微生物细胞的结构与功能 (4)课件.ppt
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1、关于微生物细胞的结构与功能(4)第1页,此课件共52页哦细菌细胞的模式构造见图22。其中把一般细菌都有的构造称一般构造,而把部分细菌具有的或一般细菌在特殊环境下才有的构造称为特殊构造。第2页,此课件共52页哦一、细胞壁一、细胞壁 细胞壁(cell wall)是位于细胞最外的一层厚实、坚韧的外被,主要由肽聚糖构成,有固定细胞外形和保护细胞等多种生理功能。细胞壁的观察:通过染色、质壁分离或制成原生质体后再在光学显微镜下观察,可证实细胞壁的存在;用电子显微镜观察细菌超薄切片等方法,更可确证细胞壁的存在。细胞壁的主要功能有:固定细胞外形和提高机械强度,从而使其免受渗透压等外力的损伤,例如,有报道说大肠
2、杆菌的膨压可达2.03105Pa(2个大气压,相当于汽车内胎的压力);为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需,失去了细胞壁的原生质体,也就丧失了这些重要功能;阻拦酶蛋白和某些抗生素等大分子物质进入细胞,保护细胞免受溶菌酶、消化酶和青霉素等有害物质的损伤;赋予细菌具有特定的抗原性、致病性以及对抗生素和噬菌体的敏感性。第3页,此课件共52页哦缺壁细菌的几种形式:缺壁细菌的几种形式:原生质体:指在人工条件下用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁的合成后,所留下的仅由细胞膜包裹着的脆弱细胞,一般由革兰氏阳性菌形成;球状体或原生质球:指还残留部分细胞壁的原生质体,一般由革兰氏阴性细菌所形成;L型细菌:1
3、935年时,在英国李斯德预防医学研究所中发现一种由自发突变而形成的细胞壁缺损的细菌,由于李斯德(Lister)研究所的第一字母是“L”,故称L型细菌。第4页,此课件共52页哦细胞壁的构造和成分较复杂,图2-3用对比方式表示革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌细胞壁构造的差别。第5页,此课件共52页哦革兰氏阳性细菌和阴性细菌细胞壁成分的主要差别可见表2-1。第6页,此课件共52页哦1.1.革兰氏阳性菌的细胞壁革兰氏阳性菌的细胞壁 革兰氏阳性菌的细胞壁的特点是厚度大(20-80nm)和化学组分简单,一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。(1)(1)肽聚糖肽聚糖 它的肽聚糖层厚约2080nm,由40层左右网
4、状分子所组成。肽聚糖分子是由肽与聚糖两部分组成,其中肽有四肽尾和肽桥两种,聚糖则由N-乙酰葡糖胺与N-乙酰胞壁酸相互连接而成。网状的肽聚糖大分子实际上是由大量小分子单体聚合而成的,每一肽聚糖单体含有三个组成部分:双糖单位,即由一个N-乙酰葡糖胺与一个N-乙酰胞壁酸分子通过-1,4-糖苷键连接而成;四肽尾,即由四个氨基酸连起来的短肽连接在N-乙酰胞壁酸分子上。这四个氨基酸是按L型与D型交替排列的方式连接而成的,即L-丙氨酸D-谷氨酸L-赖氨酸D-丙氨酸;肽“桥”,在金黄色葡萄球菌中,肽桥为甘氨酸五肽。它起着连接前后两个四肽尾分子的桥梁作用。第7页,此课件共52页哦革兰氏阳性细菌肽聚糖单体的结构见
5、图2-4。第8页,此课件共52页哦(2)(2)磷壁酸磷壁酸磷壁酸是结合在革兰氏阳性菌的细胞壁上的一种酸性多糖,主要成分为甘油磷壁酸或核糖醇磷壁酸。它有两种类型,其一为壁磷壁酸,它与肽聚糖分子间发生共价结合,可用稀酸或稀碱进行提取;其二为膜磷壁酸(即脂磷壁酸),由甘油磷酸链分子与细胞膜上的磷脂进行共价结合后形成,可用45热酚水提取,也可用热水从脱脂的冻干细菌中提取。第9页,此课件共52页哦磷壁酸的主要生理功能为磷壁酸的主要生理功能为:因带负电荷,故可与环境中的Mg2+等阳离子结合,提高这些离子的浓度,以保证细胞膜上一些合成酶维持高活性的需要;增强革兰氏阳性致病菌(如A族链球菌)与其宿主间的粘连(
