恩普生化检验基础课件.ppt

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1、恩普生化检验基础第1页，此课件共58页哦目 录第2页，此课件共58页哦概概 述述 临床生化检验：主要是运用物理学、化临床生化检验：主要是运用物理学、化学、生物物学等实验室技术和方法，通过学、生物物学等实验室技术和方法，通过感官、试剂反应、仪器分析和动物实验等感官、试剂反应、仪器分析和动物实验等手段，对病人的血液、体液、分泌液、排手段，对病人的血液、体液、分泌液、排泄物等标本进行检验，以获得反映机体功泄物等标本进行检验，以获得反映机体功能状态、病理变化或病因等的客观资料。能状态、病理变化或病因等的客观资料。第3页，此课件共58页哦标本种类：标本种类：血液血液 尿液尿液 脑脊液脑脊液 胸腹水胸腹水

2、 精液精液 对对 象象胃液胃液十二指肠液十二指肠液羊水羊水唾液唾液汗液汗液组织液组织液第4页，此课件共58页哦血血 液液第5页，此课件共58页哦血液的组成血液的组成血液由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液。血液由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液。血细胞：血细胞：4550血血 浆：浆：5055 水分：水分：9192 蛋白质蛋白质 有机物有机物 无机盐无机盐 代谢产物代谢产物第6页，此课件共58页哦血液的组成血液的组成 全血：离体血液立即与适量抗凝剂混合，全血：离体血液立即与适量抗凝剂混合，轻轻混匀，则可避免凝固，从而轻轻混匀，则可避免凝固，从而 得到抗凝全血。得到抗凝全血。血浆：将抗凝全血在一定条

3、件下将其离血浆：将抗凝全血在一定条件下将其离 心沉淀后的上层浅黄色的液体。心沉淀后的上层浅黄色的液体。血清：离体血液自行凝固收缩析出淡黄血清：离体血液自行凝固收缩析出淡黄 色透明的液体。色透明的液体。第7页，此课件共58页哦 血清中缺少了凝血系统中的某些凝血因子（凝血血清中缺少了凝血系统中的某些凝血因子（凝血过程中被消耗）如凝血因子过程中被消耗）如凝血因子（纤维蛋白原）、凝（纤维蛋白原）、凝血因子血因子（凝血酶原）、凝血因子（凝血酶原）、凝血因子（易变因子）（易变因子）、凝血因子、凝血因子（抗血友病球蛋白（抗血友病球蛋白AHGAHG）等。）等。血液的组成血液的组成第8页，此课件共58页哦分析物

4、分析物 与血浆均值比较的差异与血浆均值比较的差异血清与血浆差异的原因血清与血浆差异的原因 钾钾 +6.2+6.2细胞的溶解、特别是血小板细胞的溶解、特别是血小板 无机磷无机磷+10.7+10.7来自细胞的释放来自细胞的释放 总蛋白总蛋白-5.2-5.2纤维蛋白原的作用纤维蛋白原的作用 氨氨+38+38血小板溶解、谷胺酰胺水解血小板溶解、谷胺酰胺水解 乳酸乳酸+22+22细胞释放细胞释放 除了血小板溶解外，有时候血清高钾因溶血与极度的白细除了血小板溶解外，有时候血清高钾因溶血与极度的白细胞溶解有关（白细胞计数胞溶解有关（白细胞计数50 G/L50 G/L）。考虑到血小板对全）。考虑到血小板对全血

5、的影响，可以推算：血小板计数达血的影响，可以推算：血小板计数达100 G/L100 G/L，即平均使，即平均使血清与血浆的钾含量差血清与血浆的钾含量差0.11 mmol/L0.11 mmol/L。血清与肝素血浆的差异（一）血清与肝素血浆的差异（一）第9页，此课件共58页哦总蛋白总蛋白白蛋白白蛋白TSHTSH转铁蛋白转铁蛋白ASTAST肌酸激酶肌酸激酶总胆红素总胆红素钠钠铁铁胆碱酯酶胆碱酯酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶直接胆红素直接胆红素甘油三酯甘油三酯LDHLDH无机磷无机磷钾钾GGTGGT三碘甲状腺素三碘甲状腺素乳酸乳酸血清与肝素血浆的差异（二）血清与肝素血浆的差异（二）第10页，此课件共58页哦标

