微生物常规鉴定技术课件.ppt

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1、关于微生物常规鉴定技术第1页，此课件共96页哦生化实验和血清学实验生化实验和血清学实验 常见的生化反应原理及现象 血清学试验原理第2页，此课件共96页哦一、概述一、概述（一）、什么是生化试验（一）、什么是生化试验?指通过利用生物化学的方法来测定微生指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。菌的类别、属种的试验。第3页，此课件共96页哦（二）（二）检验细菌的生化试验范围检验细菌的生化试验范围1、糖（醇）类代谢试验2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验5、毒性酶类试验第4页，此

2、课件共96页哦（三）生化试验的方法（三）生化试验的方法在培养物中加入某种底物与指示剂在培养物中加入某种底物与指示剂,经接经接种、培养后种、培养后,观察培养基的观察培养基的PH值变化。值变化。在培养物中加入试剂，观察它们同细菌在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。代谢产物所生成的颜色反应。根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。根据细菌对理化条件和药品的敏感性，根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。观察细菌的生长情况。第5页，此课件共96页哦（四）生化试验的注意事项（四）生化试验的注意事项1、待检菌应是新鲜培养物。培养、待检菌

3、应是新鲜培养物。培养1824h。2、待检菌应是纯种培养物。、待检菌应是纯种培养物。3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为多为24或或48小时。小时。4、应做必要的对照试验、应做必要的对照试验。5、提高阳性检出率，至少挑取、提高阳性检出率，至少挑取23待检的疑待检的疑似菌落分别进行试验。似菌落分别进行试验。第6页，此课件共96页哦二、糖醇类代谢试验二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（Methyl Red）试验 MR第7页，此课件共96页哦（一）（一）糖醇类发酵试验糖醇类发酵试验1.原理：

4、不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，有的只能分解有的只能分解12种糖醇种糖醇，有的分解糖醇能产，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。些特点，可鉴别细菌。第8页，此课件共96页哦常用的糖醇常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉多糖：菊糖、

5、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇第9页，此课件共96页哦2、试验方法：、试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置针作穿刺接种。置361.0 培养培养13天，每天，每天观察结果。天观察结果。第10页，此课件共96页哦3、结果观察和记录、结果观察和记录记录：记录：n产酸不产气，阳性，以产酸不产气，阳性，以“+”表示表示n产酸产气，阳性，以产酸产气，阳性，以“”表示表示n不产酸产气，阴性，以不产酸产气，阴性，以“-”表示表

6、示第11页，此课件共96页哦气泡导导管管气气泡泡气气泡泡阳性阳性阴性培养基变为黄培养基变为黄色色培养基未变色、无气培养基未变色、无气泡产生泡产生第12页，此课件共96页哦（二）葡萄糖氧化发酵（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验）试验1、原理：、原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为

7、产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。第13页，此课件共96页哦 2、方法、方法n取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约固体培养基上，在其中一管加入一层（约1Cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37培养培养24h天，每天观察结果。天，每天观察结果。第14页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录第15页，此课件共96页哦（三）（三）V-P试验试验1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基

8、甲醇，后丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在酰，在-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。）反应。第16页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法（1）奥梅拉（）奥梅拉（OMeara）法）法（2）贝立脱（）贝立脱（Barritt）氏法）氏法（3）快速法）快速法第17页，此课件共96页哦 奥梅拉法：奥梅拉法：将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于养基，于361 培养培

9、养48h，每每1ml培养液加培养液加奥梅拉奥梅拉OMeara试剂试剂0.1ml，摇动试管12min，静置于37恒温箱4h，或在4850 水浴放置2h后判定结果。第18页，此课件共96页哦 3、结果观察与记录、结果观察与记录（1）发酵管出现红色者，为阳性，）发酵管出现红色者，为阳性，记记 V-P +（2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记 V-P -第19页，此课件共96页哦 （四）甲基红试验（四）甲基红试验（MR）1、原理细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，、原理细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转