6、主要为膜磷壁酸);赋于革兰氏阳性菌以特异的表面抗原;提供某些噬菌体以特异的吸附受体。第10页,此课件共52页哦2 革兰氏阴性细菌的细胞壁革兰氏阴性细菌的细胞壁(1)肽聚糖 它的肽聚糖埋藏在外膜层之内,是仅由12层肽聚糖网状分子组成的薄层(23),含量约占细胞壁总重的10%,故对机械强度的抵抗力较革兰氏阳性菌弱。其结构单体与上述革兰氏阳性菌基本相同,差别仅在于:四肽尾的第3个氨基酸不是L-lys,而是被一种只有在原核微生物细胞壁上才有的内消旋二氨基庚二酸所代替:没有特殊的肽桥,其前后两个单体的连接仅通过甲四肽尾的第4个氨基酸的D-Ala的羧基与乙四肽尾的第3个氨基酸m-DAP的氨基直接相连,因而
7、只形成较为疏稀、机械强度较差的肽聚糖网套。(2)外膜 外膜位于革兰氏阴性细菌细胞壁外层,由脂多糖、磷脂和脂蛋白等若干种蛋白质组成的膜,有时也称为外壁。第11页,此课件共52页哦 脂多糖(脂多糖(LPS)是位于革兰氏阴性细菌细胞壁最外层的一层较厚(810nm)的类脂多糖类物质。它由类脂A、核心多糖和O-特异侧链三部分所组成。其主要功能有其主要功能有:是革兰氏阴性细菌致病物质内毒素的物质基础;与磷壁酸相似,也有吸附Mg2+、Ca2+等阳离子以提高这些离子在细胞表面的浓度的作用;由于LPS结构的变化,决定了革兰氏阴性细菌细胞表面抗原决定簇的多样性;是许多噬菌体在细胞表面的吸附受体。注意注意:脂多糖要
8、维持其结构的稳定性需要足量Ca2+的存在。如果用螯合剂EDTA去除Ca2+,LPS就解体。这时,革兰氏阴性细菌的内壁层肽聚糖就暴露出来,因而就可被溶菌酶所水解。第12页,此课件共52页哦脂多糖分子的结构较复杂,现表解如下:脂多糖分子的结构较复杂,现表解如下:第13页,此课件共52页哦(3)(3)外膜蛋白外膜蛋白外膜蛋白主要有:基质蛋白(孔蛋白):孔蛋白是一种三聚体结构,每一个亚单位的分子量为36000。由三聚体结构构成的充水孔道横跨外壁层,可通过分子量小于800900的亲水性营养物质,例如糖类(尤其是双糖)、氨基酸、二肽、三肽、青霉素和无机离子等。它使外壁层具有分子筛的功能;外壁蛋白(外膜蛋白
9、):是一类特异性的运送蛋白或受体,可把较大的分子,例如维生素B12、麦芽寡糖、核酸降解物以及铁离子螯合剂铁色素或肠螯合素等输送入细胞内;脂蛋白:种类很多,主要的是分子量为7200的脂蛋白,其作用是使细胞壁的外壁(膜)层牢固地连接在由肽聚糖所组成的内壁层上。第14页,此课件共52页哦(4)(4)周质空间周质空间又称壁膜间隙。在革兰氏阴性细菌中,一般指其外膜与细胞膜之间的狭窄空间(宽约1215nm),呈胶状。在周质空间中,存在着多种周质蛋白,包括:水解酶类,例如 蛋白酶、核酸酶等;合成酶类,例如肽聚糖合成酶;结合蛋白(具有运送营养物质的作用);受体蛋白(与细胞的趋化性相关)。周质蛋白可通过渗透休克
10、法或称“冷休克”的方法释放。此法是根据突然改变渗透压并使细胞发生物理性裂解的原理。渗透休克法的主要步骤是:将细菌放在用Tris缓冲液配制、含EDTA的20蔗糖溶液中保温,使其发生质壁分离,接着快速地用4的0.005mol/L MgCl2溶液稀释并降温,使细胞外膜突然破裂并释放周质蛋白。经离心即可从上清液中提取周质蛋白。第15页,此课件共52页哦3.3.革兰氏染色法革兰氏染色法a a染色步骤:染色步骤:操作分初染、媒染、脱色和复染四步其细节为:甲、乙两种细菌经结晶紫溶液初染后,分别染上了紫色,经碘液媒染,结晶紫就与碘分子形成了一个分子量较大的染色较牢固的复合物。接着就用95乙醇进行脱色。这时凡已