6、本的采集标本的采集 毛细血管法：血球计数仪、微量分析等。毛细血管法：血球计数仪、微量分析等。静脉采血法：生化检验常用，真实反应。静脉采血法：生化检验常用，真实反应。动脉采血法：个别特殊检验，血气分析动脉采血法：个别特殊检验，血气分析 第11页，此课件共58页哦标本的采集标本的采集 抽血姿势抽血姿势抽血时间抽血时间饮食饮食运动运动溶血溶血脂血脂血药物药物第12页，此课件共58页哦标本的采集标本的采集（1）注射器和容器不干燥、不清洁；）注射器和容器不干燥、不清洁；（2）压脉带捆扎时间太长，淤血过久；）压脉带捆扎时间太长，淤血过久；（3）穿刺不顺损伤组织过多；）穿刺不顺损伤组织过多；（4）抽血速度太

7、快；）抽血速度太快；（5）血液注入容器时未取下针头或用力推）血液注入容器时未取下针头或用力推 出产生大量气泡；出产生大量气泡；（6）抗凝血用力振荡；）抗凝血用力振荡；（7）全血放置时间过久；）全血放置时间过久；（8）离心机速度过快。）离心机速度过快。第13页，此课件共58页哦标本的处理标本的处理 枸橼酸钠：出凝血疾病检验和枸橼酸钠：出凝血疾病检验和ESR；草酸钠：出凝血疾病检验；草酸钠：出凝血疾病检验；乙二酸四乙酸盐：乙二酸四乙酸盐：EDTA-K2/Na2，血，血RT；双草酸盐：草酸钾（钠）双草酸盐：草酸钾（钠）/草酸铵，草酸铵，Ht等；等；氟化钠：适于血糖，抑制糖酵解、血清酶；氟化钠：适于血

8、糖，抑制糖酵解、血清酶；肝素：多种生化分析，临床常用抗血栓药肝素：多种生化分析，临床常用抗血栓药 对部分生化项目有影响；对部分生化项目有影响；第14页，此课件共58页哦标本的处理标本的处理 用离心机在符合要求的转速下离心用离心机在符合要求的转速下离心10min得到生得到生化标本；化标本；转速选择：转速选择：RCF1.118L（r/1000）2 RCF：相对离心力，在生化检验分析中的：相对离心力，在生化检验分析中的 标本相对离心力在标本相对离心力在；L：离心半径，以：离心半径，以mm计算，即离心管至旋计算，即离心管至旋 转轴中心距离；转轴中心距离；r：转子每分钟转速。：转子每分钟转速。第15页，

9、此课件共58页哦 转速不够，离心不彻底，不能很好的将血清分离转速不够，离心不彻底，不能很好的将血清分离，在血清中容易夹杂纤维蛋白，在测试过程中容易堵，在血清中容易夹杂纤维蛋白，在测试过程中容易堵针，影响测试。针，影响测试。转速过高，容易造成溶血。转速过高，容易造成溶血。例：例：10cm离心半径的离心机，我们要得到生离心半径的离心机，我们要得到生化分析的合格标本，应选择化分析的合格标本，应选择之间转速，之间转速，离心离心10min即可。即可。标本的处理标本的处理第16页，此课件共58页哦标本的运输和保存标本的运输和保存 分离出的血清或血浆，运送过程中注意容分离出的血清或血浆，运送过程中注意容器的

10、密闭性、注意避光、避免剧烈震荡。器的密闭性、注意避光、避免剧烈震荡。不能及时检测或需保留以备复查时，一般密闭不能及时检测或需保留以备复查时，一般密闭存放于存放于410冰箱中，以免水分蒸发造成标本冰箱中，以免水分蒸发造成标本浓缩或细胞内外交换影响结果。浓缩或细胞内外交换影响结果。第17页，此课件共58页哦手手 段段第18页，此课件共58页哦检检 测测 仪仪 器器 进行设置参数、试剂位置、定标测试、质控测试进行设置参数、试剂位置、定标测试、质控测试后就可以上机测试标本。后就可以上机测试标本。保证生化结果准确性的因素除包括保证生化结果准确性的因素除包括质量质量外还包括整个检测系统的工作状态，检测系统