10、化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基大量酸性产物，使培养基PH值下降至值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红色，为以下，使甲基红指示剂变红色，为甲基红试验阳性甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液后形成酮、醇类中性产物，培养液pH5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性。验阴性。第20页，此课件共96页哦 2、试验方法：、试验方法：挑取新鲜的待试培养物少许，接种于挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养

11、基，于361 或或30（以（以30 较好）培养较好）培养35天，从第天，从第48h起，每日取培养液起，每日取培养液1ml，加入甲基红指，加入甲基红指示剂示剂12滴，立即观察结果。滴，立即观察结果。第21页，此课件共96页哦MR-VP试验原理及照片V-P第22页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录（1）呈鲜红色或橘红色）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为为阳性，呈淡红色为弱阳性，记弱阳性，记 MR +；（2）呈橘黄色或黄色为阴）呈橘黄色或黄色为阴性，记性，记MR -，迄至发，迄至发现阴性并培养至第现阴性并培养至第5天天仍为阴性，即可判定结仍为阴性，即可判定结果果MR+MR-第23

12、页，此课件共96页哦 复习题1、什么是生化试验、什么是生化试验?2、做生化试验要注意哪些事项？、做生化试验要注意哪些事项？3、简述糖醇类发酵试验的原理，写出其试验方、简述糖醇类发酵试验的原理，写出其试验方法和结果的记录法和结果的记录5、简述甲基红试验（、简述甲基红试验（MR）的原理，写出其试验）的原理，写出其试验方法和结果的记录方法和结果的记录第24页，此课件共96页哦（一）靛基质（吲哚）试验（一）靛基质（吲哚）试验（二）（二）H2S试验试验（三）尿素酶试验（三）尿素酶试验（四）氨基酸脱羧酶试验（四）氨基酸脱羧酶试验（五）苯丙氨酸脱氨酶试验（五）苯丙氨酸脱氨酶试验 (六六)明胶（明胶（Gela

13、tin）液化试验）液化试验三、氨基酸和蛋白质代谢试验三、氨基酸和蛋白质代谢试验第25页，此课件共96页哦（一）（一）靛基质试验靛基质试验1、原理、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成红色化哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌。合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌。第26页，此课件共96页哦 2、试验方法：、试验方法：所用试剂:（1）柯凡克(Kovacs)试剂;或（2）欧波试剂第27页，此课件共96页哦 将待检菌小量接种于培养基中，

14、于将待检菌小量接种于培养基中，于361 培养培养2448h时后，加入柯凡克试剂数时后，加入柯凡克试剂数滴，轻摇试管，呈红色者为阳性。滴，轻摇试管，呈红色者为阳性。或沿试管壁缓慢加入欧或沿试管壁缓慢加入欧-波试剂约波试剂约0.5ml覆盖液面，两液接触处呈现玫瑰红色覆盖液面，两液接触处呈现玫瑰红色者，为阳性反应，无红色者为阴性反应。者，为阳性反应，无红色者为阴性反应。第28页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录 呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+无红色者，为阴性反应，记-靛基质靛基质+第29页，此课件共96页哦（二）（二）硫化氢（硫化氢（H2S）试验）试验1、原理：、原理：某些细菌可分

15、解培养基中的含硫氨基酸或含某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物盐可生成黑色沉淀物PbS或或FeS，以此鉴别，以此鉴别细菌。细菌。第30页，此课件共96页哦2、试验方法：、试验方法：挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培养上，挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培养上，于于361培养培养2448h，观察结果。，观察结果。第31页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n培养基底部呈黑色，为阳性，记培养基底部呈黑色，为阳性，记+n培养基底部无黑色，为阴性，记培养基底部无黑色，为阴性，记-第3