11、染上的紫色易被乙醇洗脱者,则又成为无色的菌体(如乙菌),反之,则仍为紫色(如甲菌)。最后,再用红色染料沙黄(即番红,也可用其他红色染料代替)复染。结果甲菌仍能维持最初染上的紫色,而乙菌则被复染而呈红色,前者称革兰氏阳性菌,简称G+菌,后者则称为革兰氏阴性菌,简称G-菌。第16页,此课件共52页哦b b染色机制:染色机制:通过初染和媒染操作后,在细菌细胞的膜或原生质体上染上了不溶于水的结晶紫与碘的大分子复合物。革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密,故在用乙醇洗脱时,肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩,再加上它基本上不含类脂,故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙,因此,结晶紫与碘复合
12、物仍牢牢阻留在其细胞壁内,使其呈现紫色。反之,革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散,故遇乙醇后,肽聚糖网孔不易收缩,加上它的类脂含量高,所以当乙醇把类脂溶解后,在细胞壁上就会出现较大的缝隙,这样,结晶紫与碘的复合物就极易被溶出细胞壁,因此,通过乙醇脱色后,细胞又呈无色。这时,再经沙黄等红色染料进行复染,就使革兰氏阴性细菌获得了一层新的颜色红色,而革兰氏阳性菌则仍呈紫色(实为紫中带红)。第17页,此课件共52页哦二、细胞壁以内的构造二、细胞壁以内的构造原生质体原生质体1.1.细胞膜与间体细胞膜与间体 细胞膜细胞膜又称细胞质膜或质膜,是紧贴在细胞壁内侧的一层由磷脂和蛋白质组成的柔软、富有
13、弹性的半透性薄膜,厚约为78nm,由磷脂和蛋白质组成。细胞膜的结构:细胞膜的结构:在电子显微镜下观察时,细胞膜呈明显的双层结构在上下两暗色层间夹着一浅色的中间层。这是因为,细胞膜的基本成分是由两层磷脂分子整齐地排列而成的。每一磷脂分子由一个带正电荷且能溶于水的极性头(磷酸端)和一个不带电荷、不溶于水的非极性尾(烃端)所构成。极性头朝向膜的内外两个表面,呈亲水性;而非极性的疏水尾(长链脂肪酸)则埋藏在膜的内层,从而形成一个磷脂双分子层。第18页,此课件共52页哦 磷脂双分子层通常呈液态,不同的内嵌蛋白(穿过全膜的、不对称地分布在膜的一侧或埋藏在磷脂双分子层内的)和周外蛋白可在磷脂双分子层液体中作
14、侧向运动,犹如漂浮在海洋中的冰山那样。细胞膜的功能细胞膜的功能:控制细胞内、外的物质(营养物质和代谢废物)的运送、交换;维持细胞内正常渗透压的屏障作用;合成细胞壁各种组分(LPS、肽聚糖、磷壁酸)和荚膜等大分子的场所;进行氧化磷酸化或光合磷酸化的产能基地;许多酶(-半乳糖苷酶、有关细胞壁和荚膜的合成酶、ATP酶)和电子传递链组分的所在部位;鞭毛的着生点和提供其运动所需的能量等。第19页,此课件共52页哦 间体间体(mesosome):由细胞膜内褶形成的一种管状、层状或囊状结构,一般位于细胞分裂部位或其邻近,其功能主要是促进细胞间隔的形成并与遗传物质的复制及其相互分离有关。2.2.细胞质和内含物
15、细胞质和内含物 定义定义:被细胞膜包围着的除核区外的一切透明、胶状、颗粒状物质,可总称为细胞质。主要成分主要成分:核糖体、贮藏物、各种酶类、中间代谢物、无机盐、染色体和质粒等,少数细菌还存在类囊体、羧酶体、伴孢晶体或气泡等构造。贮藏物:是一类由不同化学成分累积而成的不溶性沉淀颗粒,主要功能是贮存营养物。贮藏物种类贮藏物种类:a聚-羟丁酸(PHB)细胞内属于类脂性质的碳源类贮藏物,不溶于水,具有贮藏能量、碳源和降低细胞内渗透压的作用。第20页,此课件共52页哦b b异染粒异染粒:又称迂回体或捩转菌素,异染颗粒大小为0.51m,它是无机偏磷酸的聚合物。其功能也是贮藏磷元素和能量,并可降低渗透压。c
16、 c藻青素和藻青蛋白藻青素和藻青蛋白(一种辅助光合色素):通常存在于蓝细菌中,它们属于内源性的氮素贮藏物,同时还具有贮藏能源的作用。d d多糖类贮藏物多糖类贮藏物:包括糖原和淀粉类羧酶体羧酶体:在若干化能自养细菌中含有的多角形细胞内含物,又称为羧化体。内含1,5-二磷酸核酮糖羧化酶,在自养细菌的CO2固定中起着关键的作用。气泡气泡:在许多光合营养型无鞭毛运动的水生细菌的细胞内常含有为数众多的充满气体的小泡囊,称为气泡,它由仅2nm厚的蛋白质膜所包围,具有调节细胞比重以使其漂浮在合适水层中的作用。第21页,此课件共52页哦3.核质体核质体 核质体是原核生物所特有的无核膜结构、无固定形态的原始细胞