11、外还包括整个检测系统的工作状态，检测系统的工作状态保持最佳，除了保证仪器所在实验的工作状态保持最佳，除了保证仪器所在实验室的环境，室的环境，的正确编制，的正确编制，等都是保证检测质等都是保证检测质量的重要方面。量的重要方面。第19页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂 干粉试剂：易保存、便宜，干粉试剂：易保存、便宜，复溶瓶间差大，效期短，浪费；复溶瓶间差大，效期短，浪费；液体试剂：稳定性好，效期长，浪费少；液体试剂：稳定性好，效期长，浪费少；双双 试试 剂：消除干扰物影响；剂：消除干扰物影响；第20页，此课件共58页哦试剂指示系统和化学原理试剂指示系统和化学原理第21页，此课件共58页哦检

12、检 测测 试试 剂剂 NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、-HBDH、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+、CO2等。第22页，此课件共58页哦：R1：NADH、乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-丙氨酸、-酮戊二酸 ALTL-丙氨酸+-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 LDH丙酮酸+NADH+H+L-乳酸+NAD+H2O检检 测测 试试 剂剂第23页，此课件共58页哦 p-NP

13、和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、r-GT、AMY等。检检 测测 试试 剂剂第24页，此课件共58页哦ALP为例：为例：R1：AMP缓冲液、MgCl2 R2：对硝基苯磷酸盐 ALP对硝基苯磷酸盐+H2O 磷酸盐+对硝基苯酚检检 测测 试试 剂剂第25页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂 H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LD

14、L-C、Glu（氧化酶法）、Cr、UA等。第26页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂GLU为例：为例：R1：4-氨基安替吡啉、抗坏血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、酚。GOD葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+H2O2 POD2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚 醌亚胺+4H2O第27页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂 特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4

15、、CRP等。第28页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂载脂蛋白为例：载脂蛋白为例：R1：磷酸盐缓冲液pH7.5,表面活性剂，防腐剂，稳定剂；R2：羊抗人apo Al（apo B）抗血清，防腐剂，稳定剂。抗原(血清中apo Al,apo B)+抗体(R2)缓冲环境 抗原抗体免疫复合物。第29页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂TP为例：为例：蛋白质中的肽键在碱性溶液中与铜离子作用产生紫红色络合物，导致540nm吸光度的增加，增加程度与蛋白质的含量成正比。碱性条件碱性条件 肽键肽键+Cu2+紫红色络合物紫红色络合物第30页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂 干粉试剂在干粉状态下保

16、存时间长，复溶后一般干粉试剂在干粉状态下保存时间长，复溶后一般不超过不超过3 3天；天；配成配成“工作液工作液”后保存时间很短，一般后保存时间很短，一般1 12 2天；天；双试剂不能擅自改成双试剂不能擅自改成“工作液工作液”。第31页，此课件共58页哦检检 测测 试试 剂剂 通过试剂空白吸光度、颜色、通过试剂空白吸光度、颜色、PHPH值、查看反值、查看反应曲线等来判断。应曲线等来判断。通过观看以往的正常反应曲线很重要；试剂空通过观看以往的正常反应曲线很重要；试剂空白吸光度在试剂说明书中说明，如白吸光度在试剂说明书中说明，如ASTAST、ALTALT，通常，通常应在应在1.5A1.5A以上等以上

17、等第32页，此课件共58页哦 生化试剂线性范围是指测试结果与反应度生化试剂线性范围是指测试结果与反应度R R成线成线性的范围，根据试剂说明书给定输入。性的范围，根据试剂说明书给定输入。生化试剂线性范围实际上是指该试剂所能生化试剂线性范围实际上是指该试剂所能检测到的样本最高浓度。检测到的样本最高浓度。当出现超出线性范围时，应对样本进行稀释后当出现超出线性范围时，应对样本进行稀释后重新测量。重新测量。检检 测测 试试 剂剂第33页，此课件共58页哦 酶酶 类类 底物代谢类底物代谢类 无机离子类无机离子类 特种蛋白类特种蛋白类检检 测测 试试 剂剂第34页，此课件共58页哦 肝功能肝功能 肾功能肾功