16、2页，此课件共96页哦 （三）（三）尿素酶试验尿素酶试验1、原理：、原理：某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培养基变为碱性，使培养基中的生氨，氨使培养基变为碱性，使培养基中的酚红指示剂呈粉红色，培养基由黄色变为红酚红指示剂呈粉红色，培养基由黄色变为红色，为阳性。以此鉴别细菌。色，为阳性。以此鉴别细菌。第33页，此课件共96页哦2、试验方法：、试验方法：挑取大量培养挑取大量培养1824h的待试菌，浓密涂布的待试菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照。培养部作变色对照。培养2、4和和24h

17、分别观察一次分别观察一次结果，培养基变为粉红色为阳性，颜色不变者结果，培养基变为粉红色为阳性，颜色不变者为阴性。如阴性应继续培养至为阴性。如阴性应继续培养至4天，作最终判天，作最终判定。定。第34页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n培养基变呈粉红培养基变呈粉红色，为阳性，记色，为阳性，记+n培养基颜色不变，培养基颜色不变，为阴性，记为阴性，记 -阳性第35页，此课件共96页哦 （四）（四）氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验1、原理：某些细菌能产生氨基酸脱羧酶某些细菌能产生氨基酸脱羧酶,可使赖氨可使赖氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用酸、鸟氨酸生产脱羧作用,生成胺类物质和生成胺类物质和C

18、O2。胺类物质使培养基呈碱性变紫色，。胺类物质使培养基呈碱性变紫色，为阳性为阳性,如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌。如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌。第36页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法 取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培养取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培养基内和不含氨基酸的对照培养基内，在基内和不含氨基酸的对照培养基内，在361 培养培养14天（指示剂为溴甲酚紫），天（指示剂为溴甲酚紫），每天观察结果。每天观察结果。第37页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n试验管呈紫色，对照管呈黄色，为阳性，记试验管呈紫色，对照管呈黄色，为阳性，记+n试验管、对照管都呈黄色，为阴性

19、，试验管、对照管都呈黄色，为阴性，记记 -。第38页，此课件共96页哦试试验验管管对对照照管管阳性阳性+阴性阴性-对对照照管管变变黄黄试试验验管管变变黄黄第39页，此课件共96页哦阳性反应试验管颜色变化过程阳性反应试验管颜色变化过程紫色紫色黄色黄色紫色紫色原理：原理：对照管呈黄色，说明有细菌生长。在培养的早对照管呈黄色，说明有细菌生长。在培养的早期（期（1012h），细菌发酵葡萄糖产酸使培养液），细菌发酵葡萄糖产酸使培养液PH下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以后由于氨基酸脱羧生成胺，后由于氨基酸脱羧生成胺，PH又回升至碱性，又回升至碱性，指示剂显紫色。

20、指示剂显紫色。第40页，此课件共96页哦阳性反应试验管颜色变化过程：阳性反应试验管颜色变化过程：紫色紫色黄色黄色紫色紫色第41页，此课件共96页哦（五）（五）苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验1、原理：、原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴别细菌。别细菌。第42页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法n从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物，接从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物，接种于苯丙氨酸培养基上，在种于苯丙氨酸培

21、养基上，在361 培养培养1824h后，加入氯化铁溶液后，加入氯化铁溶液45滴，转动滴，转动试管，使试剂与菌苔表面充分接触，立即试管，使试剂与菌苔表面充分接触，立即观察结果。观察结果。第43页，此课件共96页哦3、结果观察与记录n试验管立即出现绿色，为阳性，记+n无色为阴性，记-。加氯化铁试剂出现绿色+第44页，此课件共96页哦（六）（六）明胶液化试验明胶液化试验1、原理、原理 有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步将多肽水解为氨基酸，明胶失去凝胶性质，将多肽水解为氨基酸，明胶失去凝胶性质，使

