保 健继 续 进 行 常 规产 前 保 健阴 性 反 应阳 性 反 应阴 性 反 应阳 性 反 应给 予 两 个 疗 程 的规 范 治 疗；进 行 非 梅 毒 螺 旋 体抗 原 血 清 学 试 验定 量 检 测 和 随 访住 院 分 娩，产 时安 全 助 产；所 生 儿 童 按 要 求 处 理阴 性 反 应阳 性 反 应报 告“非 梅 毒螺 旋 体 抗 原 血 清 学试 验”阴 性既 往 感 染 梅 毒极

22、 早 期 梅 毒部 分 晚 期 梅 毒立 即 给 予 孕 妇 一个 疗 程 的 治 疗每 月 进 行 非 梅 毒螺 旋 体 抗 原 血 清学 试 验 定 量 检 测连 续 三 个 月出现1次阳性结果三 次 检 测结 果 均 为阴 性 反 应孕 产 妇 按 照未 感 染 梅 毒处 理孕 产 妇 按 照未 感 染 梅 毒处 理阳 性 反 应阴 性 反 应*说 明：有 条 件 地 区 首 选 梅 毒 螺 旋 体 抗 原 血 清 学 试 验 进 行 筛 查。现在学习的是第42页，共51页43阳性 梅毒螺旋体血清 试验（ELISA）阴性 报告：ELISA 阴性阴性 阳性 RPR 定性/定量试验 阴性 推

23、荐 TPPA 复检 阳性 报告：ELISA 阳性 RPR 阳性及滴度 果 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阳性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阴性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 RPR 阴性 果 梅毒筛查最佳策略 现在学习的是第43页，共51页现在学习的是第44页，共51页452015非梅毒螺旋体血清学试剂评估非梅毒螺旋体血清学试剂评估试剂简称 敏感性(%)特异性(%)功效率(%)上海荣盛TRUST 99.03 100.00 99.67上海科华RPR 100.00 98.51 99.01北京万泰TRUST 98.06 99.50 99.01 厦门英科TRUST

24、 96.12 100.00 98.68 北京金豪TRUST 98.06 98.51 98.36 现在学习的是第45页，共51页46方法 试剂简称 敏感性(%)特异性(%)功效率(%)万泰 98.28 100.00 99.34 科华 97.41 100.00 99.01 三维 97.41 100.00 99.01 丽珠 97.41 100.00 99.01 ELISA 现代 97.41 100.00 99.01 金豪 97.41 100.00 99.01 英科 98.28 98.94 98.68 科卫 96.55 100.00 98.68 华大 95.69 100.00 98.36 发光 科美

25、97.41 99.47 98.68 2015梅毒螺旋体抗原血清学试剂评估梅毒螺旋体抗原血清学试剂评估现在学习的是第46页，共51页实验室生物安全防护要求l一级生物安全防护水平：适用于第四类病原微生物l二级生物安全防护水平：适用于第三类病原微生物二级生物安全防护水平：适用于第三类病原微生物l三级生物安全防护水平：适用于第二类病原微生物l四级生物安全防护水平：适用于第一类病原微生物47一般临床血标本处理是否需要在几级生物安全实验室操作一般临床血标本处理是否需要在几级生物安全实验室操作?现在学习的是第47页，共51页梅毒实验室安全生物暴露a)不慎发生标本污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等

26、敷料加上消毒液（如10%次氯酸钠，75%乙醇等）消毒30分钟以上，然后再清洗。如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。b)实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用清水反复漱口，必要时根据实际情况用药。c）被刺伤、划伤等，应先挤压后冲洗，再擦以碘酒等简单处理后，立即到医院接受青霉素治疗，同时应做梅毒血清学检测（？）d)出现与所检测对检测对象引起的疾病相似症状时，立即就医。48现在学习的是第48页，共51页49梅毒控制规划中期评估梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（梅毒实验室检测知识调查（1）1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋体特异性抗体通常会终身阳性

27、 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初筛3.二期梅毒时，TPPA和RPR两种血清学试验100阳性4.接受抗梅治疗的婴儿，随访18个月后TPPA（+）/RPR（-）可确诊为胎传梅毒 5.常规梅毒血清学检测的是IgG抗体，不能检测到IgM抗体6.TPPA（-）/RPR（+）结果一般可排除梅毒螺旋体感染 7.TPPA滴度检测是临床治疗梅毒效果评价的重要参考指标 现在学习的是第49页，共51页50梅毒控制规划中期评估梅毒控制规划中期评估-梅毒实验室检测知识调查（梅毒实验室检测知识调查（2）8.新生儿血清TPPA（+）/RPR（+），可诊断为先天梅毒9.梅毒初筛可采用任何一种血清学检测方法10.RPR和TRUST的方法原理相同，所以两种方法的定量试验滴度结果一定一致11.TPPA（+）/RPR（-）可能是极早期梅毒12.ELISA法检测阳性，TPPA复检阴性，最终结果报告：TPPA试验阴性，解释ELISA法为假阳性。现在学习的是第50页，共51页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第51页，共51页