18、能 血糖血糖 血脂血脂 心肌酶谱心肌酶谱 检检 测测 试试 剂剂胰腺炎胰腺炎无机离子无机离子痛风痛风中毒中毒前列腺疾病前列腺疾病免疫性疾病免疫性疾病免疫炎症反应免疫炎症反应第35页，此课件共58页哦 GLOGLOTPTPALB A/GALB A/GALB/GLOALB/GLO O/P O/PAST/ALT I-BILAST/ALT I-BILT-BILT-BILD-BILD-BIL A A/B/BApoAApoA/ApoB CK-MM/ApoB CK-MMCKCKCK-MBCK-MB LDL-C LDL-CT-CHOT-CHOHDL-CHDL-CTG/5TG/5（重量单位）（重量单位）T-CH

19、OT-CHOHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（法定单位法定单位）AGAGNaNaClClHCOHCO3 3 NaNaK KClClHCOHCO3 3 检检 测测 试试 剂剂第36页，此课件共58页哦检检 测测 方方 法法 Lambert-Beer定律，即吸光度与溶液的浓度和定律，即吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比。液层的厚度的乘积成正比。A=-LogT=-Log(It/I0)=CL 当溶液液层的厚度当溶液液层的厚度L，光的波长和其它条件，光的波长和其它条件均固定不变均固定不变，则所得的吸光度与溶液中有色物，则所得的吸光度与溶液中有色物质的浓度成正比：质的浓度成正比：A=k

20、C，kL 第37页，此课件共58页哦 吸收光谱法：比色分析基于溶液对光的选择吸收光谱法：比色分析基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。性吸收而建立起来的一种分析方法。比浊法：通过监测物质对光的散射透射强度比浊法：通过监测物质对光的散射透射强度来测定的方法，比浊法是一种浊度测定，而不是来测定的方法，比浊法是一种浊度测定，而不是比色测定。比色测定。检检 测测 方方 法法第38页，此课件共58页哦 终点法终点法 一点终点法一点终点法 二点终点法二点终点法 动力学法（零级动力学法）动力学法（零级动力学法）固定时间法（固定时间法（一级动力学法）一级动力学法）检检 测测 方方 法法第39页，此

21、课件共58页哦 一点终点法公式：一点终点法公式：C C样本样本(A(A样本样本A A试剂空白试剂空白/A/A标准标准A A试剂空白试剂空白)C C标准标准 C C标准标准/（A A标准标准A A试剂空白试剂空白）C C样本样本（A A样本样本A A试剂空白试剂空白）反应度计算：反应度计算：R R A A样本样本A A试剂空白试剂空白检检 测测 方方 法法第40页，此课件共58页哦 二点终点法（样本空白法）公式：二点终点法（样本空白法）公式：C C样本样本(A(A样本样本A A样本空白样本空白/A/A标准标准A A标准空白标准空白)C C标准标准 C C标准标准/（A A标准标准A A标准空白标

22、准空白）C C样本样本（A A样本样本A A样本空白样本空白）反应度计算：反应度计算：R R A A样本样本A A样本空白样本空白检检 测测 方方 法法第41页，此课件共58页哦 因数法：因数法：A A样本样本A A样本样本A A试剂空白试剂空白 C样本样本（A样本样本/min）F A样本样本/min：每分钟样本吸光度变化率：每分钟样本吸光度变化率 反应度计算：反应度计算：检检 测测 方方 法法第42页，此课件共58页哦 摩尔消光系数法摩尔消光系数法：C C样本样本 A A样本样本/min/minV Vt t10001000 V VS Sd d F F VtVt10001000 VsVsd d

23、 10001000 d d (1+)：摩尔消光系数：摩尔消光系数 d:d:比色杯光径（比色杯光径（cmcm）Vt：总反应量：总反应量 V VS S：样品量：样品量 V VR R：试剂量：试剂量 检检 测测 方方 法法第43页，此课件共58页哦 固定时间法公式：固定时间法公式：A AA At4t4A At3 t3 C C样本样本(A A样本样本/A A标准标准)C C标准标准 C C标准标准/A A标准标准 C C样本样本 A A样本样本 反应度计算：反应度计算：R R（A At4t4A At3t3）/（t4t4t3t3）检检 测测 方方 法法第44页，此课件共58页哦检检 测测 方方 法法 免