22、培养基由固态变为液态。使培养基由固态变为液态。第45页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法 挑取培养挑取培养1824h的待试菌，以较大量穿刺的待试菌，以较大量穿刺接种于明胶高层约接种于明胶高层约2/3深度。于深度。于2022培养培养714天。明胶高层亦可培养于天。明胶高层亦可培养于361。另取。另取一支未接种的培养基一同培养作对照，每天取一支未接种的培养基一同培养作对照，每天取出两支试管，放入冰箱放置出两支试管，放入冰箱放置2030min后，再观后，再观察结果。察结果。第46页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n明胶液化，为阳性，+。n明胶凝固，为阴性，-。第47页，此课

23、件共96页哦复习题1、简述靛基质试验的原理，写出其试验方法、结果的记录、简述靛基质试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项和注意事项2、简述硫化氢试验的原理，写出其试验结果的记录和注意、简述硫化氢试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项事项3、简述尿素酶试验的原理，写出其试验方法、结果的记、简述尿素酶试验的原理，写出其试验方法、结果的记录录4、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试验管颜色变化过程和原理应试验管颜色变化过程和原理第48页，此课件共96页哦 四、四、有机酸盐和铵盐的利用试验有机酸盐和铵盐的利用试验枸橼酸

24、盐利用试验丙二酸盐利用试验第49页，此课件共96页哦（一）（一）枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验1、原理：、原理：某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼分解枸橼(柠檬柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。阳性。第50页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法 挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培养基斜面上挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培养基斜面上密集划线接种，在密集划线接种，在361 培养

25、培养14天，每天天，每天观察结果。观察结果。第51页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n斜面有菌苔生长，斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳色或深蓝色，为阳性，记性，记+；n无菌苔生长，培养无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，基斜面仍为绿色者，为阴性，记为阴性，记-阳性+第52页，此课件共96页哦（二）（二）丙二酸盐利用试验丙二酸盐利用试验1.原理原理:某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培使培养基变为碱性养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为

26、培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。阳性，以此鉴别细菌。第53页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法 取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养基上，于钠培养基上，于361 培养培养48h，观察结，观察结果。果。第54页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n培养基由草绿色变成蓝色培养基由草绿色变成蓝色,为阳性为阳性,记记+;n培养基无颜色变化培养基无颜色变化,为阴性为阴性,记记-第55页，此课件共96页哦五、五、呼吸酶类试验呼吸酶类试验F过氧化氢酶试验F硝酸盐还原试验F氰化钾试验第56页，此课件共96页哦（一）（一）过氧化氢酶试验过

27、氧化氢酶试验1.原理：原理：某些细菌可分泌过氧化氢酶，加某些细菌可分泌过氧化氢酶，加入过氧化氢后，可将过氧化氢分解生入过氧化氢后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，即为阳性反成水和氧气，产生气泡，即为阳性反应。应。第57页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法n挑取固体培养基上的新鲜菌落一环，置于洁挑取固体培养基上的新鲜菌落一环，置于洁净玻片上（或试管），滴加净玻片上（或试管），滴加3%过氧化氢液过氧化氢液数滴，或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧数滴，或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧化氢液，立即观察结果。化氢液，立即观察结果。第58页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n

28、产生气泡者，为阳性，记产生气泡者，为阳性，记+n不产生气泡者，为阴性，记不产生气泡者，为阴性，记-第59页，此课件共96页哦（二）硝酸盐还原试验（二）硝酸盐还原试验1、原理：某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可、原理：某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚将硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再与作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再与-萘萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色反应，为胺作用，生成红色的化合物，呈红色反应，为阳性反应。阳性反应。第60页，此课件

29、共96页哦试剂nA、对氨基苯磺酸试剂nB、-萘胺试剂萘胺试剂第61页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法n取待检菌新鲜纯培养物，在硝酸盐培养基上取待检菌新鲜纯培养物，在硝酸盐培养基上接种，在接种，在361 培养培养14天，每天取天，每天取2mL培养液培养液,加入加入A、B试剂的等量混合物各二滴混试剂的等量混合物各二滴混匀，立即观察结果。匀，立即观察结果。第62页，此课件共96页哦3、结果观察与记录n呈现红色，为阳性，呈现红色，为阳性，记记+n若无红色出现，为阴若无红色出现，为阴性，记性，记-第63页，此课件共96页哦（四）（四）氰化钾试验氰化钾试验1.原理原理：氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制

