微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察.ppt

《微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察.ppt（26页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、现在学习的是第1页，共26页现在学习的是第2页，共26页现在学习的是第3页，共26页现在学习的是第4页，共26页图图1-1-2 光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像现在学习的是第5页，共26页D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰现在学习的是第6页，共26页u根据公式根据公式，增大分母，使得，增大分母，使得D值减小，分值减小，分辨率增大。辨率增大。现在学习的是第7页，共26页现在学习的是第8页，共26页三三.显微镜油镜观察操作方法显微镜油镜观察操作方法 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后将油镜转到在高倍镜或低倍镜下找到要观

2、察的样品区域后，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏油滴加香柏油，从侧面注视，用，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。现在学习的是第9页，共26页p 油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦

3、镜纸擦去残留的二甲苯去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。现在学习的是第10页，共26页一、实验目的一、实验目的 进一步熟悉使用油镜观察微生物的方法，初步认进一步熟悉使用油镜观察微生物的方法，初步认识细菌的基本形态和特殊结构特征识细菌的基本形态和特殊结构特征四、四、细菌形态的观察细菌形态的观察现在学习的是第11页，共26页二、观察内容二、观察内容基本形态：杆菌，球菌基本形态：杆菌，球菌（注意大小、染色性、排列（注意大小、染色性、排列）特殊结构：鞭毛，芽胞，荚膜特殊结构：鞭毛，芽胞，荚膜（先找到菌体，再（先找到菌体，再仔细观察特殊结构）仔细观察特殊结构）以画图的方式完成该实验的

4、报告以画图的方式完成该实验的报告现在学习的是第12页，共26页图下标示：图下标示：1 1、菌种：杆菌（大、菌种：杆菌（大肠杆菌，肠杆菌，G G-）2 2、放大倍数放大倍数3 3、观察方法、观察方法画图注意事项：画图注意事项：1 1、以圆圈表示视野、以圆圈表示视野 2 2、注意菌体大小比例合适、注意菌体大小比例合适 3 3、标出菌体颜色，显示典型排列方式、标出菌体颜色，显示典型排列方式 4 4、特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置、特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置现在学习的是第13页，共26页五、革兰氏染色五、革兰氏染色（一）、实验目的（一）、实验目的学习微生物涂片、革兰氏染色的基本技术学习微生

5、物涂片、革兰氏染色的基本技术现在学习的是第14页，共26页（二二）、革兰氏染色的工作原理革兰氏染色的工作原理革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽孢的杆革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。现阴性反应。现在学习的是第15页，共26页根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构差异来达到染色的目的的。差异来达到染色的目的的

6、。先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色；先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色；然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫碘复合物，从而碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。增强了染料与细菌的结合力。然后再用乙醇脱色处理然后再用乙醇脱色处理现在学习的是第16页，共26页经典法，四步法（经典法，四步法（p.30-32）现在学习的是第17页，共26页由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫碘不碘不易被洗脱而

7、保留在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。易被洗脱而保留在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫碘复碘复合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色（红色）合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色（红色）。现在学习的是第18页，共26页现在学习的是第19页，共26页（四）（四）、革兰氏染色的操作方法、革兰氏染色的操作方法无菌操作无菌操作涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色 水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检现在

8、学习的是第20页，共26页大肠杆菌大肠杆菌葡萄球菌葡萄球菌现在学习的是第21页，共26页（1 1）涂片：）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一小先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一小环培养环培养2424小时的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体于生理盐水中小时的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片，（分别于斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄涂片，（分别于斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均

9、匀，不可过于浓厚宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚现在学习的是第22页，共26页载玻片水滴菌体涂片现在学习的是第23页，共26页（2 2）干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥。干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥。（3 3）涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体。固定时通过火焰涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体。固定时通过火焰1212次即可。次即可。染色前必须固定细菌，其目的是：染色前必须固定细菌，其目的是：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。二是增加其对染料的亲和力。常用加热固定法。固定时尽量维持细胞原有的形态。二是增加其对染料的亲和力。常用加热固定法。固定

10、时尽量维持细胞原有的形态。注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞形态注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞形态。（4 4）初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为宜）初染初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为宜）初染1-21-2分钟分钟minmin，水洗。，水洗。（5 5）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min1min，水洗。，水洗。现在学习的是第24页，共26页（6 6）脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜，脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜，用用9595酒精滴洗至流出酒精刚

11、刚不出现紫色时为止，约酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约2030s2030s，立即用水冲净酒精。，立即用水冲净酒精。注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操作注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。色过度，阳性菌被误染成阴性菌。染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩甩去细胞上去细胞上的残水，以免染色液被稀释。的残水，以免染色液被稀释。现在学习的是第25页，共26页（7 7）复染：用番红液染复染：用番红液染12

12、min,12min,水洗。水洗。（8 8）镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴倍镜，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。注意：以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌注意：以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。，常常呈假阳性。（9 9）显微镜用毕后的处理（显微镜用毕后的处理（p.2p.26 6）油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头，但二甲苯量不油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头，但二甲苯量不可过多！可过多！现在学习的是第26页，共26页