17、核,又称核区、拟核或核基因组等。外形多变,用富尔根Feulgen染色法染色后,可以见到呈紫色的形状不定的核质体。细菌的核质体是一个大型环状的双链DNA分子,长度为0.253mm。每个细胞所含的核质体数与其生长速度有关,一般为14个。在快速生长的细菌中,核区DNA可占细胞总体积的20%。核质体是负载细菌遗传信息的物质基础。4.4.芽孢芽孢 某些细菌在其生长发育后期,可在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体,称为芽孢。由于每一细胞仅形成一个芽孢,故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等的能力。例如,肉毒梭菌在100沸水中,要经过5.09.5小时才
18、被杀死,至121时,平均也要经10分钟才能杀死。芽孢的抗紫外线的能力,一般要比其营养细胞强一倍。巨大芽孢杆菌芽孢的抗辐射能力要比E.coli的营养细胞强36倍。第22页,此课件共52页哦产芽孢细菌的种类产芽孢细菌的种类 最主要的是革兰氏阳性杆菌的两个属,即好氧性的芽孢杆菌属和厌氧性的梭菌属。芽孢的构造芽孢的构造 第23页,此课件共52页哦有关芽孢结构的几点说明有关芽孢结构的几点说明:A.A.芽孢囊就是指母细胞的空壳。B.B.孢外壁位是母细胞的残留物,主要成分是脂蛋白,也含少量氨基糖,透性差。C.C.芽孢衣对溶菌酶、蛋白酶和表面活性剂具有很强的抗性,对多价阳离子的透性很差。D D.皮层在芽孢中占
19、有很大体积(3660),内含大量为芽孢皮层所特有的芽孢肽聚糖,特点是呈纤维束状、交联度小、负电荷强、可被溶菌酶水解,还含有占芽孢干重710的DPA-Ca(吡啶二羧酸钙盐),不含磷壁酸。皮层的渗透压可高达20个大气压左右,含水量约70,略低于营养细胞(约80)。E.E.芽孢的核心又称芽孢的原生质体,它是由芽孢壁、芽孢膜、芽孢质和核区四部分构成,内中含水量极低。除芽孢膜中不含磷壁酸和芽孢质中含DPA-Ca外,核心中的其他成分与一般细胞相似。第24页,此课件共52页哦芽孢形成芽孢形成:芽孢形成的过程芽孢形成的过程:a.束状染色质形成;b.细胞膜内陷,细胞发生不对称分裂,其中小体积部分即为前芽孢;c.
20、前芽孢的双层隔壁形成,这时抗辐射性提高;d.在上述两层隔壁间充填芽孢肽聚糖后,合成DPA,累积钙离子,开始形成皮层,折光率增高;e.芽孢衣合成结束;f.皮层合成完成,芽孢成熟,抗热性出现;g.芽孢囊裂解,芽孢游离。第25页,此课件共52页哦芽孢形成过程的图解说明芽孢形成过程的图解说明第26页,此课件共52页哦芽孢的萌发芽孢的萌发 定义:定义:由休眠状态的芽孢变成营养状态的细菌的过程,称为芽孢的萌发。萌发的过程主要分活化、出芽和生长三个阶段。诱导活化的方法诱导活化的方法:a.短期加热;b.用低pH、强氧化剂处理;c.加入萌发剂。例如,枯草芽孢杆菌的芽孢经7天休眠后,用60热处理5分钟即可促进其发
21、芽。萌发剂的定义萌发剂的定义:有些的化学物质也可显著促进芽孢的发芽,称为萌发剂。常用的萌发剂:常用的萌发剂:L-丙氨酸、Mn2+、表面活性剂(n-十二烷胺)和葡萄糖等。说明:说明:由于活化作用是可逆的,故处理后必须立即将它接种到合适的培养基中去。第27页,此课件共52页哦芽孢发芽的过程芽孢发芽的过程 芽孢衣中富含半胱氨酸的蛋白质的三维空间结构发生可逆性的变化,使芽孢的透性增加,并促进与发芽有关的蛋白酶活动。接着,芽孢衣上的蛋白质逐步降解,外界阳离子不断进入皮层,随之皮层发生膨胀、溶解和消失。于是外界的水分不断进入芽孢的核心部分,使核心膨胀、各种酶类活化,并开始合成细胞壁。在发芽的过程中,DPA
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