30、剂氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,可与呼可与呼吸酶作用使酶失去活性吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌的生长抑制细菌的生长,但但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长长,以此鉴别细菌以此鉴别细菌.第64页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法n 取培养2024h的营养肉汤培养液或菌落1环，接种至对照培养基及氰化钾培养基内，立即以橡胶塞塞紧，361 培养24 48h，观察结果。第65页，此课件共96页哦3、结果观察与记录、结果观察与记录n对照管有菌生长，对照管有菌生长，试验管有菌生长试验管有菌生长为阳性，记为阳性，记+。n对照管有菌生长，对照管有菌生长，试验管

31、无菌生长试验管无菌生长为阴性。记为阴性。记-。第66页，此课件共96页哦 六、毒性酶类试验六、毒性酶类试验F溶血试验溶血试验F卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验F血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验第67页，此课件共96页哦（一）（一）溶血试验溶血试验1、原理：、原理：某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。第68页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法有二种：有二种：n平板法平板法n试管法试管法第69页，此课件共96页哦平板法平板法

32、将培养物接种于血平板培养基上，将培养物接种于血平板培养基上，361 培养培养24 48h，观察结果。，观察结果。第70页，此课件共96页哦溶血试验的溶血类型及现象溶血试验的溶血类型及现象（1）（甲型）溶血（甲型）溶血:菌落周围出现较窄的半菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。透明的草绿色溶血环。（2）（乙型）溶血（乙型）溶血:菌落周围出现较宽的菌落周围出现较宽的透明溶血环。透明溶血环。（3）（-丙型）溶血丙型）溶血:菌落周围无溶血环。菌落周围无溶血环。第71页，此课件共96页哦甲型（甲型（-）溶血）溶血乙型（乙型（-）溶）溶血血丙型（丙型（-）溶血溶血第72页，此课件共96页哦（二）（二）血

33、浆凝固酶试验血浆凝固酶试验1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象浆发生凝固现象,为阳性。为阳性。第73页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法（1）玻片法：）玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与另一端滴

34、加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，生理盐水和血浆混合，5 min内内,如血浆内出现团如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性阳性;如两者呈均匀混浊，无凝则为阴性。如两者呈均匀混浊，无凝则为阴性。第74页，此课件共96页哦有凝块有凝块均匀混均匀混浊浊血浆血浆生理盐水生理盐水血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验第75页，此课件共96页哦 （2）试管法）试管法 取灭菌小试管取灭菌小试管3支支，各加入血浆，各加入血浆0.5ml，1支加入被检菌支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml；

35、其余；其余2支支作对照管，作对照管，1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液或菌悬液0.5ml作阳性对照作阳性对照;另另1支加入营养肉汤或支加入营养肉汤或0.9氯化钠溶氯化钠溶0.5ml作空白对照。将作空白对照。将3管同时放管同时放37温箱或温箱或水浴中培养，每水浴中培养，每0.5 h观察一次，观察一次，4 h 内无凝固现象者，内无凝固现象者，观察直至观察直至24小时。小时。第76页，此课件共96页哦阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应不凝固不凝固少量、零少量、零散凝固散凝固明显的块明显的块状凝固状凝固巨大块巨大块凝固凝固完全凝固，完全凝固，倒置不流动倒置

36、不流动第77页，此课件共96页哦3、试管法的结果观察与记录、试管法的结果观察与记录n空白对照管的血空白对照管的血浆流动自如，阳浆流动自如，阳性对照管血浆凝性对照管血浆凝固，试验管血浆固，试验管血浆凝固者为阳性；凝固者为阳性；n均无凝固则为阴均无凝固则为阴性。性。第78页，此课件共96页哦七、七、三糖铁（三糖铁（TSI）试验）试验第79页，此课件共96页哦1、三糖铁试验的原理、三糖铁试验的原理 如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产养基全部变黄；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先