24、疫比浊法：免疫比浊法：免疫透射比浊法：是在光源的光路方向免疫透射比浊法：是在光源的光路方向 测量透射强度，用终测量透射强度，用终 点法测量。点法测量。用于血清特种蛋白的检测。用于血清特种蛋白的检测。免疫散射比浊法：免疫散射比浊法：常用于血凝仪中。常用于血凝仪中。化学比浊法化学比浊法第45页，此课件共58页哦校校 准准 品品 K KC C标准标准/（A A标准标准A A试剂空白试剂空白）决定因素：决定因素：1、标准液浓度，最好是血清基质，否则、标准液浓度，最好是血清基质，否则可能会因为基质效应而影响定标效果。可能会因为基质效应而影响定标效果。2、标准液吸光度与试剂空白吸光度要准、标准液吸光度与试

25、剂空白吸光度要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您的仪器相当稳定，试剂如果您的仪器相当稳定，试剂是影响是影响K值的一个主要因素。值的一个主要因素。第46页，此课件共58页哦 更换试剂厂家；更换试剂厂家；同一试剂厂家但更换批号；同一试剂厂家但更换批号；试剂过长时间使用。试剂过长时间使用。校校 准准 品品第47页，此课件共58页哦校校 准准 品品 线性定标线性定标 单点线性单点线性 两点线性两点线性 多点线性多点线性 非线性定标非线性定标 SPline Logistic-Log 4PLogistic-Log 5P第48页，此课件共58页哦校校 准准

26、品品 第49页，此课件共58页哦校校 准准 品品 第50页，此课件共58页哦RCC1C2C3C4校校 准准 品品 第51页，此课件共58页哦校校 准准 品品 RCC1C2C3C4C5第52页，此课件共58页哦 校校 准准 品品F F VtVt10001000 VsVsd d 10001000 d d (1+)在临床测试中，外界环境因素、试剂本在临床测试中，外界环境因素、试剂本身底物浓度和身底物浓度和PHPH值，都无法提供和保证理论值，都无法提供和保证理论测量状态，所以应用理论测量状态，所以应用理论F F在测量时可能会在测量时可能会存在误差。因此推荐用校准存在误差。因此推荐用校准F F，它能消除

27、仪，它能消除仪器偏差，将试剂系统误差降器偏差，将试剂系统误差降到最低。到最低。第53页，此课件共58页哦校校 准准 品品 必须使用配套的试剂；必须使用配套的试剂；必须使用配套的高质量的校准品。必须使用配套的高质量的校准品。第54页，此课件共58页哦 将干粉校准品打开，按要求将干粉校准品打开，按要求准确准确加入定量加入定量的复溶液体（蒸馏水），在手心中划的复溶液体（蒸馏水），在手心中划“8”8”字字复溶，复溶，30min30min后上机测量和分装。后上机测量和分装。开盖时缓慢旋转启开瓶盖，不要开盖时缓慢旋转启开瓶盖，不要溅出溅出里面里面的粉末；复溶时不要剧烈振荡，避免产生大量的粉末；复溶时不要剧

28、烈振荡，避免产生大量气泡气泡；一定复溶完全，；一定复溶完全，30min30min后测量；分装后后测量；分装后冷冻避光冷冻避光保存，用前复溶，冻保存，用前复溶，冻溶溶一次一次后弃掉。后弃掉。校校 准准 品品第55页，此课件共58页哦操操 作作 人人 员员 操作人员的操作习惯是由我们装机工程师操作人员的操作习惯是由我们装机工程师规定规定和和指导指导养成的。操作人员的操作习惯直接养成的。操作人员的操作习惯直接反映装机人员的能力。反映装机人员的能力。第56页，此课件共58页哦作作 用用 1、用化学方法来阐述疾病的发生发展过程；、用化学方法来阐述疾病的发生发展过程；2、协助临床诊断某些疾病，鉴别诊断疾病；、协助临床诊断某些疾病，鉴别诊断疾病；3、协助分析病情、观察疗效、判断愈后；、协助分析病情、观察疗效、判断愈后；4、指导安全用药，监护治疗；、指导安全用药，监护治疗；5、术前准备；、术前准备；6、有助于预防疾病和职业病的普查，为预防、有助于预防疾病和职业病的普查，为预防疾病提供资料；疾病提供资料；7、有助于遗传病的预测。、有助于遗传病的预测。第57页，此课件共58页哦谢谢 谢谢第58页，此课件共58页哦