37、变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。类不被氧化，仍保持黄色。如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底部变黑。部变黑。第80页，此课件共96页哦2、试验方法、试验方法 以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置

38、刺接种并涂布于斜面，置361培养培养1824h，观察结果。观察结果。第81页，此课件共96页哦制好的培制好的培养基养基对照管对照管斜面红色，底面斜面红色，底面黄色黄色培养基全培养基全黄色黄色斜面、底部斜面、底部黄色，并产黄色，并产生生H2S斜面红色，底部斜面红色，底部黄色，产生黄色，产生H2S底面黄色，并产生底面黄色，并产生CO2第82页，此课件共96页哦思考题n提问：提问：n志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生生H2S。在培养基上应该产生什么现象？。在培养基上应该产生什么现象？n大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多

39、数能分解乳糖，不大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生产生H2S。在培养基上应该是什么现象？。在培养基上应该是什么现象？1.沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气，在培养基上应该是什么现象？多数产气，在培养基上应该是什么现象？第83页，此课件共96页哦复习题1、什么是生化试验、什么是生化试验?2、做生化试验要注意哪些事项？、做生化试验要注意哪些事项？3、简述糖酵解试验的原理，写出其试验方法和结果的记录、简述糖酵解试验的原理，写出其试验方法和结果的记录4、简述甲基红试验（、简述甲基红试验（MR）的原理，写出其

40、试验方法和结果的记录）的原理，写出其试验方法和结果的记录5、简述靛基质（、简述靛基质（Imdole）(吲哚吲哚)试验的原理，写出其试验方试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项法、结果的记录和注意事项6、简述硫化氢（、简述硫化氢（H2S）试验的原理，写出其试验结果的记录和注意）试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项事项第84页，此课件共96页哦7、简述尿素酶（、简述尿素酶（Urease）试验的原理，写出其试验方法、结）试验的原理，写出其试验方法、结果的记录果的记录8、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试验管颜

41、色变化过程和原理验管颜色变化过程和原理9、简述氰化钾试验的原理，写出其试验方法、结果的记录、简述氰化钾试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项和注意事项第85页，此课件共96页哦10、写出溶血试验的溶血类型及现象11、简述链激酶试验的原理，12、简述血浆凝固酶试验的原理，并写出玻片法的试验方法13、简述三糖铁（TSI）试验的试验的原理第86页，此课件共96页哦三、血清学试验三、血清学试验血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反

42、应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体结合反应补体结合反应第87页，此课件共96页哦凝集反应n直接凝集反应第88页，此课件共96页哦方法步骤方法步骤:、于洁净玻片的一端加诊断血清、于洁净玻片的一端加诊断血清1 1滴，另一端滴，另一端加生理盐水加生理盐水1 1滴作为阴性对照。滴作为阴性对照。、用接种环取待检菌或血细胞的悬液分别涂于、用接种环取待检菌或血细胞的悬液分别涂于诊断血清和生理盐水中。诊断血清和生理盐水中。、轻轻转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟，、轻轻转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟，观察结果。观察结果。第89页，此课件共96页哦抗血清抗血清生理生理盐水盐水待检待检菌菌凝集者为凝集者为+未凝集未凝集第90页，此课件共96页哦 凝集反应n间接凝集反应第91页，此课件共96页哦 沉淀反应n环状沉淀反应n絮状沉淀反应第92页，此课件共96页哦 沉淀反应n琼脂扩散试验第93页，此课件共96页哦 补体结合反应补体结合反应第94页，此课件共96页哦第95页，此课件共96页哦感谢大家观看感谢大家观看第96页，此课件共96页哦